Agar EMB kontra agar MacConkey: l-għażla u l-interpretazzjoni tal-midja

Student jagħmel streak tal-istess kampjun tal-ilma fuq żewġ pjanċi. Fuq waħda jidhru kolonji skuri bi tleqqija metallika ħadra. Fuq l-oħra jidhru kolonji roża jgħajtu b'halo mċajpar. Iż-żewġ pjanċi ġew inokulati mill-istess tubu, inkubati maġenb xulxin, u nqraw fl-istess ħin. L-istudent jistaqsi liema pjanċa hija t-tajba.

Iż-żewġ pjanċi huma tajbin. Huma jwieġbu mistoqsijiet differenti. Il-konfużjoni tiġi meta ż-żewġ midja jiġu trattati bħala skrins interkambjabbli għall-batterji intestinali. Għandhom skop komuni, jiġifieri li jagħżlu organiżmi enteriċi Gram-negattivi u jisseparaw il-fermentaturi tal-lattożju minn dawk li ma jiffermentawhx, iżda jilħqu dan l-iskop b'kimika differenti u b'loġika viżiva differenti. Ladarba tifhem iż-żewġ kunċetti sottostanti, l-għażla tal-pjanċa u l-qari tal-kolonji jsiru rutina.

It-tweġiba fil-qosor

L-agar EMB juża żewġ żebgħat, eosin Y u methylene blue, li jwettqu żewġ funzjonijiet: irażżnu t-tkabbir ta' organiżmi Gram-pożittivi u jippreċipitaw madwar produtturi qawwija tal-aċidu biex joħolqu kolonji skuri, klassikament bi tleqqija metallika ħadra għal Escherichia coli. L-agar MacConkey jifred il-funzjonijiet: l-imluħa tal-bili flimkien ma' crystal violet irażżnu l-Gram-pożittivi, il-lattożju jipprovdi s-sottostrat għall-fermentazzjoni, u neutral red jindika l-aċidu permezz ta' kolonji roża jew ħomor. Jekk il-kompitu huwa dimostrazzjoni preżuntiva viżwalment ċara ta' E. coli, EMB għandu vantaġġ. Jekk il-kompitu huwa separazzjoni ċara bejn fermentaturi roża u dawk bla kulur, speċjalment fi flussi tax-xogħol tal-ippurgar jew tal-awrina, MacConkey normalment ikun aktar faċli biex jinqara. L-ebda pjanċa ma tidentifika organiżmu bil-kulur biss.

EMB: żebgħat li jagħżlu u jindikaw fl-istess ħin

Il-kunċett ta' EMB jiġbor l-għażla u l-indikazzjoni fl-istess molekuli. Il-protokoll tal-ASM għall-agar eosin methylene blue jiddeskrivi EMB bħala kemm selettiv kif ukoll differenzjali, fejn il-par ta' żebgħat jinibixxi ħafna organiżmi Gram-pożittivi filwaqt li l-fermentazzjoni tal-lattożju tixpruna l-assorbiment u l-preċipitazzjoni taż-żebgħa. Formulazzjoni standard Levine fiha peptone, lactose, phosphate, eosin Y, methylene blue, u agar, kif elenkat fil-metodu FDA BAM għall-agar Levine EMB. Innota li riċetti EMB aktar antiki xi drabi kienu jżidu sucrose flimkien ma' lactose, filwaqt li Levine EMB fih lactose mingħajr sucrose, għalhekk irreġistra liema formulazzjoni għandu fil-ħażna l-laboratorju tiegħek.

Il-qari ta' EMB ifisser li taqra l-imġiba taż-żebgħa. Fermentazzjoni qawwija tal-lattożju tipproduċi biżżejjed aċidu biex tikkawża preċipitazzjoni qawwija taż-żebgħa, u b'hekk E. coli jkollha ċentri blu skur suwed u, fil-każ klassiku, tleqqija metallika ħadra fid-dawl rifless. Fermentaturi aktar dgħajfa bħal Enterobacter u Klebsiella tipikament jikbru bħala kolonji mukojdi minn roża għal vjola mingħajr dik it-tleqqija. Organiżmi li ma jiffermentawx bħal Salmonella, Shigella, u Proteus ġeneralment jikbru bħala kolonji bla kulur jew trasluċidi għax ma jipproduċux iż-żieda qawwija fl-aċidu li tippreċipita ż-żebgħat. Il-Gram-pożittivi normalment jiġu mrażżna, għalkemm il-livell ta' trażżin ivarja skont ir-razza u l-prodott. Il-kimika sħiħa tal-preparazzjoni taż-żebgħa, inkluż għaliex methylene blue jaġixxi bħala żebgħa katjonika, tappartjeni għal diskussjoni separata dwar il-formulazzjonijiet taż-żebgħat, u l-kuntest ġenerali tal-mikroskopija jinsab f'atlas tal-metodi tat-tbajja'. Dan l-artiklu jibqa' ffukat fuq l-għażla u l-qari tal-pjanċi.

Il-figura ta' hawn fuq hija illustrattiva. Turi l-loġika viżiva li għandek tistenna: kolonji skuri bi tleqqija flimkien ma' tipi mukojdi roża u tipi ċari fuq EMB, meta mqabbla ma' tipi roża kontra tipi ċari fuq MacConkey. Użaha biex titgħallem il-mudell, imbagħad ikkonferma kull interpretazzjoni ma' kontrolli fotografati u mal-insert tal-prodott għall-mezz eżatt li għandek fuq il-bank tax-xogħol.

MacConkey: funzjonijiet separati, regola viżiva aktar sempliċi

Il-kunċett ta' MacConkey jassenja kull funzjoni lil ingredjent separat. Il-protokoll tal-ASM għall-agar MacConkey jippreżenta l-istess qafas selettiv u differenzjali, u l-metodu FDA BAM għall-agar MacConkey jelenka l-komponenti funzjonali: peptones, lactose, bile salts, salt, neutral red, crystal violet, u agar. Bile salts flimkien ma' crystal violet jagħżlu kontra l-Gram-pożittivi. Lactose jipprovdi s-sottostrat tal-fermentazzjoni. Neutral red jaġixxi bħala indikatur tal-pH, u jsir minn roża għal aħmar fejn jifforma l-aċidu, xi drabi bi preċipitat tal-bili madwar fermentaturi qawwija.

Ir-regola tal-qari hija intenzjonalment sempliċi: roża tfisser fermentatur tal-lattożju, filwaqt li bla kulur jew ċar tfisser organiżmu li ma jiffermentax. E. coli tidher minn roża għal ħamra, ħafna drabi b'halo ta' preċipitat tal-bili. Klebsiella u Enterobacter jidhru roża u spiss mukojdi minħabba l-kapsuli tagħhom. Salmonella, Shigella, Proteus, u ħafna baċilli Gram-negattivi oħra jidhru bla kulur. Benefiċċju addizzjonali huwa importanti fil-laboratorji tat-tagħlim: bile salts ġeneralment inaqqsu s-swarming ta' Proteus, għalhekk ikun aktar faċli li jinkisbu kolonji iżolati fuq MacConkey milli fuq midja mhux selettiva, għalkemm it-trażżin mhuwiex assolut u jeżistu alternattivi mingħajr melħ fejn il-kontroll tas-swarming ikun il-prijorità.

Ir-raġuni molekulari għaliex iż-żebgħat jaġixxu b'dan il-mod hija marbuta maċ-ċarġ u mal-istruttura. Methylene blue huwa żebgħa phenothiazine katjonika li l-istruttura u l-proprjetajiet tagħha jispjegaw l-affinità tagħha għal uċuħ batteriċi aċidużi, l-istess affinità li taħdem meta tippreċipita f'żoni aċidużi fuq EMB.

Tqabbil fil-qosor

Aqra t-tabella bħala proċedura għat-teħid ta' deċiżjoni. Meta l-eżerċizzju jeħtieġ li l-istudenti jaraw gradjent fis-saħħa tal-fermentazzjoni b'punt finali wieħed impressjonanti, EMB jurih. Meta l-eżerċizzju jeħtieġ separazzjoni binarja rapida qabel konferma bijokimika, MacConkey jurih.

Liema mezz għal liema kampjun

Għal eżerċizzji tal-ilma mmirati lejn rikonoxximent preżuntiv ta' koliformi fekali jew E. coli, EMB huwa attraenti għax it-tleqqija hija viżwalment distintiva. MacConkey ukoll jakkomoda Gram-negattivi enteriċi u storikament intuża għall-ilma, iżda l-ebda waħda mill-pjanċi ma tissostitwixxi metodu regolatorju għall-ilma, li jista' jispeċifika midja bħal modified mTEC jew MI skont it-test. Iċċekkja l-metodu li l-laboratorju tiegħek huwa meħtieġ li jsegwi.

Għal separazzjonijiet tat-tip tal-ippurgar bejn fermentaturi u dawk li ma jiffermentawx, MacConkey ġeneralment huwa l-aktar utli mit-tnejn. Xogħol prattiku tal-ippurgar għal Salmonella jew Shigella normalment iżid midja enteriċi aktar selettivi bħal XLD jew Hektoen enteric minflok ma jiddependi fuq MacConkey waħdu.

Għal tagħlim tat-tip tal-awrina li jimita fluss tax-xogħol kliniku, uża MacConkey flimkien ma' blood agar. MacConkey jipprovdi s-separazzjoni bikrija tal-Gram-negattivi filwaqt li blood agar jirkupra organiżmi li MacConkey irażżan. Din il-kombinazzjoni hija standard fid-deskrizzjonijiet kliniċi tat-twaqqif tal-kultura tal-awrina.

Għal tagħlim purament kunċettwali, uża t-tnejn. EMB jgħallem li s-saħħa tal-fermentazzjoni hija importanti u li molekula waħda tista' taqdi żewġ funzjonijiet. MacConkey jgħallem disinn modulari: is-selettur, is-sottostrat, u l-indikatur jinżammu separati. Studenti li jagħmlu streak ta' E. coli magħrufa, Klebsiella aerogenes magħrufa, u Salmonella magħrufa maġenb xulxin fuq iż-żewġ midja rari jerġgħu jħawdu ż-żewġ loġiki.

Żbalji fil-qari li jirrepetu ruħhom kull term

L-aktar żball komuni huwa l-identifikazzjoni bil-kulur biss. Roża fuq MacConkey jista' jkun E. coli, Klebsiella, Enterobacter, jew fermentatur ieħor. Bla kulur jista' jkun Salmonella, Shigella, Proteus, Pseudomonas, jew organiżmu ieħor li ma jiffermentax. Il-kulur huwa fenotip ta' skrining li jiggwida xogħol ta' konferma bħal Gram stain, oxidase, pannelli bijokimiċi, jew identifikazzjoni bl-istrumenti, mhux isem ta' speċi.

It-tieni żball huwa li tingħata importanza żejda lil nuqqas ta' tleqqija. Xi kolonji ġenwini ta' E. coli, speċjalment dawk iżolati, jipproduċu ftit jew xejn tleqqija metallika fuq EMB. In-nuqqas ta' tleqqija ma jeskludix E. coli, u l-preżenza ta' tleqqija ma tippruvahiex. Ittratta t-tleqqija bħala indikazzjoni preżuntiva.

It-tielet żball huwa t-tqabbil ta' pjanċi ta' etajiet differenti. Fermentaturi tal-lattożju li jaġixxu tard jistgħu jsiru roża fuq MacConkey wara inkubazzjoni mtawla, u dan iċajpar is-separazzjoni ċara bejn fermentatur u mhux fermentatur. Aqra fil-ħin speċifikat mil-laboratorju u rreġistra l-ħin ta' inkubazzjoni mar-riżultat.

Ir-raba' żball huwa li tkabbir imħallat jinqara bħala organiżmu wieħed. Kolonja roża ħdejn kolonja bla kulur tirrappreżenta żewġ fenotipi, mhux wieħed intermedju. Agħżel kolonji iżolati sew u aħdem kull morfotip separatament. In-nisġa mukojda toħloq nassa simili: kemm Klebsiella kif ukoll Enterobacter jistgħu jidhru mukojdi, għalhekk kapsula waħedha qatt ma tiddetermina l-isem. L-organiżmu li darba kien mgħallem bħala Enterobacter aerogenes issa huwa kklassifikat bħala Klebsiella aerogenes, u dan jispjega għaliex charts aktar antiki u tikketti aktar ġodda jidhru li ma jaqblux.

Kontrolli u regola finali

Uża kontrolli fotografati jew friski f'kull sessjoni: E. coli għar-reazzjoni ta' fermentatur qawwi, Klebsiella aerogenes għal fermentazzjoni mukojda mingħajr it-tleqqija klassika, razza ta' Salmonella għar-reazzjoni bla kulur ta' organiżmu li ma jiffermentax, u Staphylococcus aureus biex tikkonferma t-trażżin tal-Gram-pożittivi fuq il-prodott eżatt tiegħek. Qabbel in-numri tar-razez u l-kriterji ta' aċċettazzjoni mal-insert tal-manifattur, għax is-selettività tinbidel skont il-kontenut ta' bile, crystal violet, u żebgħa.

Ftakar sentenza waħda fuq il-bank tax-xogħol. EMB juża żebgħat li kemm jagħżlu kif ukoll jindikaw, u b'hekk jipprovdi sinjal impressjonanti ta' E. coli bi tpattija għal qari aktar sottili. MacConkey jifred l-għażla mill-indikazzjoni, u b'hekk jipprovdi separazzjoni ċara bejn roża u ċar bi tpattija għal inqas dettall dwar il-fermentazzjoni. Agħżel il-mezz li l-kunċett tiegħu jaqbel mal-mistoqsija, ikkonferma l-kulur bit-testijiet xierqa, u ż-żewġ pjanċi jieqfu jikkompetu u jibdew jaħdmu flimkien.