EMB агар ба MacConkey агар: орчин сонгох ба үр дүнг тайлбарлах

Оюутан нэг усны дээжийг хоёр ялтсан орчинд зурваслан тарив. Нэг дээр нь ногоон металл гялбаатай бараан колони үүсэв. Нөгөө дээр нь бүдэг хүрээтэй тод ягаан колони үүсэв. Хоёр ялтсыг нэг хуруу шилнээс тарьж, зэрэгцүүлэн инкубацалж, ижил цагт уншсан. Оюутан аль ялтас нь зөв бэ гэж асууна.

Хоёулаа зөв. Тэд өөр өөр асуултад хариулж байна. Эдгээр хоёр орчныг гэдэсний бактерийг илрүүлэх харилцан орлуулж болох скрининг гэж үзэхэд будлиан үүсдэг. Аль аль нь Gram сөрөг гэдэсний организмуудыг сонгон ургуулж, лактоз ферментлэгчдийг ферментлэдэггүйгээс ялгах зорилготой боловч энэ зорилгыг өөр өөр хими, өөр өөр харааны зарчмаар хэрэгжүүлдэг. Суурь хоёр ойлголтыг ялгаж хармагц орчин сонгох, колони унших ажил хэвшмэл болдог.

Товч хариулт

EMB агар нь eosin Y ба methylene blue гэсэн хоёр будгийг ашигладаг бөгөөд эдгээр нь давхар үүрэгтэй: Gram эерэг өсөлтийг дарангуйлж, хүчтэй хүчил үүсгэгчдийн эргэн тойронд тунадасжин бараан колони үүсгэдэг; Escherichia coli-ийн хувьд сонгодог байдлаар металл ногоон гялбаа ажиглагдана. MacConkey агар үүргүүдийг тусгаарладаг: цөсний давс болон crystal violet нь Gram эерэгийг дарангуйлна, лактоз нь ферментацийн субстрат болно, neutral red нь хүчил үүссэнийг ягаан эсвэл улаан колониор илтгэнэ. Хэрэв зорилго нь E. coli-ийг таамаглан таних тод харагдах үзүүлэн бол EMB тохиромжтой. Харин лактоз ферментлэгчийг ферментлэдэггүйгээс ягаан ба өнгөгүй байдлаар цэвэрхэн ялгах шаардлагатай бол, ялангуяа өтгөн эсвэл шээсний ажлын урсгалд MacConkey ихэвчлэн уншихад хялбар. Аль ч ялтас өнгөөр нь дангаар организмын танилтыг тогтоохгүй.

EMB: нэгэн зэрэг сонгодог, мэдээлдэг будгууд

EMB-ийн зарчим нь сонголт ба индикаторын үүргийг ижил молекулуудад нэгтгэдэг. ASM eosin methylene blue agar protocol нь EMB-ийг сонгомол бөгөөд ялган таних орчин гэж тодорхойлж, будгийн хослол нь олон Gram эерэг организмыг дарангуйлдаг бол лактозын ферментаци нь будгийн шингээлт, тунадасжилтыг өдөөдөг гэж тайлбарладаг. Стандарт Levine найрлагад peptone, lactose, phosphate, eosin Y, methylene blue, agar ордог бөгөөд үүнийг FDA BAM method for Levine EMB agar жагсаасан. Хуучны зарим EMB жор лактозын хамт сахароз агуулдаг байсан бол Levine EMB нь лактозтой боловч сахарозгүй байдаг тул танай лабораторид ашиглаж буй найрлагыг тэмдэглэж байх хэрэгтэй.

EMB-ийг унших гэдэг нь будгийн төлөвийг унших гэсэн үг. Лактозыг эрчимтэй ферментлэхэд хангалттай хэмжээний хүчил үүсч, будгийг ихээр тунадасжуулснаар E. coli-ийн колони бараан хөх-хар төвтэй болж, сонгодог тохиолдолд туссан гэрэлд металл ногоон гялбаатай харагдана. Enterobacter болон Klebsiella зэрэг сул ферментлэгчид ихэвчлэн гялбаагүй, ягаанаас нил ягаан хүртэлх өнгөтэй, салстлаг колони үүсгэнэ. Salmonella, Shigella, Proteus зэрэг ферментлэдэггүй организмууд будгийг тунадасжуулах хэмжээний хүчил огцом үүсгэдэггүй тул ерөнхийдөө өнгөгүй эсвэл тунгалаг колони үүсгэнэ. Gram эерэгүүд ихэвчлэн дарангуйлагддаг ч дарангуйллын хэмжээ нь омог болон бүтээгдэхүүнээс хамаарч өөрчлөгдөнө. Будгийн бэлтгэлийн нарийн хими, тэр дундаа methylene blue яагаад анхнаасаа катион будаг шиг үйлчилдгийг тусдаа будгийн найрлагын хэлэлцүүлэгт авч үзэх нь зохистой бөгөөд микроскопийн ерөнхий хүрээг будалтын аргуудын атлас-аас үзэж болно. Энэ өгүүлэл зөвхөн ялтсан орчны сонголт ба уншилтад төвлөрнө.

Дээрх зураг нь тайлбарлах зориулалттай. Энэ нь хүлээгдэх харааны логикийг харуулна: EMB дээр бараан гялбаатай колони, ягаан салстлаг төрөл, цайвар төрөл; MacConkey дээр ягаан ба цайвар төрлүүд. Үүгээр хэв шинжийг сурч, дараа нь бүх дүгнэлтийг гэрэл зурагтай хяналт болон ажлын ширээн дээрх яг тухайн орчны бүтээгдэхүүний заавартай тулган баталгаажуул.

MacConkey: тусгаарласан үүргүүд, илүү энгийн харааны дүрэм

MacConkey-ийн зарчим нь үүрэг бүрийг тусдаа найрлагад оноодог. ASM MacConkey agar protocol мөн сонгомол ба ялган таних гэсэн хүрээг тайлбарладаг бөгөөд FDA BAM method for MacConkey agar нь үндсэн бүрэлдэхүүнийг жагсаадаг: peptones, lactose, bile salts, salt, neutral red, crystal violet, agar. Цөсний давс болон crystal violet нь Gram эерэгүүдийг дарангуйлна. Лактоз нь ферментацийн субстрат өгнө. Neutral red нь pH-ийн индикатор болж, хүчил үүссэн хэсэгт ягаанаас улаан өнгөтэй болдог бөгөөд хүчтэй ферментлэгчдийн эргэн тойронд заримдаа цөс тунадасжина.

Унших дүрэм нь зориуд энгийн: ягаан бол лактоз ферментлэгч, өнгөгүй эсвэл цайвар бол ферментлэдэггүй. E. coli ягаанаас улаан өнгөтэй харагдаж, ихэвчлэн цөсний тунадасны хүрээтэй байна. Klebsiella болон Enterobacter нь ягаан, капсулын улмаас ихэвчлэн салстлаг харагдана. Salmonella, Shigella, Proteus болон бусад олон Gram сөрөг савханцар өнгөгүй харагдана. Сургалтын лабораторид нэг нэмэлт давуу тал бий: цөсний давс Proteus-ийн тархмал ургалтыг ерөнхийдөө бууруулдаг тул сонгомол бус орчноос илүүтэй MacConkey дээр тусгаар колони авахад хялбар байдаг. Гэхдээ дарангуйлал бүрэн биш бөгөөд тархмал ургалтыг хянах нь гол зорилго бол давсгүй хувилбарууд байдаг.

Будгууд яагаад ийм байдлаар үйлчилдгийн молекулын шалтгаан нь цэнэг ба бүтэцтэй холбоотой. Methylene blue нь катион phenothiazine будаг бөгөөд түүний бүтэц ба шинж чанар нь хүчиллэг бактерийн гадаргууд татагдах хандлагыг тайлбарладаг; EMB дээр хүчиллэг бүсэд тунадасжихад мөн энэ хандлага үйлчилнэ.

Хураангуй харьцуулалт

Хүснэгтийг шийдвэр гаргах дараалал гэж унш. Дасгалын зорилго нь ферментацийн хүчний шатлалыг нэг тод төгсгөлийн үр дүнтэйгээр харуулах бол EMB үүнийг сайн үзүүлнэ. Харин биохимийн баталгаажуулалтын өмнө хурдан хоёр ангилалд хуваах шаардлагатай бол MacConkey үүнийг харуулна.

Аль дээжид аль орчин тохирох вэ

Өтгөний гаралтай колиформ эсвэл E. coli-ийг таамаглан танихад чиглэсэн усны дасгалд EMB сонирхол татахуйц, учир нь гялбаа нь харааны хувьд онцгой ялгардаг. MacConkey мөн гэдэсний Gram сөрөг организмуудад хэрэглэгддэг бөгөөд усны шинжилгээнд түүхэн хэрэглээтэй боловч аль ч ялтас нь зохицуулалтын шаардлагатай усны аргыг орлохгүй. Тухайн шинжилгээнээс хамаарч modified mTEC эсвэл MI зэрэг орчныг заасан байж болно. Танай лаборатори мөрдөх ёстой аргыг шалга.

Өтгөнтэй төстэй дээжээс ферментлэгчийг ферментлэдэггүйгээс ялгах ажилд MacConkey нь ерөнхийдөө энэ хоёрын илүү ашигтай сонголт. Salmonella эсвэл Shigella-ийн практик өтгөний шинжилгээнд MacConkey-д дангаар найдахын оронд XLD эсвэл Hektoen enteric зэрэг илүү сонгомол гэдэсний орчныг ихэвчлэн нэмдэг.

Эмнэлзүйн ажлын урсгалыг дуурайсан шээсний сургалтад MacConkey-г blood agar-тай хослуул. MacConkey нь Gram сөрөг организмыг эрт ангилахад тусалдаг бол blood agar нь MacConkey-ийн дарангуйлдаг организмуудыг сэргээн ургуулдаг. Энэ хослолыг шээсний өсгөврийн тохиргооны эмнэлзүйн тайлбаруудад стандарт байдлаар дурддаг.

Зөвхөн ойлголт заах бол хоёуланг нь ашигла. EMB нь ферментацийн хүч чухал гэдгийг, мөн нэг молекул хоёр үүрэг гүйцэтгэж болохыг заадаг. MacConkey нь модульчлагдсан загварыг заана: selector, substrate, reporter тусдаа. Мэдэгдэж буй E. coli, мэдэгдэж буй Klebsiella aerogenes, мэдэгдэж буй Salmonella-г хоёр орчин дээр зэрэгцүүлэн тарьсан оюутнууд эдгээр хоёр логикийг дахин андуурах нь ховор.

Улирал бүр давтагддаг уншилтын алдаа

Хамгийн түгээмэл алдаа нь зөвхөн өнгөөр нь танилт тогтоох явдал. MacConkey дээрх ягаан колони E. coli, Klebsiella, Enterobacter эсвэл өөр ферментлэгч байж болно. Өнгөгүй колони Salmonella, Shigella, Proteus, Pseudomonas эсвэл өөр ферментлэдэггүй организм байж болно. Өнгө нь species-ийн нэр биш, харин Gram stain, oxidase, biochemical panels эсвэл instrument identification зэрэг баталгаажуулах ажлыг чиглүүлдэг скрининг фенотип юм.

Хоёр дахь алдаа нь гялбаа байхгүйг хэт тайлбарлах явдал. Зарим жинхэнэ E. coli колони, ялангуяа тусгаарлагдсан колониуд EMB дээр металл гялбаа бага эсвэл огт үүсгэхгүй байж болно. Гялбаа байхгүй нь E. coli-ийг үгүйсгэхгүй, гялбаа байгаа нь ч батлахгүй. Гялбааг таамаглах шинж гэж үз.

Гурав дахь алдаа нь өөр өөр насны ялтсуудыг харьцуулах явдал. Удаан лактоз ферментлэгчид удаан инкубацийн дараа MacConkey дээр ягаан болж болох тул ферментлэгч ба ферментлэдэггүй гэсэн цэвэр ялгаа бүдгэрнэ. Лабораториос заасан цагт уншиж, үр дүнтэй хамт инкубацийн хугацааг тэмдэглэ.

Дөрөв дэх алдаа нь холимог ургалтыг нэг организм гэж унших явдал. Ягаан колонийн хажуу дахь өнгөгүй колони нь завсрын нэг фенотип биш, хоёр фенотипийг илэрхийлнэ. Сайн тусгаарлагдсан колони сонгон авч, морфотип бүрийг тусад нь ажиллуул. Салстлаг бүтэц мөн төстэй урхи бий болгодог: Klebsiella болон Enterobacter хоёулаа салстлаг харагдаж болох тул зөвхөн капсул нэрийг тогтоож чадахгүй. Өмнө нь Enterobacter aerogenes гэж заадаг байсан организм одоо Klebsiella aerogenes гэж ангилагддаг бөгөөд үүгээр хуучин хүснэгт ба шинэ шошго яагаад зөрүүтэй мэт харагддагийг тайлбарлаж болно.

Хяналтууд ба төгсгөлийн дүрэм

Хичээл бүрт гэрэл зурагтай эсвэл шинэхэн хяналт ажиллуул: хүчтэй ферментлэгч урвалын хяналтад E. coli, сонгодог гялбаагүй салстлаг ферментацийн хяналтад Klebsiella aerogenes, өнгөгүй ферментлэдэггүй урвалын хяналтад Salmonella-ийн омог, мөн яг таны ашиглаж буй бүтээгдэхүүн дээр Gram эерэг дарангуйллыг баталгаажуулахын тулд Staphylococcus aureus. Сонгомол чанар нь цөс, crystal violet, будгийн агууламжаас хамаарч өөрчлөгддөг тул омгийн дугаар болон хүлээн зөвшөөрөх шалгуурыг үйлдвэрлэгчийн заавартай тохируул.

Ажлын ширээн дээр нэг өгүүлбэр сана. EMB нь сонгох болон мэдээлэх хоёр үүргийг нэгэн зэрэг гүйцэтгэдэг будгууд ашигладаг тул илүү нарийн уншилтын оронд E. coli-ийн тод дохио өгдөг. MacConkey нь сонголт ба мэдээллийг тусгаарласнаар ферментацийн дэлгэрэнгүй мэдээлэл багатай ч ягаан ба цайвар гэсэн энгийн ялгалтыг өгдөг. Асуултдаа тохирох зарчимтай орчныг сонгож, өнгийг зохих шинжилгээгээр баталгаажуулбал хоёр ялтас хоорондоо өрсөлдөхөө больж, харин бие биеэ нөхөж эхэлнэ.