കൂടുതൽ ഓക്സിജൻ ഉപഭോഗം കൂടുതൽ ATP എന്നാണോ അർഥമാക്കുന്നത്? മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ പഠനങ്ങളിൽ നിന്നുള്ള പാഠങ്ങൾ

വേർതിരിച്ചെടുത്ത ഒരു മൈറ്റോകോൺഡ്രിയോൺ ഇന്ധനമുള്ള, എന്നാൽ ADP ഇല്ലാത്ത ഒരു അറയിൽ ഇരിക്കുന്നു. അത് സാവധാനത്തിൽ ഓക്സിജൻ ഉപയോഗിക്കുന്നു. ADP ചേർക്കുമ്പോൾ ഓക്സിജൻ ഉപഭോഗം പല മടങ്ങ് ഉയരുന്നു. ADP തീരുന്നതുവരെ കാത്തിരുന്നാൽ ഓക്സിജൻ ഉപഭോഗം വീണ്ടും താഴുന്നു. ഇന്ധനം മാറിയില്ല. ATP-യുടെ ആവശ്യകത മാത്രമാണ് മാറിയത്.

ഈ ലേഖനം ചർച്ച ചെയ്യുന്ന വ്യത്യാസം മുഴുവൻ ആ ചെറിയ സംഭവക്രമത്തിൽ അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു. ശ്വസനശൃംഖലയിലൂടെ ഓക്സിജനിലേക്ക് ഇലക്ട്രോണുകൾ എത്ര വേഗത്തിൽ ഒഴുകുന്നുവെന്നാണ് ഓക്സിജൻ ഉപഭോഗം അളക്കുന്നത്. ആ പ്രവാഹത്തിൽ എത്രത്തോളം ഉപയോഗയോഗ്യമായ ഊർജമായി പിടിച്ചെടുക്കപ്പെടുന്നു എന്നാണ് ATP ഉൽപ്പാദനം അളക്കുന്നത്. ഇവ രണ്ടിനും പൊതുവായ ഒരു ഇടനിലഘട്ടമുണ്ട്: മൈറ്റോകോൺഡ്രിയയുടെ ആന്തരിക സ്തരത്തിന് കുറുകെയുള്ള പ്രോട്ടോൺ ഗ്രേഡിയന്റ്. ഈ ഗ്രേഡിയന്റ് ATP സംശ്ലേഷണവുമായി എത്ര ദൃഢമായി ബന്ധിപ്പിക്കപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു എന്നതിനെ മാറ്റുന്ന എന്തിനും ഈ രണ്ട് അന്തിമ അളവുകളെയും വ്യത്യസ്ത ദിശകളിലേക്ക് നീക്കാനാകും. ഇവിടെ മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ ഒരു നല്ല പഠനസഹായിയാണ്, കാരണം അത് രണ്ടും ചെയ്യുന്നതായി കണ്ടെത്തിയിട്ടുണ്ട്: ചില പരീക്ഷണസജ്ജീകരണങ്ങളിൽ ATP-യ്ക്കൊപ്പം ഓക്സിജൻ ഉപയോഗവും ഉയർത്തുന്നു; മറ്റുള്ളവയിൽ ATP മാറ്റമില്ലാതെ തുടരുകയോ കുറയുകയോ ചെയ്യുമ്പോഴും ഓക്സിജൻ ഉപയോഗം ഉയർത്തുന്നു.

ഇലക്ട്രോൺ കൈമാറ്റത്തിന്റെ വിശാലമായ ചിത്രം ആദ്യം അറിയാൻ ആഗ്രഹിക്കുന്ന വായനക്കാർക്ക്, മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ എങ്ങനെ ശ്വസനശൃംഖലയിലൂടെ ഇലക്ട്രോണുകൾ കൈമാറുന്നു എന്നതിൽനിന്ന് തുടങ്ങാം. ആദ്യകാല ഓക്സിജൻ പരീക്ഷണങ്ങളിലെ പദാവലി അറിയാൻ ആഗ്രഹിക്കുന്നവർക്ക്, ആദ്യ ശ്വസന അളവുകൾ യഥാർഥത്തിൽ എന്താണ് കാണിച്ചതെന്ന് വായിക്കാം.

ശ്വസനം, ATP, അവയ്ക്കിടയിലെ ഗ്രേഡിയന്റ്

NADH, FADH2 എന്നിവയിൽനിന്നുള്ള ഇലക്ട്രോണുകൾ കോംപ്ലക്സുകൾ I, II എന്നിവയിൽ ശൃംഖലയിലേക്ക് പ്രവേശിക്കുന്നു. കോംപ്ലക്സ് III വഴി സൈറ്റോക്രോം c-യിലേക്കും തുടർന്ന് കോംപ്ലക്സ് IV വഴി ഓക്സിജനിലേക്കും അവ കടന്നുപോകുന്നു. കോംപ്ലക്സുകൾ I, III, IV എന്നിവയിൽ പുറത്തുവരുന്ന ഊർജം പ്രോട്ടോണുകളെ മാട്രിക്സിൽനിന്ന് സ്തരങ്ങൾക്കിടയിലെ ഇടത്തിലേക്ക് പമ്പ് ചെയ്യുന്നു. വൈദ്യുത ചാർജിലും അമ്ലതയിലും ഉണ്ടാകുന്ന ഈ വേർതിരിവാണ് പ്രോട്ടോൺ ചാലകബലം. അതിന്റെ വൈദ്യുത ഘടകമായ സ്തര പൊട്ടൻഷ്യലാണ് സാധാരണയായി പ്രധാന ഘടകം.

ATP സിന്തേസ് പ്രോട്ടോണുകളെ മാട്രിക്സിലേക്ക് തിരികെ ഒഴുകാൻ അനുവദിക്കുകയും അപ്പോൾ പുറത്തുവരുന്ന ഊർജം ഉപയോഗിച്ച് ADP-യും ഫോസ്ഫേറ്റും ചേർത്ത് ATP ഉണ്ടാക്കുകയും ചെയ്യുന്നു. അതിനാൽ ക്രമം ഇങ്ങനെയാണ്:

ഓക്സിജൻ ഉപഭോഗം, തുടർന്ന് പ്രോട്ടോൺ പമ്പിങ്, തുടർന്ന് ഗ്രേഡിയന്റ്, തുടർന്ന് ATP സംശ്ലേഷണം.

പ്രശ്നമെന്തെന്നാൽ, പ്രോട്ടോണുകൾക്ക് മറ്റു വഴികളിലൂടെയും തിരികെ വരാം. ATP സിന്തേസിനെ ഒഴിവാക്കി നടക്കുന്ന ഏതൊരു മടക്കപ്രവാഹവും പ്രോട്ടോൺ ചോർച്ചയാണ്. സ്തര പൊട്ടൻഷ്യൽ സ്ഥിരമായി നിലനിർത്താൻ അതേ പ്രോട്ടോണുകളെ വീണ്ടും പമ്പ് ചെയ്യാൻ ചോർച്ച ശൃംഖലയെ നിർബന്ധിക്കുന്നു. ഇത് കൂടുതൽ ATP ഉണ്ടാക്കാതെ കൂടുതൽ ഓക്സിജൻ ഉപയോഗിക്കുന്നു. ചോർച്ച മതിയായത്ര ശക്തമാകുമ്പോൾ അത് അൺകപ്ലിങ് ആകുന്നു: ATP മാറ്റമില്ലാതെ തുടരുകയോ കുറയുകയോ ചെയ്യുമ്പോഴും ഓക്സിജൻ ഉപയോഗം ഉയരുകയും പാഴാകുന്ന ഊർജം ചൂടായി പുറത്തുപോകുകയും ചെയ്യുന്നു.

സ്റ്റേറ്റ് 3, സ്റ്റേറ്റ് 4, ശ്വസന നിയന്ത്രണ അനുപാതം

ഇതിനുള്ള പരമ്പരാഗത പദാവലി വേർതിരിച്ചെടുത്ത മൈറ്റോകോൺഡ്രിയകളിൽനിന്നാണ് വരുന്നത്. സബ്‌സ്ട്രേറ്റും ADP-യും ഉള്ളപ്പോഴുള്ള ശ്വസനമാണ് സ്റ്റേറ്റ് 3: ATP സിന്തേസ് ഗ്രേഡിയന്റ് കുറയ്ക്കുന്നു, സ്തര പൊട്ടൻഷ്യൽ താഴുന്നു, അത് പുനഃസ്ഥാപിക്കാൻ ശൃംഖല വേഗത്തിലാകുന്നു, ATP ഉണ്ടാക്കുന്നതിനാൽ ഓക്സിജൻ ഉപയോഗം ഉയർന്നിരിക്കുന്നു. ADP തീർന്നതിനുശേഷമുള്ള ശ്വസനമാണ് സ്റ്റേറ്റ് 4: ATP സിന്തേസ് കാര്യമായി പ്രവർത്തിക്കാതാകുന്നു, ഗ്രേഡിയന്റ് ഉയരുന്നു, ഉയർന്ന സ്തര പൊട്ടൻഷ്യൽ കൂടുതൽ പമ്പിങ്ങിനെ ചെറുക്കുന്നു, ചോർച്ച നികത്താൻ ആവശ്യമായ നിലയിലേക്ക് ഓക്സിജൻ ഉപയോഗം താഴുന്നു.

അതിനാൽ, സ്റ്റേറ്റ് 3-നെ സ്റ്റേറ്റ് 4 കൊണ്ട് ഹരിച്ചുകിട്ടുന്ന ശ്വസന നിയന്ത്രണ അനുപാതം, പരീക്ഷണസജ്ജീകരണത്തിലെ കപ്ലിങ് എത്ര ദൃഢമാണെന്ന് സൂചിപ്പിക്കുന്നു. ഉയർന്ന അനുപാതം അർഥമാക്കുന്നത് ADP ശ്വസനത്തെ ശക്തമായി നിയന്ത്രിക്കുന്നു എന്നാണ്. സ്റ്റേറ്റ് 4 ഉയരുന്നതിനൊപ്പം അനുപാതം താഴുന്നത് ചോർച്ചയുടെ സ്വാധീനം കൂടുന്നു എന്നതാണ്. താഴെ പറയുന്ന മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ ഫലങ്ങൾ മനസ്സിലാക്കേണ്ടത് ഈ കാഴ്ചപ്പാടിലൂടെയാണ്.

ഒരു ആശയമാതൃക മനസ്സിൽ സൂക്ഷിക്കുന്നത് നല്ലതാണ്. ഉയർന്ന സ്തര പൊട്ടൻഷ്യൽ ശൃംഖലയെ മന്ദഗതിയിലാക്കുന്നു. പൊട്ടൻഷ്യൽ കുറയുന്നത് അതിനെ വേഗത്തിലാക്കുന്നു. ATP ഉണ്ടാക്കുന്നുണ്ടോ എന്നതിനോടല്ല, പമ്പിങ് എത്ര പ്രയാസകരമായി എന്നതിനോടാണ് ശൃംഖല നേരിട്ട് പ്രതികരിക്കുന്നത്.

അന്തിമ അളവുകൾ ഒരുമിച്ച് മാറുമ്പോൾ

കപ്ലിങ് നിലനിൽക്കുന്ന ഏറ്റവും വ്യക്തമായ ഉദാഹരണം ശ്വസന കോംപ്ലക്സുകൾ തടയപ്പെട്ട, വേർതിരിച്ചെടുത്ത ഗിനിപ്പന്നിയുടെ മസ്തിഷ്ക മൈറ്റോകോൺഡ്രിയകളിൽനിന്നാണ്. 100 nanomolar മുതൽ 1 micromolar വരെ മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ ഉണ്ടായപ്പോൾ, ഗ്ലൂട്ടാമേറ്റും മാലേറ്റും ചേർന്നതോ സക്സിനേറ്റോ ഗ്ലിസറോഫോസ്ഫേറ്റോ ഇന്ധനമായി ഉപയോഗിച്ച സാഹചര്യങ്ങളിൽ വിശ്രമാവസ്ഥയിലെ ഓക്സിജൻ ഉപഭോഗം ഉയർന്നു. അതേസമയം, ADP ഉത്തേജിപ്പിച്ച ശ്വസനത്തിൽ മാറ്റമുണ്ടായില്ല. കോംപ്ലക്സ് I അല്ലെങ്കിൽ കോംപ്ലക്സ് III വിഷപദാർഥങ്ങളാൽ തടയപ്പെട്ട മൈറ്റോകോൺഡ്രിയകളിൽ, ഈ ചായം ATP ഉൽപ്പാദനം മിതമായി വർധിപ്പിക്കുകയും സ്തര പൊട്ടൻഷ്യൽ പുനഃസ്ഥാപിക്കുകയും കാൽസ്യം സ്വീകരണം മെച്ചപ്പെടുത്തുകയും ചെയ്തു. നിർദേശിക്കപ്പെട്ട വഴി ഒരു കുറുക്കുവഴിയാണ്: തടസ്സത്തിന് മുമ്പുള്ള ഭാഗത്തുനിന്ന് ചായം ഇലക്ട്രോണുകൾ സ്വീകരിച്ച്, കേടായ കോംപ്ലക്സിനെ ഒഴിവാക്കി അവ സൈറ്റോക്രോം c-യ്ക്ക് കൈമാറുന്നു.

രണ്ടാമത്തെ കപ്ലിങ് ഉദാഹരണത്തിൽ ATP-യുടെ ഉറവിടംതന്നെ മറ്റൊന്നാണ്. ATP സിന്തേസ് തടയപ്പെട്ട, വേർതിരിച്ചെടുത്ത മസ്തിഷ്ക മൈറ്റോകോൺഡ്രിയകളിൽ, പരീക്ഷിച്ച എല്ലാ സബ്‌സ്ട്രേറ്റുകളിലും മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ ശ്വസനത്തെ ഉത്തേജിപ്പിച്ചു. എന്നാൽ സക്സിനൈൽ CoA രൂപപ്പെടുത്തുന്ന രണ്ട് സബ്‌സ്ട്രേറ്റുകളായ ആൽഫ കെറ്റോഗ്ലൂട്ടറേറ്റിലും ഗ്ലൂട്ടാമേറ്റിലും മാത്രമാണ് ATP സംശ്ലേഷണം ഉയർന്നത്. ഒലിഗോമൈസിൻ ATP സിന്തേസിനെ തടഞ്ഞതിനാൽ, അധിക ATP വന്നത് ഓക്സിഡേറ്റീവ് ഫോസ്ഫോറിലേഷനിൽനിന്നല്ല; സിട്രിക് ആസിഡ് ചക്രത്തിലെ സക്സിനൈൽ CoA ലൈഗേസ് നടത്തുന്ന സബ്‌സ്ട്രേറ്റ്-തല ഫോസ്ഫോറിലേഷനിൽനിന്നാണ്. കോംപ്ലക്സ് I-യും ATP സിന്തേസും ഒരുമിച്ച് തടയപ്പെട്ടപ്പോൾ ചായം സ്തര പൊട്ടൻഷ്യലും പുനഃസ്ഥാപിച്ചു. ഇവിടെ ഓക്സിജൻ ഉപയോഗവും ATP-യും ഒരുമിച്ച് ഉയർന്നു, എന്നാൽ രണ്ടാമത്തെ ATP ഉൽപ്പാദനപാതയെ സബ്‌സ്ട്രേറ്റ് അനുവദിച്ച സാഹചര്യങ്ങളിൽ മാത്രം. സക്സിനേറ്റിലോ മാലേറ്റിലോ അധിക ATP ഇല്ലാതെ ശ്വസനം ഉയർന്നു. അതേ ചായം, അതേ അറ, വ്യത്യസ്ത ഇന്ധനം, വ്യത്യസ്ത ഉത്തരം.

അന്തിമ അളവുകൾ വേർപിരിയുമ്പോൾ

വേർപിരിയലിന്റെ ഉദാഹരണങ്ങളും അതുപോലെ പ്രസിദ്ധീകരിക്കപ്പെട്ടവയും പഠനപ്രദവുമാണ്. 1997-ലെ, വേർതിരിച്ചെടുത്ത എലിയുടെ കരൾ മൈറ്റോകോൺഡ്രിയകളെക്കുറിച്ചുള്ള ഒരു പഠനത്തിൽ, സക്സിനേറ്റ് ഉപയോഗിച്ച് ശ്വസിക്കുകയും ദൃഢമായ കപ്ലിങ് നിലനിർത്തുകയും ചെയ്ത മൈറ്റോകോൺഡ്രിയകളിൽ മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ സ്റ്റേറ്റ് 4 ശ്വസനം വേഗത്തിലാക്കി. ഇത് ശ്വസന നിയന്ത്രണ അനുപാതം താഴ്ത്തി. 0.5 micromolar മുതൽ പ്രഭാവം പ്രകടമായിരുന്നു; 5 micromolar-ൽ അത് ശക്തമായിരുന്നു. 100 milligram ഒരൊറ്റ ബോളസായി ശിരയിലൂടെ നൽകിയതിനുശേഷമുള്ള പ്ലാസ്മ നിലകൾക്ക് അടുത്ത സാന്ദ്രതയാണിത്. 5 micromolar-ൽ മൈറ്റോകോൺഡ്രിയകൾ വീർക്കുകയും ചെയ്തു. എന്നാൽ കപ്ലിങ് തകരാർ ആദ്യം കുറഞ്ഞ സാന്ദ്രതകളിൽ പ്രത്യക്ഷപ്പെട്ടിരുന്നു. അതിനാൽ ചോർച്ച ഘടനാപരമായ കേടുപാടിൽനിന്ന് ഉണ്ടായതല്ല, അതിന് മുമ്പേ തുടങ്ങിയതാണെന്ന് ഇത് സൂചിപ്പിക്കുന്നു. അൺകപ്ലിങ് സംഭവിച്ച മൈറ്റോകോൺഡ്രിയകളിൽ, സാന്ദ്രതയെ ആശ്രയിക്കുകയും പരമാവധി പരിധിയിലെത്തുകയും ചെയ്യുന്ന രീതിയിൽ ചായം ശ്വസനത്തെ ഉത്തേജിപ്പിച്ചു. രണ്ട് പരീക്ഷണസജ്ജീകരണങ്ങളിലും ഓക്സിജൻ ഉപയോഗം ഉയർന്നു. ഉപയോഗിച്ച ഓരോ അളവ് ഓക്സിജനുമായി താരതമ്യം ചെയ്തുള്ള ATP സംശ്ലേഷണം ഉയർന്നില്ല. ഒരേ തന്മാത്രയിൽ അൺകപ്ലിങ്ങും ഇലക്ട്രോൺ കൈമാറ്റവും ഒരുമിച്ച് നടക്കുന്നതിന്റെ പാഠപുസ്തക ഉദാഹരണമാണിത്.

ഏറ്റവും ശ്രദ്ധേയമായ വേർപിരിയൽ റെറ്റിനയിൽനിന്നാണ് വരുന്നത്. AIF കുറവുള്ള എലികളിലും റോട്ടെനോൺ നൽകിയ പ്രകാശഗ്രാഹക കോശങ്ങളിലും, മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ റെറ്റിനയുടെ കനം, പ്രകാശഗ്രാഹക കോശങ്ങളുടെ മാർക്കറുകൾ, മൈറ്റോകോൺഡ്രിയയുടെ ഘടന എന്നിവ നിലനിർത്തി. അത് NADH-യും NAD-യും തമ്മിലുള്ള അനുപാതം കുറയ്ക്കുകയും ശരിയായി മടങ്ങാത്ത പ്രോട്ടീനുകളോടുള്ള പ്രതികരണവും മൈറ്റോഫാജിയും ഉൾപ്പെടെയുള്ള സമ്മർദ പ്രതികരണപാതകളുടെ പ്രവർത്തനം ശമിപ്പിക്കുകയും ചെയ്തു. ATP കുറവ് പരിഹരിക്കാതെയാണ് അത് ഇതെല്ലാം ചെയ്തത്. ഊർജം പുനഃസ്ഥാപിക്കാതെ സംരക്ഷണം ലഭിച്ചതിന്റെ അർഥം, ഗുണം അധിക ATP വഴിയല്ല, റെഡോക്സ് സന്തുലിതാവസ്ഥയും മൈറ്റോകോൺഡ്രിയയുടെ ഘടനാപരമായ അഖണ്ഡതയും വഴിയാണ് ഉണ്ടായത് എന്നതാണ്. കലകളുടെ അതിജീവനത്തെ ഊർജ ഉൽപ്പാദനം പുനഃസ്ഥാപിച്ചതിന് തുല്യമായി കാണുന്നവർ ആ പരീക്ഷണത്തെ പൂർണമായും തെറ്റായി വായിക്കും.

മസ്തിഷ്ക മൈറ്റോകോൺഡ്രിയകളിലെ പഠനം ഇതേ കണക്കിലേക്ക് ഒരു ചെലവിന്റെ വശവും ചേർക്കുന്നു. ജൈവഊർജ പ്രവർത്തനം മെച്ചപ്പെടുത്തിയ അതേ കുറഞ്ഞ സാന്ദ്രതകൾ, പരീക്ഷിച്ച എല്ലാ സാഹചര്യങ്ങളിലും ഹൈഡ്രജൻ പെറോക്സൈഡ് ഉൽപ്പാദനം ഉയർത്തുകയും അത് നീക്കം ചെയ്യപ്പെടുന്നത് മന്ദഗതിയിലാക്കുകയും ചെയ്തു. ഇത് അളന്നത് പ്രത്യേകതയില്ലാത്ത ഒരു ചായം ഉപയോഗിച്ചല്ല, കാലിബ്രേറ്റ് ചെയ്ത Amplex പരിശോധന ഉപയോഗിച്ചാണ്. കൂടുതൽ ATP-യും കൂടുതൽ ഓക്സിഡന്റും ഒരുമിച്ചാണ് വന്നത്.

വായിക്കുമ്പോൾ ഉപയോഗിക്കാവുന്ന ഒരു പ്രായോഗിക പരിശോധനാപട്ടിക

കപ്ലിങ് നിലനിൽക്കുന്ന ഫലത്തെ അൺകപ്ലിങ് സംഭവിച്ച ഫലത്തിൽനിന്ന് വേർതിരിക്കാൻ നാല് ചോദ്യങ്ങൾ സഹായിക്കുന്നു.

ആദ്യം, യഥാർഥത്തിൽ ഏത് അന്തിമ അളവാണ് പരിശോധിച്ചത്? ഓക്സിജൻ ഉപഭോഗം മാത്രം ATP-യെക്കുറിച്ച് പറയാൻ കഴിയില്ല. ATP സംശ്ലേഷണം, സ്തര പൊട്ടൻഷ്യൽ, ശ്വസന നിയന്ത്രണ അനുപാതം എന്നിവ ഓരോന്നും ഓക്സിജൻ ഇലക്ട്രോഡിന് കാണാൻ കഴിയാത്ത ഓരോ വിവരം ചേർക്കുന്നു. മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ ഗവേഷണ അവകാശവാദങ്ങൾ വായിക്കുന്നതിനുള്ള മാർഗദർശകം, അന്തിമ അളവുകളെ ഇങ്ങനെ ശ്രദ്ധാപൂർവം വിലയിരുത്തുന്നത് വിശദമായി വിവരിക്കുന്നു.

രണ്ടാമത്, മൈറ്റോകോൺഡ്രിയകൾക്ക് ഏത് സബ്‌സ്ട്രേറ്റാണ് ഇന്ധനമായത്? അധിക ശ്വസനം അധിക ATP ആയി മാറാൻ കഴിയുമോ എന്നുതന്നെ ഇന്ധനത്തിന്റെ തിരഞ്ഞെടുപ്പ് നിർണയിക്കാമെന്ന് സക്സിനൈൽ CoA ഫലം കാണിക്കുന്നു.

മൂന്നാമത്, ഏത് സാന്ദ്രതയാണ് ഉപയോഗിച്ചത്? മസ്തിഷ്ക മൈറ്റോകോൺഡ്രിയകളിൽ nanomolar മുതൽ കുറഞ്ഞ micromolar സാന്ദ്രതകളിലുള്ള മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ, ഓക്സിഡന്റിന്റെ അധികഭാരത്തോടൊപ്പം മിതമായ ജൈവഊർജ നേട്ടങ്ങൾ നൽകി. കരൾ മൈറ്റോകോൺഡ്രിയകളിൽ അര micromolar മുതലുള്ള സാന്ദ്രതകൾ കപ്ലിങ് ദുർബലമാക്കി; 5 micromolar-ൽ വീക്കവും ഉണ്ടായി. സാന്ദ്രത പ്രവർത്തനരീതിയുടെ ഭാഗമാണ്, വെറുമൊരു പശ്ചാത്തല വിവരമല്ല.

നാലാമത്, ഫലം ഏത് മാതൃകയിലാണ് കണ്ടത്? വേർതിരിച്ചെടുത്ത മൈറ്റോകോൺഡ്രിയകൾ ആന്തരിക ബന്ധങ്ങൾ വെളിപ്പെടുത്തുന്നു. എന്നാൽ അക്ഷതമായ കോശങ്ങളിലും കലകളിലും ഗതാഗതം, നിറമില്ലാത്ത രൂപത്തിലേക്കുള്ള നിരോക്സീകരണം, ഇലക്ട്രോണുകളെ സ്വീകരിക്കാൻ മത്സരിക്കുന്ന മറ്റ് സംവിധാനങ്ങൾ എന്നിവയും ഉൾപ്പെടുന്നു. സാന്ദ്രതയും പരീക്ഷണക്രമവും മെത്തിലീൻ ബ്ലൂവിന്റെ പ്രഭാവങ്ങളെ എങ്ങനെ രൂപപ്പെടുത്തുന്നു എന്നതടക്കമുള്ള ലബോറട്ടറി ഡോസിങ് പഠനങ്ങളാണ് പരീക്ഷണ അറയിലെ സംഖ്യകളെയും ഒരു വ്യക്തിയെക്കുറിച്ചുള്ള ഏതൊരു അവകാശവാദത്തെയും ബന്ധിപ്പിക്കുന്ന പാലം.

ഓക്സിജൻ ഉപഭോഗം ഇലക്ട്രോൺ പ്രവാഹത്തെ സൂചിപ്പിക്കുന്നു. ആ പ്രവാഹത്തിൽ എത്രത്തോളം ഊർജമായി പിടിച്ചെടുത്തു എന്നാണ് ATP സൂചിപ്പിക്കുന്നത്. മെത്തിലീൻ ബ്ലൂവിന് ഇവയിൽ ഏതിനെ വേണമെങ്കിലും മാറ്റാൻ കഴിയും. അതിന്റെ ഭാഗമായി ഉണ്ടാകുന്ന നാല് വ്യത്യസ്ത ഫലങ്ങളും മുകളിലെ പരീക്ഷണങ്ങൾ കാണിക്കുന്നു: രണ്ടും ഉയരുന്നു; സബ്‌സ്ട്രേറ്റ് അനുവദിക്കുന്ന സാഹചര്യങ്ങളിൽ മാത്രം ശ്വസനവർധനയ്ക്കൊപ്പം ATP ഉയരുന്നു; കപ്ലിങ് കുറയുമ്പോഴും ശ്വസനം ഉയരുന്നു; ATP മാറ്റമില്ലാതെ തുടരുമ്പോഴും കല സംരക്ഷിക്കപ്പെടുന്നു. ഓക്സിജൻ ഇലക്ട്രോഡിലെ സംഖ്യ വ്യാഖ്യാനത്തിന്റെ തുടക്കമാണ്, അവസാനമല്ല.