മെത്തിലീൻ നീലയും Bartonellaയും: ലബോറട്ടറി കണ്ടെത്തലുകളും ക്ലിനിക്കൽ തെളിവുകളുടെ പരിമിതികളും

ഒരു കൾച്ചർ പാത്രത്തിനും ഒരു രോഗിക്കും പൊതുവായുള്ള വാക്കാണ് അണുബാധ; എന്നാൽ അതിന്റെ ആശയം രണ്ടിടത്തും ഒരുപോലെയല്ല. പാത്രത്തിൽ അണുബാധ എന്നത് അഗാറിലെ കോളനികളുടെ എണ്ണമാണ്. രോഗിയിൽ അത് കോശങ്ങൾക്കും രക്തക്കുഴലുകൾക്കും ഉള്ളിലുള്ള ബാക്ടീരിയകളും രക്തത്തിലൂടെയും കലകളിലൂടെയും സഞ്ചരിക്കുന്ന മരുന്നുകളും ജോലിയുടെ ഒരു ഭാഗം നിർവഹിക്കുന്ന പ്രതിരോധവ്യവസ്ഥയും ഉൾപ്പെടുന്നതാണ്. ഇവ രണ്ടും കൂട്ടിക്കുഴച്ചാൽ ശ്രദ്ധേയമായ ഒരു ലബോറട്ടറി സംഖ്യ ഒരു ചികിത്സയായി തോന്നിത്തുടങ്ങും. അവയെ വേർതിരിച്ചുനിർത്തിയാൽ അതേ സംഖ്യ യഥാർഥത്തിൽ എന്താണോ അതായി മാറും: അടുത്ത പരീക്ഷണം നടത്താനുള്ള ഒരു കാരണം.

മെത്തിലീൻ നീലയും Bartonellaയും സംബന്ധിച്ച ഈ അവലോകനത്തിന്റെ ലക്ഷ്യം ആ വേർതിരിവ് നിലനിർത്തുക എന്നതാണ്. ഒരേ ഗവേഷകസംഘത്തിന്റെ രണ്ട് ലബോറട്ടറി പഠനങ്ങൾ വളർച്ചയില്ലാത്ത അവസ്ഥകളിലുള്ള Bartonella henselaeയ്‌ക്കെതിരെ മെത്തിലീൻ നീല പരീക്ഷിച്ചു. രണ്ടും ഗ്ലാസ്, പ്ലാസ്റ്റിക് പാത്രങ്ങളിലെ പരീക്ഷണങ്ങളിൽ ശക്തമായ പ്രവർത്തനം റിപ്പോർട്ട് ചെയ്തു. ഒന്നിലും മനുഷ്യരെ പരീക്ഷിച്ചില്ല.

ഗവേഷകർ സ്ഥിരാവസ്ഥ പരിശോധിക്കുന്നത് എന്തുകൊണ്ട്

മിക്ക ആന്റിബയോട്ടിക് പരിശോധനകളും വളരുന്ന കോശങ്ങളെയാണ് ഉപയോഗിക്കുന്നത്. ആ മാതൃക കൂടുതൽ ദുഷ്കരമായ ഒരു സാഹചര്യം ഉൾക്കൊള്ളുന്നില്ല: വിഭജനം നിർത്തിയതും വളരുന്ന സമാനകോശങ്ങളെ നശിപ്പിക്കുന്ന മരുന്നുകളെ അതിജീവിക്കുന്നതുമായ കോശങ്ങൾ.

ചുവന്ന രക്താണുക്കൾക്കും എൻഡോതീലിയൽ കോശങ്ങൾക്കും ഉള്ളിൽ ഉൾപ്പെടെ Bartonella ശരീരത്തിൽ നിലനിൽക്കാം. അതിനാൽ, സ്ഥിരാവസ്ഥയിലെത്തിയ B. henselaeയെ നശിപ്പിക്കാൻ ഏത് അംഗീകൃത മരുന്നുകൾക്കു കഴിയുമെന്ന് സംഘം പരിശോധിച്ചു. വളരുന്ന കോശങ്ങൾക്കെതിരെയുള്ള കുറഞ്ഞ MIC സ്ഥിരാവസ്ഥയിലെ കോശങ്ങളെ നശിപ്പിക്കാനുള്ള കഴിവ് പ്രവചിച്ചില്ല. റിഫാംപിന്റെ MIC വളരെ കുറവായിരുന്നെങ്കിലും അത് സ്ഥിരാവസ്ഥയിലെ കോശങ്ങളെ കാര്യമായി നശിപ്പിച്ചില്ല; ഉയർന്ന MIC മൂല്യങ്ങളുള്ള സംയുക്തങ്ങൾ അവയെ നന്നായി നശിപ്പിച്ചു. ഇത്തരത്തിലുള്ള പ്രബന്ധങ്ങൾ വായിക്കാനുള്ള ഒരു പൊതുരീതി തേടുന്നവർക്ക് മെത്തിലീൻ നീല ഗവേഷണം വായിക്കുന്നതിനുള്ള മാർഗനിർദേശത്തിൽ അത് കണ്ടെത്താം.

ആദ്യ സ്ക്രീനിങ്: ലിയും സഹപ്രവർത്തകരും, 2019

Antibiotics-ൽ പ്രസിദ്ധീകരിച്ച 2019-ലെ സ്ഥിരാവസ്ഥാ സ്ക്രീനിങ് B. henselae JK53 എന്ന ഒരൊറ്റ സ്ട്രെയിൻ ഉപയോഗിച്ചു. 10 percent ഭ്രൂണ കന്നുകാലി സീറം ചേർത്ത ഷ്നൈഡർ മാധ്യമത്തിൽ, 37 C താപനിലയിലും 5 percent CO2 സാഹചര്യത്തിലുമാണ് അത് വളർത്തിയത്. ഒരു ദിവസം പ്രായമുള്ള കൾച്ചറുകളിൽ പ്രധാനമായും ചിതറിക്കിടക്കുന്ന, വിഭജിച്ചുകൊണ്ടിരിക്കുന്ന കോശങ്ങളായിരുന്നു. ഏകദേശം mL-ന് 10-ന്റെ 8-ാം ഘാതം കോളനി രൂപീകരണ യൂണിറ്റുകളുള്ള അഞ്ച് ദിവസം പ്രായമുള്ള കൾച്ചറുകളെ സ്ഥിരാവസ്ഥയിലുള്ളതായി കണക്കാക്കി; അവയിൽ കണ്ണുകൊണ്ട് കാണാവുന്ന കോശക്കൂട്ടങ്ങളുണ്ടായിരുന്നു.

പരിശോധനയ്ക്ക് പ്രൊപീഡിയം അയോഡൈഡിനൊപ്പം SYBR Green I ഉപയോഗിച്ചു. ജീവനുള്ള കോശങ്ങളുടെയും ഐസോപ്രൊപ്പനോൾ ഉപയോഗിച്ച് നശിപ്പിച്ച കോശങ്ങളുടെയും മിശ്രിതങ്ങൾ ഉപയോഗിച്ചാണ് ഇത് കാലിബ്രേറ്റ് ചെയ്തത്. മെത്തിലീൻ നീലയ്ക്ക് തീവ്രമായ നിറമുള്ളതിനാൽ, പ്രവർത്തനക്ഷമമായി കണ്ടെത്തിയവ മൈക്രോസ്കോപ്പിയിലൂടെയും തുടർന്ന് കൂടുതൽ കർശനമായ വിലയിരുത്തൽ മാനദണ്ഡമായ ബ്ലഡ് അഗാറിലെ കോളനി എണ്ണത്തിലൂടെയും സ്ഥിരീകരിച്ചു.

50 micromolar സാന്ദ്രതയിൽ പരിശോധിച്ച 1,581 അംഗീകൃത മരുന്നുകളിൽ, മെത്തിലീൻ നീലയ്ക്കുശേഷം പ്ലേറ്റ് റീഡർ പ്രകാരം 16 percent-ഉം മൈക്രോസ്കോപ്പി പ്രകാരം 25 percent-ഉം കോശങ്ങൾ ജീവനോടെ ശേഷിച്ചു. ഡാപ്റ്റോമൈസിന്റെ ഫലം 21 percent ആയിരുന്നു; പല അസോളുകളുടേത് 22 മുതൽ 27 percent വരെ, ജെന്റാമൈസിന്റേത് 32 percent, എറിത്രോമൈസിന്റേത് 66 percent, സിപ്രോഫ്ലോക്സാസിന്റേത് 74 percent. പിർവിനിയം പാമോയേറ്റ് റീഡറിൽ കൂടുതൽ ശക്തമായി തോന്നിയെങ്കിലും അതിന്റെ സ്വന്തം ഫ്ലൂറസൻസിന്റെ കാരണത്താൽ മൈക്രോസ്കോപ്പിയിലൂടെ വിലയിരുത്താനായില്ല.

വളരുന്ന B. henselaeയ്‌ക്കെതിരെ മെത്തിലീൻ നീലയുടെ MIC 0.08 മുതൽ 0.16 micrograms per mL വരെയായിരുന്നു. അഞ്ച് ദിവസം പ്രായമുള്ള സ്ഥിരാവസ്ഥയിലെ കോശങ്ങളെ 5 micrograms per mL സാന്ദ്രതയിൽ ഒരു ദിവസം സമ്പർക്കത്തിൽ വെച്ചപ്പോൾ, കണ്ടെത്താനാകുന്ന കോളനികളൊന്നും ശേഷിക്കാത്ത നിലയിലേക്ക് കോളനി എണ്ണം കുറഞ്ഞു. പരിശോധിച്ച സാന്ദ്രതകളിൽ ഡാപ്റ്റോമൈസിനും പിർവിനിയം പാമോയേറ്റും നൽകിയ ഫലത്തിനു സമാനമായിരുന്നു ഇത്. സമയാനുസൃതമായ നശീകരണം പരിശോധിച്ച ഒരു പ്രത്യേക പരീക്ഷണത്തിൽ 10 micrograms per mL ഉപയോഗിച്ചു. ഇവ ലബോറട്ടറിയിലെ സമ്പർക്ക സാന്ദ്രതകളാണ്, മരുന്ന് ഡോസുകളല്ല; പ്രബന്ധവും അങ്ങനെതന്നെയാണ് അവയെ അവതരിപ്പിക്കുന്നത്. മനുഷ്യരിലെ പരമാവധി പ്ലാസ്മ സാന്ദ്രത ഏകദേശം 3.9 micrograms per mL ആണെന്ന ഉദ്ധരിച്ച മൂല്യം പശ്ചാത്തലവിവരമായി മാത്രമാണ് പ്രബന്ധത്തിൽ വരുന്നത്. പ്ലാസ്മയിലെ ഒരു സംഖ്യയെ കലകളിലെ സംഖ്യയായി വായിക്കാനാകാത്തത് എന്തുകൊണ്ടെന്ന് മെത്തിലീൻ നീലയുടെ ഫാർമക്കോകൈനറ്റിക്സ് സംബന്ധിച്ച അവലോകനം വിശദീകരിക്കുന്നു.

രണ്ട് പരിമിതികൾ പ്രബന്ധം വ്യക്തമായി പറയുന്നു. ബയോഫിലിം മാതൃക ഉണ്ടായിരുന്നില്ല; മെത്തിലീൻ നീലയുടെ മരുന്നുചേരുവകളും പരിശോധിച്ചില്ല. അഞ്ച് ദിവസം പ്രായമുള്ള കോശക്കൂട്ടങ്ങൾ സ്ഥിരാവസ്ഥയിലുള്ള ദ്രവ കൾച്ചറിലെ കൂട്ടങ്ങളായിരുന്നു, സാധൂകരിച്ച ബയോഫിലിം പരീക്ഷണമല്ല. മൃഗപഠനങ്ങൾ, മരുന്നുചേരുവകളുടെ പഠനങ്ങൾ, ബയോഫിലിം പഠനങ്ങൾ, മറ്റ് Bartonella സ്പീഷീസുകളിലെ പരിശോധനകൾ എന്നിവ നടത്തണമെന്ന് രചയിതാക്കൾ നിർദേശിച്ചു.

മരുന്നുചേരുവകളും ബയോഫിലിമിൽനിന്ന് വേർതിരിച്ച കോശങ്ങളും: ഷെങ്ങും സഹപ്രവർത്തകരും, 2020

BMC Microbiology-യിലെ 2020-ലെ തുടർപഠനം അതേ സ്ട്രെയിനും മാധ്യമവും നിലനിർത്തിയെങ്കിലും ആറു ദിവസം പ്രായമുള്ള സ്ഥിരാവസ്ഥാ കൾച്ചറുകളിലേക്കു മാറി. ആദ്യ പ്രബന്ധത്തിൽ ഇല്ലാതിരുന്ന രണ്ടു കാര്യങ്ങളും ചേർത്തു: രണ്ട് മരുന്നുകൾ ചേർത്തുള്ള പരീക്ഷണങ്ങളും ബയോഫിലിമിൽനിന്ന് വേർതിരിച്ച കോശങ്ങളുടെ മാതൃകയും.

എല്ലാ ഒറ്റമരുന്നുകളും 5 micrograms per mL എന്ന ഒരേ സാന്ദ്രതയിൽ 24 മണിക്കൂർ പരീക്ഷിച്ചപ്പോൾ, മെത്തിലീൻ നീലയ്ക്കുശേഷം mL-ന് 3.2 ഗുണം 10-ന്റെ 4-ാം ഘാതം കോളനി രൂപീകരണ യൂണിറ്റുകൾ ശേഷിച്ചു; നിയന്ത്രണ സാമ്പിളിൽ ഇത് ഏകദേശം 2.8 ഗുണം 10-ന്റെ 10-ാം ഘാതമായിരുന്നു. അതേ സമയത്ത് സിപ്രോഫ്ലോക്സാസിൻ, ജെന്റാമൈസിൻ, നൈട്രോഫ്യൂറാന്റോയിൻ എന്നിവയ്ക്കുശേഷം കുറച്ചുകൂടി കുറഞ്ഞ കോളനികളാണ് ശേഷിച്ചത്. ഒരേ നാമമാത്ര സാന്ദ്രതയിൽ ഒരു ദിവസത്തിനുശേഷം കണ്ടെത്താനാകുന്ന കോളനികളൊന്നും ഉണ്ടായിരുന്നില്ലെന്ന 2019-ലെ ഫലത്തിൽനിന്ന് ഇത് വ്യത്യസ്തമാണ്. കൾച്ചറിന്റെ പ്രായം, സാന്ദ്രത, കൈകാര്യം ചെയ്ത രീതി എന്നിവ വ്യത്യസ്തമായിരുന്നു. അതിനാൽ നശീകരണം നടക്കുന്നുവെന്ന ഫലം ആവർത്തിക്കാനായെങ്കിലും അതിന്റെ അളവ് ഒരുപോലെയായിരുന്നില്ല. പരീക്ഷണങ്ങൾക്കിടയിലെ ഈ മാറ്റം, സാധാരണ സുരക്ഷാ-പരസ്പരപ്രവർത്തന പരിശോധനകൾ ലബോറട്ടറിയിലെ പ്രവർത്തനശക്തിയെ ക്ലിനിക്കൽ ഫലത്തിൽനിന്ന് വേർതിരിച്ചുകാണുന്നതിനുള്ള ഒരു കാരണമാണ്.

മരുന്നുചേരുവകളുടെ സ്ക്രീനിങ്ങാണ് ഏറ്റവും അധികം ഉദ്ധരിക്കപ്പെടുന്ന ഭാഗം. ഓരോ ഘടകവും 5 micrograms per mL സാന്ദ്രതയിൽ സ്ഥിരപ്പെടുത്തി. അസിത്രോമൈസിൻ–മെത്തിലീൻ നീല ചേരുവയും റിഫാംപിൻ–മെത്തിലീൻ നീല ചേരുവയും 24 മണിക്കൂറിൽ കണ്ടെത്താനാകുന്ന സ്ഥിരാവസ്ഥാ കോളനികളൊന്നും ശേഷിപ്പിച്ചില്ല. സിപ്രോഫ്ലോക്സാസിൻ ഉൾപ്പെട്ട രണ്ട് ചേരുവകളും ഇതേ ഫലം നൽകി. പരിശോധിച്ച 25 ജോടികളിൽ ഈ നാലെണ്ണം മാത്രമാണ് അങ്ങനെ ചെയ്തത്. ഔപചാരികമായ സഹപ്രവർത്തന വിശകലനം നടത്തിയില്ല. അതിനാൽ ശരിയായ പ്രയോഗം ഈ സാഹചര്യങ്ങളിൽ പ്രവർത്തനക്ഷമമായ ചേരുവ എന്നതാണ്, തെളിയിക്കപ്പെട്ട സഹപ്രവർത്തനം എന്നല്ല.

ബയോഫിലിം പരീക്ഷണം പരിശോധിച്ചത് പ്രാരംഭഘട്ടത്തിലുള്ള, തകർത്ത ബയോഫിലിമിൽനിന്ന് വേർതിരിച്ച കോശങ്ങളെയാണ്; കേടുപാടില്ലാത്ത പക്വമായ ബയോഫിലിമിനുള്ളിലേക്കുള്ള കടന്നുകയറ്റമല്ല. കൾച്ചറുകൾ അഞ്ച് ദിവസം വളർത്തി, നേർപ്പിച്ച് വെൽ പ്ലേറ്റുകളിലേക്ക് മാറ്റി വീണ്ടും അഞ്ച് ദിവസം വളർത്തി, ക്രിസ്റ്റൽ വയലറ്റ് സ്റ്റെയിനിങ് വഴി സ്ഥിരീകരിച്ചു. തുടർന്ന് മരുന്നുമായി സമ്പർക്കത്തിൽ കൊണ്ടുവരുന്നതിനുമുമ്പ് ചുരണ്ടിയെടുത്തു. 5 micrograms per mL സാന്ദ്രതയിൽ മെത്തിലീൻ നീല മാത്രം ഉപയോഗിച്ചപ്പോൾ 6-ാം ദിവസം എണ്ണം 2.3 ഗുണം 10-ന്റെ 2-ാം ഘാതത്തിലേക്ക് കുറഞ്ഞു. മികച്ച ഒറ്റമരുന്നുകളിൽ ഒന്നായിരുന്നെങ്കിലും ഫലം പൂജ്യമല്ലായിരുന്നു. മെത്തിലീൻ നീല ഉൾപ്പെട്ട രണ്ട് ചേരുവകളും 6-ാം ദിവസം പൂജ്യത്തിലെത്തി; സിപ്രോഫ്ലോക്സാസിൻ ഉൾപ്പെട്ട രണ്ട് ചേരുവകളും അങ്ങനെതന്നെ.

ശ്രദ്ധയുള്ള വായനക്കാരൻ ചൂണ്ടിക്കാട്ടുന്ന അതേ പരിമിതികൾ രചയിതാക്കളും എടുത്തുപറഞ്ഞു: പഴക്കമുള്ള, കേടുപാടില്ലാത്ത ബയോഫിലിമിനുപകരം പ്രാരംഭഘട്ടത്തിലുള്ള ചുരണ്ടിയെടുത്ത ബയോഫിലിം; ഓരോ മരുന്നിന്റെയും യാഥാർഥ്യസഹമായ പരമാവധി സാന്ദ്രതയ്ക്കുപകരം എല്ലാ മരുന്നുകൾക്കും ഒരേ സൗകര്യപ്രദമായ സാന്ദ്രത; അസിത്രോമൈസിൻ അല്ലെങ്കിൽ റിഫാംപിൻ കേന്ദ്രീകരിച്ച തിരഞ്ഞെടുത്ത ജോടികൾ മാത്രം; ഒരൊറ്റ സ്ട്രെയിൻ; മൃഗങ്ങളില്ല; രോഗികളില്ല. പിന്നീട് മൂന്ന് മരുന്നുകൾ ചേർത്തുള്ള പഠനം നിർദേശിച്ചു, എന്നാൽ അതിന്റെ ഫലങ്ങൾ റിപ്പോർട്ട് ചെയ്തില്ല.

പഠനരൂപകൽപ്പനകളുടെ താരതമ്യം

ഈ ലേഖനത്തിന്റെ ആശയം പട്ടികയിൽ ചുരുക്കിയിരിക്കുന്നു. അവസാന നിരയുടെ ഇടതുവശത്തുള്ളതെല്ലാം കൾച്ചർ പഠനങ്ങളാണ്. രണ്ടു പ്രബന്ധങ്ങളിലും അവസാന നിരയിൽ ഉൾപ്പെടുത്താവുന്ന ഒന്നുമില്ല.

Bartonella എന്നത് Borrelia അല്ല

ലൈം രോഗത്തിന് കാരണമാകുന്ന സ്പൈറോകീറ്റായ Borrelia burgdorferiയെ രണ്ടു പ്രബന്ധങ്ങളും പരാമർശിക്കുന്നു. കാരണം, അതേ ലബോറട്ടറിയിൽ നേരത്തെ നടത്തിയ Borrelia സ്ഥിരാവസ്ഥാ പഠനങ്ങളിൽനിന്നാണ് ഡൈ പരിശോധനാരീതി വന്നത്. അവിടെയും മെത്തിലീൻ നീലയും ഡാപ്റ്റോമൈസിനും പ്രവർത്തനക്ഷമമായി കണ്ടെത്തിയിരുന്നു. ആ ചരിത്രം ഉപകാരപ്രദമായ പശ്ചാത്തലവിവരമാണ്; അതേസമയം, പതിവായി തെറ്റിദ്ധാരണയ്ക്കു കാരണമാകുന്നതുമാണ്.

Bartonellaയെക്കുറിച്ചുള്ള രണ്ടു പ്രബന്ധങ്ങളിലും ഒരു പരീക്ഷണവും Borreliaയെ Bartonellaയ്‌ക്കൊപ്പം നേരിട്ട് പരിശോധിക്കുന്നില്ല. സൂക്ഷ്മജീവികൾ വ്യത്യസ്തമാണ്, മാധ്യമങ്ങൾ വ്യത്യസ്തമാണ്, സാന്ദ്രതകൾ വ്യത്യസ്തമാണ്. Bartonellaയിൽ മെത്തിലീൻ നീല കോശസ്തരത്തെ ബാധിക്കുമെന്ന അനുമാനം കൂടുതൽ പഠനം ആവശ്യമായ ഊഹമായാണ് അവതരിപ്പിച്ചത്. ഫലങ്ങൾ ഒരു സ്പീഷീസിൽനിന്ന് മറ്റൊന്നിലേക്ക് ബാധകമാക്കരുത്; പരാന്നജീവികളെക്കുറിച്ചുള്ള വ്യാപകമായ അവകാശവാദങ്ങളെ ഒരു പ്രബന്ധവും പിന്തുണയ്ക്കുന്നില്ല. ഈ കാരണത്താലാണ് Borreliaയുടെയും Bartonellaയുടെയും അതിജീവനകോശങ്ങളെ താരതമ്യം ചെയ്യുന്ന അവലോകനം രണ്ടു ഗവേഷണസാഹിത്യങ്ങളെയും വേർതിരിച്ചുനിർത്തുന്നത്.

കൾച്ചർ ഫലങ്ങൾ ചികിത്സാക്രമമായി മാറാത്തത് എന്തുകൊണ്ട്

മെത്തിലീൻ നീല ഉപയോഗിച്ചുള്ള Bartonella ചികിത്സാക്രമം തിരയാനുള്ള താൽപര്യം മനസ്സിലാക്കാവുന്നതാണ്. ആ പ്രയോഗത്തെ ഒരു വാങ്ങൽപ്പട്ടികയായല്ല, മുന്നറിയിപ്പായാണ് കാണേണ്ടതെന്ന് ഈ പ്രബന്ധങ്ങൾ വ്യക്തമാക്കുന്നു.

ഒന്നാമതായി, ഒരു വെല്ലിലെ 5 micrograms per mL ഒരു മരുന്നുനിർദേശമല്ല. ആഗിരണം, വിതരണം, പ്രോട്ടീനുകളുമായുള്ള ബന്ധനം, കോശങ്ങൾക്കുള്ളിലേക്കുള്ള കടന്നുകയറ്റം, സഹിക്കാവുന്ന പരിധി എന്നിവ സംബന്ധിച്ച വിവരങ്ങളൊന്നും അതിനോടൊപ്പമില്ല. ആന്റിബയോട്ടിക്കുകളുടെ പരമാവധി സാന്ദ്രതകളുടെ ഏകദേശ ശരാശരിയായി രചയിതാക്കൾ അത് തിരഞ്ഞെടുത്തു. ഭാവിയിലെ പഠനങ്ങളിൽ ഓരോ മരുന്നും അതിന്റേതായ യാഥാർഥ്യസഹമായ സാന്ദ്രതയിൽ ഉപയോഗിക്കണമെന്നും അവർ പറഞ്ഞു.

രണ്ടാമതായി, പൂജ്യം കോളനികൾ എന്നതിനർഥം ആ പ്ലേറ്റിങ് സാഹചര്യങ്ങളിൽ കോളനികളില്ല എന്നതാണ്; കലകൾ അണുവിമുക്തമായി എന്നല്ല. അതിജീവനകോശങ്ങൾ, കോശങ്ങൾക്കുള്ളിലെ ബാക്ടീരിയകൾ, സാമ്പിളെടുപ്പിന്റെ പരിമിതികൾ എന്നിവയെല്ലാം അഗാർ പ്ലേറ്റിന്റെ പരിധിക്ക് പുറത്താണ്.

മൂന്നാമതായി, ഒരു വെല്ലിൽ സൂക്ഷ്മജീവികളെ പൂർണമായി ഇല്ലാതാക്കുന്ന മരുന്നുചേരുവകൾ ശരീരത്തിൽ പരാജയപ്പെടുകയോ ദോഷം വരുത്തുകയോ ചെയ്യാം. അസിത്രോമൈസിൻ–മെത്തിലീൻ നീല ചേരുവയും റിഫാംപിൻ–മെത്തിലീൻ നീല ചേരുവയും ലബോറട്ടറി സാന്ദ്രതകളിൽ പരിശോധിച്ച ലബോറട്ടറി ജോടികളാണ്. മൃഗങ്ങളിലെ ഫാർമക്കോകൈനറ്റിക്സ് വിവരങ്ങളും നിയന്ത്രിത മനുഷ്യപഠനങ്ങളിലെ വിവരങ്ങളും ഇല്ലാതെ ഡോസോ കാലയളവോ ഗുണവും അപകടസാധ്യതയും തമ്മിലുള്ള അനുപാതമോ നിർണയിക്കാനാവില്ല. തിരഞ്ഞെടുപ്പുകൾ പരിഗണിക്കുന്നവർ ഒരു ക്ലിനീഷ്യനുമായി അവ ചർച്ച ചെയ്യണം. പാത്രങ്ങളിലെ വിവരങ്ങളിൽനിന്ന് എന്തെങ്കിലും നിഗമനത്തിലെത്തുന്നതിനുമുമ്പ്, മെത്തിലീൻ നീലയുടെ ഉപയോഗത്തിന് എപ്പോൾ വൈദ്യമേൽനോട്ടം ആവശ്യമാണ് എന്നതും പരിശോധിക്കണം.

ഈ പ്രബന്ധങ്ങൾ പിന്തുണയ്ക്കുന്ന പരിമിതമായ നിഗമനം ഇതാണ്: വളർച്ചയില്ലാത്ത B. henselae JK53യ്‌ക്കെതിരെ മെത്തിലീൻ നീലയ്ക്ക് ശരീരത്തിന് പുറത്തുള്ള പരീക്ഷണങ്ങളിൽ ആവർത്തിച്ച് കാണിക്കാവുന്ന പ്രവർത്തനമുണ്ട്; രണ്ട് മരുന്നുകൾ ചേർത്തുള്ള ലബോറട്ടറി പരീക്ഷണങ്ങളും ഇതിൽ ഉൾപ്പെടുന്നു. മരുന്നുചേരുവകളിലും ബയോഫിലിമിൽനിന്ന് വേർതിരിച്ച കോശങ്ങളിലും ഏറ്റവും ശക്തമായ ഫലങ്ങൾ ലഭിച്ചത് 2020-ലെ പഠനത്തിലാണ്. മനുഷ്യരിലെ ബാർട്ടോനെല്ലോസിസിൽ ആ പ്രവർത്തനത്തിന് പ്രസക്തിയുണ്ടോ എന്നതടക്കം ബാക്കിയെല്ലാം ഇതുവരെ പരിശോധിച്ചിട്ടില്ല.