EMB അഗാറും MacConkey അഗാറും: മീഡിയ തിരഞ്ഞെടുക്കലും വ്യാഖ്യാനവും

ഒരു വിദ്യാർത്ഥി ഒരേ ജലസാമ്പിൾ രണ്ട് പ്ലേറ്റുകളിൽ സ്ട്രീക്ക് ചെയ്യുന്നു. ഒന്നിൽ പച്ച മെറ്റാലിക് തിളക്കമുള്ള ഇരുണ്ട കോളനികൾ പ്രത്യക്ഷപ്പെടുന്നു. മറ്റൊന്നിൽ മങ്ങിയ ഹാലോയോടുകൂടിയ തിളക്കമുള്ള പിങ്ക് കോളനികൾ കാണുന്നു. രണ്ട് പ്ലേറ്റുകളിലും ഒരേ ട്യൂബിൽ നിന്നാണ് ഇൻഒകുലേറ്റ് ചെയ്തത്, അരികരികെ ഇൻക്യൂബേറ്റ് ചെയ്തു, ഒരേ സമയത്താണ് വായിച്ചത്. ഏത് പ്ലേറ്റാണ് ശരിയെന്ന് വിദ്യാർത്ഥി ചോദിക്കുന്നു.

രണ്ട് പ്ലേറ്റുകളും ശരിയാണ്. അവ വ്യത്യസ്ത ചോദ്യങ്ങൾക്ക് ഉത്തരം നൽകുന്നു. ആന്ത്ര ബാക്ടീരിയയെ സ്ക്രീൻ ചെയ്യുന്നതിനുള്ള പരസ്പരം പകരംവയ്ക്കാവുന്ന രണ്ട് മീഡിയകളായി ഇവയെ കാണുന്നതിലാണ് ആശയക്കുഴപ്പം ഉണ്ടാകുന്നത്. Gram negative എന്ററിക് ജീവികളെ തിരഞ്ഞെടുക്കുകയും lactose fermenters-നെ nonfermenters-ൽ നിന്ന് വേർതിരിക്കുകയും ചെയ്യുക എന്ന പൊതുവായ ഉദ്ദേശ്യം ഇവയ്ക്കുണ്ട്, എന്നാൽ അതേ ഉദ്ദേശ്യം വ്യത്യസ്ത രസതന്ത്രവും വ്യത്യസ്ത ദൃശ്യതർക്കവും ഉപയോഗിച്ചാണ് ഇവ നടപ്പാക്കുന്നത്. അടിസ്ഥാനം രൂപപ്പെടുത്തുന്ന ഈ രണ്ട് ആശയങ്ങൾ മനസ്സിലായാൽ, പ്ലേറ്റ് തിരഞ്ഞെടുക്കലും കോളനി വായനയും പതിവ് നടപടികളായി മാറും.

ചുരുക്കത്തിലുള്ള ഉത്തരം

EMB അഗാർ eosin Y, methylene blue എന്നീ രണ്ട് ഡൈകൾ ഉപയോഗിക്കുന്നു. ഇവയ്ക്ക് ഇരട്ട ചുമതലയുണ്ട്: Gram positive വളർച്ചയെ തടയുകയും ശക്തമായി അമ്ലം ഉത്പാദിപ്പിക്കുന്നവയുടെ ചുറ്റും അവക്ഷേപിച്ച് ഇരുണ്ട കോളനികൾ സൃഷ്ടിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു; Escherichia coli-യിൽ പരമ്പരാഗതമായി മെറ്റാലിക് പച്ച തിളക്കം കാണാം. MacConkey അഗാർ ഈ ചുമതലകൾ വേർതിരിക്കുന്നു: bile salts-ഉം crystal violet-ഉം Gram positives-നെ തടയുന്നു, lactose fermentation-നുള്ള സബ്സ്ട്രേറ്റ് നൽകുന്നു, neutral red അമ്ലം രൂപപ്പെടുന്നതിനെ പിങ്ക് അല്ലെങ്കിൽ ചുവപ്പ് കോളനികളായി സൂചിപ്പിക്കുന്നു. E. coli-യെ വ്യക്തമായി presumptive ആയി പ്രകടിപ്പിക്കുകയാണ് ലക്ഷ്യമെങ്കിൽ EMBയ്ക്ക് പ്രത്യേക പ്രയോജനം ഉണ്ട്. പ്രത്യേകിച്ച് stool അല്ലെങ്കിൽ urine workflow-കളിൽ lactose fermenters-നെ nonfermenters-ൽ നിന്ന് വ്യക്തമായി പിങ്ക് vs നിറമില്ലാത്ത രൂപത്തിൽ വേർതിരിക്കുകയാണ് ലക്ഷ്യമെങ്കിൽ MacConkey സാധാരണയായി വായിക്കാൻ എളുപ്പമാണ്. നിറം മാത്രം ആശ്രയിച്ച് ഒരു പ്ലേറ്റും ജീവിയെ തിരിച്ചറിയുന്നില്ല.

EMB: ഒരേസമയം തിരഞ്ഞെടുക്കുകയും സൂചിപ്പിക്കുകയും ചെയ്യുന്ന ഡൈകൾ

EMBയുടെ ആശയം selection-ഉം indication-ഉം അതേ അണുക്കളിൽ സംയോജിപ്പിക്കുന്നു. ASM eosin methylene blue agar പ്രോട്ടോക്കോൾ EMBയെ selective-ഉം differential-ഉം ആയ മീഡിയയായി വിവരിക്കുന്നു; ഡൈകളുടെ കൂട്ടം പല Gram positive ജീവികളെയും തടയുമ്പോൾ lactose fermentation ഡൈയുടെ uptake-ഉം precipitation-ഉം പ്രേരിപ്പിക്കുന്നു. Levine EMB agar-നുള്ള FDA BAM രീതി പട്ടികപ്പെടുത്തിയിരിക്കുന്ന ഒരു സാധാരണ Levine formulation-ൽ peptone, lactose, phosphate, eosin Y, methylene blue, agar എന്നിവ അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു. പഴയ ചില EMB recipe-കളിൽ lactose-ിനൊപ്പം sucrose കൂടി ചേർത്തിരുന്നു, എന്നാൽ Levine EMBയിൽ lactose മാത്രമാണുള്ളത്, sucrose ഇല്ല. അതിനാൽ നിങ്ങളുടെ ലബോറട്ടറിയിൽ ഉപയോഗിക്കുന്ന formulation ഏതാണെന്ന് രേഖപ്പെടുത്തുക.

EMB വായിക്കുമ്പോൾ ഡൈയുടെ പെരുമാറ്റമാണ് വായിക്കുന്നത്. ശക്തമായ lactose fermentation മതിയായ അമ്ലം ഉത്പാദിപ്പിച്ച് കനത്ത dye precipitation സൃഷ്ടിക്കുന്നു; അതിലൂടെ E. coli-യ്ക്ക് ഇരുണ്ട നീല-കറുപ്പ് കേന്ദ്രങ്ങളും, പരമ്പരാഗത സാഹചര്യത്തിൽ reflected light-ൽ മെറ്റാലിക് പച്ച തിളക്കവും ലഭിക്കുന്നു. Enterobacter, Klebsiella പോലുള്ള ദുർബല fermenters സാധാരണയായി തിളക്കമില്ലാത്ത പിങ്ക് മുതൽ പർപ്പിൾ വരെയുള്ള mucoid കോളനികളായി വളരുന്നു. Salmonella, Shigella, Proteus പോലുള്ള nonfermenters സാധാരണയായി നിറമില്ലാത്തതോ സുതാര്യമായതോ ആയ കോളനികളായി വളരുന്നു, കാരണം ഡൈകൾ അവക്ഷേപിപ്പിക്കുന്നത്ര ശക്തമായ അമ്ല ഉത്പാദനം അവയ്ക്കില്ല. Gram positives സാധാരണയായി തടയപ്പെടുന്നു, എങ്കിലും തടയൽ പൂർണ്ണമല്ല; strain-നും product-നും അനുസരിച്ച് വ്യത്യാസപ്പെടാം. methylene blue ആദ്യം തന്നെ cationic stain ആയി പെരുമാറുന്നതിന്റെ കാരണം ഉൾപ്പെടെയുള്ള സമ്പൂർണ്ണ dye preparation chemistry ഡൈ formulation-കളെക്കുറിച്ചുള്ള വേറൊരു ചർച്ചയുടെ വിഷയമാണ്; പൊതുവായ microscopy പശ്ചാത്തലം staining methods atlas-ൽ ലഭ്യമാണ്. ഈ ലേഖനം പ്ലേറ്റ് തിരഞ്ഞെടുക്കലിലും വായനയിലും മാത്രം കേന്ദ്രീകരിക്കുന്നു.

മുകളിലെ ചിത്രം ഉദാഹരണത്തിനുള്ളതാണ്. പ്രതീക്ഷിക്കേണ്ട ദൃശ്യതർക്കമാണ് അത് കാണിക്കുന്നത്: EMBയിൽ ഇരുണ്ട തിളക്കമുള്ള കോളനികൾ, പിങ്ക് mucoid തരങ്ങൾ, മങ്ങിയ തരങ്ങൾ; അതിനോടു താരതമ്യമായി MacConkeyയിൽ പിങ്ക് vs മങ്ങിയ തരങ്ങൾ. pattern പഠിക്കാൻ ഇത് ഉപയോഗിക്കുക; തുടർന്ന് ഓരോ വിലയിരുത്തലും ഫോട്ടോഗ്രാഫ് ചെയ്ത controls-നോടും നിങ്ങളുടെ bench-ലുള്ള കൃത്യമായ medium-ന്റെ product insert-നോടും താരതമ്യം ചെയ്ത് സ്ഥിരീകരിക്കുക.

MacConkey: വേർതിരിച്ച ചുമതലകൾ, ലളിതമായ ദൃശ്യനിയമം

MacConkey ആശയം ഓരോ ചുമതലയും വേറിട്ട ingredient-ന് നൽകുന്നു. ASM MacConkey agar പ്രോട്ടോക്കോൾ ഇതേ selective, differential സമീപനം അവതരിപ്പിക്കുന്നു; MacConkey agar-നുള്ള FDA BAM രീതി പ്രവർത്തനഘടകങ്ങളായ peptones, lactose, bile salts, salt, neutral red, crystal violet, agar എന്നിവ പട്ടികപ്പെടുത്തുന്നു. Bile salts-ഉം crystal violet-ഉം Gram positives-നെതിരെ selection നൽകുന്നു. Lactose fermentation-നുള്ള substrate നൽകുന്നു. Neutral red pH reporter ആയി പ്രവർത്തിക്കുകയും അമ്ലം രൂപപ്പെടുന്നിടത്ത് പിങ്ക് മുതൽ ചുവപ്പ് വരെ നിറം കാണിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു; ശക്തമായ fermenters-ന്റെ ചുറ്റും ചിലപ്പോൾ precipitated bile കാണാം.

വായനാനിയമം ഉദ്ദേശപൂർവ്വം ലളിതമാണ്: പിങ്ക് എന്നാൽ lactose fermenter, നിറമില്ലാത്തതോ മങ്ങിയതോ എന്നാൽ nonfermenter. E. coli പിങ്ക് മുതൽ ചുവപ്പ് വരെ കാണപ്പെടുന്നു, പലപ്പോഴും bile precipitate halo കൂടിയുണ്ടാകും. Klebsiella, Enterobacter എന്നിവ പിങ്ക് നിറത്തിലും capsule കാരണം പലപ്പോഴും mucoid രൂപത്തിലും കാണപ്പെടുന്നു. Salmonella, Shigella, Proteus, മറ്റ് നിരവധി Gram negative rods എന്നിവ നിറമില്ലാത്തതായി കാണപ്പെടുന്നു. teaching lab-കളിൽ മറ്റൊരു ഗുണവും പ്രാധാന്യമുണ്ട്: bile salts സാധാരണയായി Proteus swarming കുറയ്ക്കുന്നു, അതിനാൽ nonselective media-യേക്കാൾ MacConkeyയിൽ isolated colonies നേടുന്നത് എളുപ്പമാണ്. എന്നിരുന്നാലും suppression പൂർണ്ണമല്ല; swarming control പ്രധാനലക്ഷ്യമാണെങ്കിൽ salt free alternatives ലഭ്യമാണ്.

ഡൈകൾ ഇങ്ങനെ പെരുമാറുന്നതിനുള്ള molecular കാരണം charge-ലും structure-ലുമാണ്. Methylene blue ഒരു cationic phenothiazine dye ആണ്; അതിന്റെ structure and properties അമ്ലസ്വഭാവമുള്ള bacterial surfaces-നോടുള്ള affinity വിശദീകരിക്കുന്നു. EMBയിലെ acidic zones-ൽ അത് precipitate ചെയ്യുമ്പോഴും പ്രവർത്തിക്കുന്നത് ഇതേ affinity തന്നെയാണ്.

ഒറ്റനോട്ടത്തിലുള്ള താരതമ്യം

പട്ടികയെ ഒരു decision procedure ആയി വായിക്കുക. വിദ്യാർത്ഥികൾക്ക് fermentation strength-ന്റെ gradient ഒരു വ്യക്തമായ dramatic endpoint സഹിതം കാണേണ്ട exercise ആണെങ്കിൽ EMB അത് കാണിക്കുന്നു. biochemical confirmation-ന് മുമ്പ് വേഗത്തിൽ binary sort വേണമെങ്കിൽ MacConkey അത് നൽകുന്നു.

ഏത് സാമ്പിളിന് ഏത് medium

presumptive fecal coliform അല്ലെങ്കിൽ E. coli recognition ലക്ഷ്യമിടുന്ന water exercise-കൾക്ക് EMB ആകർഷകമാണ്, കാരണം sheen ദൃശ്യമായി വ്യക്തമാണ്. MacConkeyയും enteric Gram negatives കൈകാര്യം ചെയ്യുന്നു, കൂടാതെ ചരിത്രപരമായി water testing-ലും ഉപയോഗിച്ചിട്ടുണ്ട്. എന്നാൽ test അനുസരിച്ച് modified mTEC അല്ലെങ്കിൽ MI പോലുള്ള media നിർദേശിക്കാവുന്ന regulatory water method-ന് പകരമായി ഒരു പ്ലേറ്റും ഉപയോഗിക്കരുത്. നിങ്ങളുടെ laboratory പാലിക്കേണ്ട method പരിശോധിക്കുക.

fermenters-നെ nonfermenters-ൽ നിന്ന് വേർതിരിക്കുന്ന stool-style separation-കൾക്ക് ഈ രണ്ടിൽ MacConkey സാധാരണയായി കൂടുതൽ പ്രയോജനപ്രദമാണ്. Salmonella അല്ലെങ്കിൽ Shigella ലക്ഷ്യമിടുന്ന practical stool work-ൽ സാധാരണയായി MacConkey മാത്രം ആശ്രയിക്കാതെ XLD അല്ലെങ്കിൽ Hektoen enteric പോലുള്ള കൂടുതൽ selective enteric media കൂടി ഉപയോഗിക്കുന്നു.

clinical workflow അനുകരിക്കുന്ന urine-style teaching-ൽ MacConkey blood agar-നൊപ്പം ഉപയോഗിക്കുക. MacConkey പ്രാരംഭ Gram negative sort നൽകുമ്പോൾ, MacConkey തടയുന്ന ജീവികളെയും blood agar വളർത്തുന്നു. urine culture setup-ന്റെ clinical വിവരണങ്ങളിൽ ഈ pairing സാധാരണമാണ്.

ശുദ്ധമായ concept teaching-നായി രണ്ടും ഉപയോഗിക്കുക. fermentation strength പ്രധാനമാണെന്നും ഒരേ molecule രണ്ട് roles നിർവഹിക്കാമെന്നും EMB പഠിപ്പിക്കുന്നു. selector, substrate, reporter എന്നിവ വേർതിരിച്ചിരിക്കുന്ന modular design ആണ് MacConkey പഠിപ്പിക്കുന്നത്. അറിയപ്പെടുന്ന E. coli, അറിയപ്പെടുന്ന Klebsiella aerogenes, അറിയപ്പെടുന്ന Salmonella എന്നിവ രണ്ട് media-യിലും അരികരികെ streak ചെയ്യുന്ന വിദ്യാർത്ഥികൾ സാധാരണയായി ഈ രണ്ട് തർക്കങ്ങളും വീണ്ടും കലർത്താറില്ല.

ഓരോ term-ലും ആവർത്തിക്കുന്ന വായനാപിഴവുകൾ

ഏറ്റവും സാധാരണമായ പിഴവ് നിറം മാത്രം അടിസ്ഥാനമാക്കി identification നടത്തുന്നതാണ്. MacConkeyയിലെ pink colony E. coli, Klebsiella, Enterobacter, അല്ലെങ്കിൽ മറ്റൊരു fermenter ആയിരിക്കാം. നിറമില്ലാത്ത colony Salmonella, Shigella, Proteus, Pseudomonas, അല്ലെങ്കിൽ മറ്റൊരു nonfermenter ആയിരിക്കാം. നിറം ഒരു screening phenotype ആണ്; species name അല്ല. അത് Gram stain, oxidase, biochemical panels, instrument identification എന്നിവ പോലുള്ള confirmatory work-നെ നയിക്കുന്നു.

രണ്ടാമത്തെ പിഴവ് sheen ഇല്ലാത്തതിനെ അതിരുകടന്ന് വ്യാഖ്യാനിക്കുന്നതാണ്. ചില യഥാർത്ഥ E. coli colonies, പ്രത്യേകിച്ച് isolated colonies, EMBയിൽ വളരെ കുറച്ച് metallic sheen മാത്രമോ ഒന്നുമില്ലാതെയോ കാണാം. sheen ഇല്ലാത്തത് E. coli-യെ ഒഴിവാക്കുന്നില്ല; sheen ഉള്ളത് അതിനെ തെളിയിക്കുന്നുമില്ല. sheen-നെ presumptive clue ആയി മാത്രം കാണുക.

മൂന്നാമത്തെ പിഴവ് വ്യത്യസ്ത പ്രായമുള്ള plates താരതമ്യം ചെയ്യുന്നതാണ്. delayed lactose fermenters നീണ്ട incubation-ന് ശേഷം MacConkeyയിൽ പിങ്ക് ആകാം; ഇത് fermenter vs nonfermenter എന്ന വ്യക്തമായ വിഭജനം മങ്ങിയതാക്കുന്നു. laboratory നിർദേശിച്ച മണിക്കൂറിൽ വായിക്കുകയും incubation time result-നൊപ്പം രേഖപ്പെടുത്തുകയും ചെയ്യുക.

നാലാമത്തെ പിഴവ് mixed growth-നെ ഒരൊറ്റ organism ആയി വായിക്കുന്നതാണ്. colorless colony-യുടെ അടുത്തുള്ള pink colony രണ്ട് phenotypes ആണ് കാണിക്കുന്നത്, ഒരു intermediate അല്ല. നന്നായി isolated colonies തിരഞ്ഞെടുക്കുകയും ഓരോ morphotype-ഉം പ്രത്യേകം കൈകാര്യം ചെയ്യുകയും ചെയ്യുക. Mucoid texture സമാനമായൊരു trap സൃഷ്ടിക്കുന്നു: Klebsiellaയും Enterobacterയും mucoid ആയി തോന്നാം, അതിനാൽ capsule മാത്രം പേരുറപ്പിക്കില്ല. മുമ്പ് Enterobacter aerogenes എന്ന് പഠിപ്പിച്ചിരുന്ന organism ഇപ്പോൾ Klebsiella aerogenes ആയി വർഗ്ഗീകരിക്കപ്പെടുന്നു; പഴയ charts-ും പുതിയ labels-ും തമ്മിൽ വൈരുദ്ധ്യമുള്ളതായി തോന്നുന്നതിന്റെ കാരണം ഇതാണ്.

Controls-ും അവസാന നിയമവും

ഓരോ session-ലും photographed അല്ലെങ്കിൽ fresh controls ഉപയോഗിക്കുക: strong fermenter reaction-നായി E. coli, classic sheen ഇല്ലാത്ത mucoid fermentation-നായി Klebsiella aerogenes, colorless nonfermenter reaction-നായി ഒരു Salmonella strain, നിങ്ങളുടെ കൃത്യമായ product-ൽ Gram positive suppression സ്ഥിരീകരിക്കാൻ Staphylococcus aureus. bile, crystal violet, dye content എന്നിവ അനുസരിച്ച് selectivity മാറുന്നതിനാൽ strain numbers-ും acceptance criteria-യും manufacturer insert-നോട് പൊരുത്തപ്പെടുത്തുക.

bench-ൽ ഒരു വാചകം ഓർക്കുക. EMB തിരഞ്ഞെടുക്കുകയും സൂചിപ്പിക്കുകയും ചെയ്യുന്ന ഡൈകൾ ഉപയോഗിക്കുന്നു; അതിലൂടെ കൂടുതൽ സൂക്ഷ്മമായ വായനയുടെ വിലയ്ക്ക് വ്യക്തമായ E. coli signal ലഭിക്കുന്നു. MacConkey selection-നെയും indication-നെയും വേർതിരിക്കുന്നു; അതിലൂടെ fermentation-ന്റെ കുറവ് വിശദാംശങ്ങളുടെ വിലയ്ക്ക് വ്യക്തമായ pink vs pale sort ലഭിക്കുന്നു. ചോദ്യം ഏത് ആശയത്തെ പരീക്ഷിക്കുന്നുവോ അതിനനുസരിച്ച് medium തിരഞ്ഞെടുക്കുക, നിറം ശരിയായ tests ഉപയോഗിച്ച് സ്ഥിരീകരിക്കുക; അപ്പോൾ ഈ രണ്ട് plates പരസ്പരം മത്സരിക്കുന്നത് നിർത്തി പരസ്പരം പൂരകങ്ങളായി പ്രവർത്തിക്കും.