EMB агар наспроти MacConkey агар: избор и толкување на подлогите

Студент засадува ист примерок од вода со истријување на две плочи. На едната се појавуваат темни колонии со зелен метален сјај. На другата се појавуваат светлорозови колонии со заматен ореол. Двете плочи се инокулирани од истата епрувета, инкубирани една до друга и прочитани во истиот час. Студентот прашува која плоча е точна.

И двете плочи се точни. Тие одговараат на различни прашања. Забуната настанува кога двете подлоги се третираат како меѓусебно заменливи скрининг-подлоги за цревни бактерии. Тие имаат заедничка цел: да селектираат Gram-негативни ентерични организми и да ги разликуваат ферментаторите на лактоза од неферментаторите, но таа цел ја постигнуваат со различна хемија и различна визуелна логика. Откако ќе ги разберете двата основни концепта, изборот на плоча и читањето на колониите стануваат рутински.

Краткиот одговор

EMB агар користи две бои, eosin Y и methylene blue, кои имаат двојна улога: го потиснуваат растот на Gram-позитивните организми и се таложат околу силните создавачи на киселина, создавајќи темни колонии, класично со метално зелен сјај кај Escherichia coli. MacConkey агар ги раздвојува улогите: жолчните соли заедно со crystal violet ги потиснуваат Gram-позитивните организми, лактозата овозможува ферментација, а neutral red ја прикажува киселоста како розови или црвени колонии. Ако задачата е впечатлива претпоставена демонстрација на E. coli, EMB има јасна улога. Ако задачата е јасно раздвојување на ферментатори на лактоза со розова боја од безбојни неферментатори, особено во работни текови со столица или урина, MacConkey обично е поедноставен за читање. Ниту една од плочите не идентификува организам само според бојата.

EMB: бои што истовремено селектираат и сигнализираат

Концептот на EMB ги обединува селекцијата и индикацијата во истите молекули. Протоколот на ASM за eosin methylene blue агар го опишува EMB и како селективна и како диференцијална подлога, при што парот бои го инхибира растот на многу Gram-позитивни организми, додека ферментацијата на лактоза предизвикува врзување и таложење на боите. Стандардната формулација Levine содржи пептон, лактоза, фосфат, eosin Y, methylene blue и агар, како што е наведено во FDA BAM методот за Levine EMB агар. Имајте предвид дека постарите EMB рецептури понекогаш содржеле сахароза покрај лактозата, додека Levine EMB содржи лактоза без сахароза, затоа евидентирајте која формулација ја користи вашата лабораторија.

Читањето на EMB значи читање на однесувањето на боите. Интензивната ферментација на лактозата создава доволно киселина за да предизвика обилно таложење на боите, што на E. coli му дава темносини до црни центри и, во класичниот случај, метално зелен сјај на рефлектирана светлина. Послабите ферментатори, како Enterobacter и Klebsiella, обично растат како розови до виолетови мукоидни колонии без таков сјај. Неферментаторите, како Salmonella, Shigella и Proteus, генерално растат како безбојни или проѕирни колонии бидејќи не создаваат нагло количество киселина што би ги исталожило боите. Gram-позитивните организми обично се потиснати, иако степенот на потиснување варира зависно од сојот и производот. Целосната хемија на подготовката на боите, вклучително и причината зошто methylene blue првенствено се однесува како катјонска боја, припаѓа во посебна дискусија за формулациите на бои, а општиот контекст за микроскопија се наоѓа во атласот на методи за боење. Оваа статија се задржува на изборот и читањето на плочите.

Сликата погоре е илустративна. Таа ја прикажува визуелната логика што треба да се очекува: темни колонии со сјај, розови мукоидни типови и бледи типови на EMB, наспроти розови и бледи типови на MacConkey. Користете ја за да ја научите шемата, а потоа секое толкување потврдете го со фотографирани контроли и со упатството за точната подлога што ја користите на работната маса.

MacConkey: одвоени улоги, поедноставно визуелно правило

Концептот на MacConkey доделува посебна состојка за секоја улога. Протоколот на ASM за MacConkey агар ја користи истата рамка на селективна и диференцијална подлога, а FDA BAM методот за MacConkey агар ги наведува функционалните компоненти: пептони, лактоза, жолчни соли, сол, neutral red, crystal violet и агар. Жолчните соли заедно со crystal violet селектираат против Gram-позитивните организми. Лактозата го обезбедува супстратот за ферментација. Neutral red служи како индикатор за pH и станува розов до црвен таму каде што се создава киселина, понекогаш со исталожена жолчка околу силните ферментатори.

Правилото за читање намерно е едноставно: розово значи ферментатор на лактоза, а безбојно или бледо значи неферментатор. E. coli изгледа розово до црвено, често со ореол од исталожена жолчка. Klebsiella и Enterobacter изгледаат розово и често се мукоидни поради нивните капсули. Salmonella, Shigella, Proteus и многу други Gram-негативни стапчиња изгледаат безбојно. Една дополнителна корист е важна во наставните лаборатории: жолчните соли генерално го намалуваат роевиот раст на Proteus, па изолирани колонии полесно се добиваат на MacConkey отколку на неселективни подлоги, иако потиснувањето не е апсолутно и постојат алтернативи без сол кога контролата на роевиот раст е приоритет.

Молекуларната причина за ваквото однесување на боите е поврзана со полнежот и структурата. Methylene blue е катјонска фенотиазинска боја чии структура и својства го објаснуваат нејзиниот афинитет кон киселите бактериски површини, истиот афинитет што дејствува и кога се таложи во киселите зони на EMB.

Споредба на прв поглед

Читајте ја табелата како постапка за одлучување. Кога вежбата бара студентите да видат градација на јачината на ферментацијата со една впечатлива крајна реакција, EMB го прикажува тоа. Кога вежбата бара брзо бинарно раздвојување пред биохемиска потврда, MacConkey го прикажува тоа.

Која подлога за кој примерок

За вежби со вода насочени кон претпоставено препознавање на фекални колиформни бактерии или E. coli, EMB е привлечен бидејќи сјајот е визуелно препознатлив. MacConkey исто така е погоден за ентерични Gram-негативни организми и историски се користел за вода, но ниту една од овие плочи не заменува регулаторен метод за испитување вода, кој зависно од тестот може да пропишува подлоги како modified mTEC или MI. Проверете го методот што вашата лабораторија е должна да го следи.

За раздвојувања слични на оние кај примероци од столица, каде што ферментаторите се одделуваат од неферментаторите, MacConkey генерално е покорисен од овие две подлоги. Практичната работа со столица за Salmonella или Shigella вообичаено вклучува и поселективни ентерични подлоги како XLD или Hektoen enteric, наместо да се потпира само на MacConkey.

За наставни вежби со урина што имитираат клинички работен тек, комбинирајте MacConkey со крвен агар. MacConkey овозможува рано раздвојување на Gram-негативните организми, додека крвниот агар овозможува раст на организми што MacConkey ги потиснува. Оваа комбинација е стандардна во клиничките описи за поставување уринокултура.

За чисто концептуална настава, користете ги двете. EMB покажува дека јачината на ферментацијата е важна и дека една молекула може да има две улоги. MacConkey покажува модуларен дизајн: селекторот, супстратот и индикаторот се одвоени. Студентите што ќе засеат познат E. coli, познат Klebsiella aerogenes и познат Salmonella еден до друг на двете подлоги ретко повторно ги мешаат двете логики.

Замки при читањето што се повторуваат секој семестар

Најчестата грешка е идентификација само според бојата. Розова колонија на MacConkey може да биде E. coli, Klebsiella, Enterobacter или друг ферментатор. Безбојна колонија може да биде Salmonella, Shigella, Proteus, Pseudomonas или друг неферментатор. Бојата е скрининг-фенотип што го насочува потврдното испитување, како Gram боење, оксидаза, биохемиски панели или инструментална идентификација, а не име на вид.

Втората грешка е преголемо значење на отсуството на сјај. Некои вистински колонии на E. coli, особено изолираните, создаваат малку или воопшто немаат метален сјај на EMB. Отсуството на сјај не го исклучува E. coli, а присуството на сјај не го докажува. Третирајте го сјајот како претпоставен показател.

Третата грешка е споредување плочи со различна старост. Ферментаторите што доцна ја ферментираат лактозата можат да станат розови на MacConkey по продолжена инкубација, со што се замаглува јасната поделба меѓу ферментатори и неферментатори. Читајте во часот што го пропишува лабораторијата и запишете го времето на инкубација заедно со резултатот.

Четвртата грешка е толкување на мешан раст како еден организам. Розова колонија до безбојна колонија претставува два фенотипа, а не некаква средна состојба. Изберете добро изолирани колонии и обработувајте го секој морфотип одделно. Мукоидната текстура создава слична замка: и Klebsiella и Enterobacter можат да изгледаат мукоидно, па само капсулата никогаш не го одредува името. Организмот што порано се изучуваше како Enterobacter aerogenes сега е класифициран како Klebsiella aerogenes, што објаснува зошто постарите табели и поновите ознаки изгледаат како да не се согласуваат.

Контроли и завршно правило

Во секоја сесија користете фотографирани или свежи контроли: E. coli за реакцијата на силен ферментатор, Klebsiella aerogenes за мукоидна ферментација без класичниот сјај, сој на Salmonella за безбојната реакција на неферментатор и Staphylococcus aureus за да го потврдите потиснувањето на Gram-позитивните организми кај конкретниот производ што го користите. Усогласете ги броевите на соевите и критериумите за прифаќање со упатството на производителот, бидејќи селективноста се менува зависно од содржината на жолчка, crystal violet и бои.

Запомнете една реченица на работната маса. EMB користи бои што истовремено селектираат и сигнализираат, што дава впечатлив сигнал за E. coli по цена на посуптилно читање. MacConkey ги раздвојува селекцијата и сигнализирањето, што дава едноставно раздвојување на розови од бледи колонии по цена на помалку детали за ферментацијата. Изберете ја подлогата чиј концепт одговара на прашањето, потврдете ја бојата со соодветни тестови и двете плочи престануваат да се натпреваруваат и почнуваат да се надополнуваат.