Manga metilena vaovao sy fandokoana retikilosita: loko hafa sy fomba ampiasaina amin'ny sela velona

Manomana fanisana retikilosita ny mpianatra iray, manafatra manga metilena, mampifangaro izany amin'ny ra, ary saika tsy mahita na inona na inona. Mampiasa tavoahangy misy soratra hoe manga metilena vaovao ny mpiara-mianatra aminy, ka mahita kofehy manga mazava ao anatin'ny ampahany amin'ny liomena. Mihevitra ilay mpianatra voalohany fa vao haingana kokoa na mifantoka kokoa ny loko ao amin'ilay tavoahangy faharoa. Tsy izany na izany anefa. Molekiola hafa no ao anatiny.

Io fahadisoana amin'ny fahazoana ny hevitra io no fototry ny ankamaroan'ny fifangaroan-kevitra amin'ity sehatra ity. Toa milaza ilay anarana fa andiana manga metilena nohatsaraina ny manga metilena vaovao. Hafa kosa no asehon'ny simia. Ny manga metilena vaovao N dia loko fenotiazina miavaka, manana ny laharany manokana ao amin'ny Colour Index, ny firafitry ny vondrona mpisolo toerana azy manokana, ary ny anjara asany manokana voafaritra araka ny fenitra amin'ny hematolojia. Rehefa mazava io fahasamihafana io, dia mora takarina ny ambin'ny fomba fiasa: nahoana no tsy maintsy mbola velona ny sela rehefa lokoina, inona no isaina ho retikilosita, aiza no idiran'ny vatan'i Heinz, ary rahoviana no ampiasaina ny manga kresila mamirapiratra.

Ny valiny fohy

Ny manga metilena vaovao N, réactif ampiasaina amin'ny hematolojia, dia fantatra amin'ny ankapobeny ho Basic Blue 24 ao amin'ny firaketana PubChem momba ny manga metilena vaovao, C.I. 52030, CAS 1934-16-3, manana raikipohy C18H22ClN3S. Ny manga metilena mahazatra kosa dia klôrorida metiltioninioma, Basic Blue 9, ao amin'ny firaketana PubChem momba azy, C.I. 52015, CAS 61-73-4, manana raikipohy C16H18ClN3S. Raha jerena ny firafiny, ny manga metilena vaovao dia manana vondrona metila roa eo amin'ny peratra sy rojo sisiny etilamino, fa vondrona dimetilamino kosa no ananan'ny manga metilena. Manova ny fomba fandokoany io fahasamihafana io. Ny boky hematolojia dia milaza fa somary ratsy fandokoana retikilosita ny manga metilena mahazatra, fa ny manga metilena vaovao kosa manome loko lalina kokoa sy mitovy kokoa. Voafintina ao amin'ny lohahevitra ScienceDirect momba ny manga metilena vaovao io fampitahana io.

Eny, loko supravital ny manga metilena vaovao. Ny fandokoana supravital dia fandokoana sela velona rehefa avy nesorina tao amin'ny vatana ary alohan'ny fiksasiona, araka ny famaritana ao amin'ny famerenana NCBI momba ny fototry ny fandokoana supravital. Samy ao anatin'io sokajy io ny manga metilena vaovao sy ny manga kresila mamirapiratra, ary ny fenitra CLSI momba ny retikilosita dia milaza mazava ny manga metilena vaovao ho loko supravital. Indraindray ny mpianatra dia mampiditra izany ao anatin'ny fandokoana Romanowsky amin'ny sosona sela efa nanaovana fiksasiona. Tsy mety eto anefa izany fomba fihevitra izany. Raha atao aloha ny fiksasiona, dia tsy mandeha intsony ilay fomba.

Ho an'ny mpamaky te hahafantatra ireo anaran-loko mitovitovy, ny manga metila sy manga metilena dia miresaka fifangaroan-kevitra hafa sy lehibe kokoa eo amin'ny loko triarilmetana anionika sy ny fianakavian'ny fenotiazina kationika. Ny topimaso momba ny fandokoana any amin'ny laboratoara dia mametraka ny fomba supravital eo anilan'ireo fomba mampiasa sosona efa nanaovana fiksasiona, ary ny torolalana momba ny bikan'ny selan-dra dia mampiseho ny toeran'ny fanombanana retikilosita ao anatin'ny fanavahana selan-dra midadasika kokoa.

Fanamarihana iray momba ny katalaogy: misy endrika hafa amin'ny manga metilena vaovao, dia sira roa sosona misy klôrorida fanitso, mitondra ny CAS 6586-05-6. Noho izany, tokony hotononina ao amin'ny fizarana momba ny fomba fiasa ny endriky ny sira sy ny mpamatsy, fa tsy ny anarana mahazatra fotsiny.

Ny tena ataon'ny fandokoana supravital

Ny retikilosita dia liomena tanora efa very ny vihiny nefa mbola mitahiry sisa tavela amin'ny RNA ribôzômika. Tsy hita io RNA io ao amin'ny santionany mando tsy mbola nolokoina. Miditra ao amin'ny sela velona ny loko supravital ary mampivaingana na mampivondrona io RNA io ho voa madinika sy kofehy manga, izay mandrafitra ilay akora toy ny tambajotran-kofehy hita rehefa ampiasaina ny fanitrihana menaka. Vokatry ny fandokoana àry ilay tambajotra, fa tsy rafitra efa nisy niandry loko. Izany no mahatonga ireo masontsivana amin'ny fomba fiasa — ny fifantohan'ny loko, ny tampon, ny tahan'ny ra amin'ny loko, ny mari-pana ary ny fotoana — hanana lanjany mitovy amin'ny anaran'ilay loko.

Ny vokany amin'ny fampiharana dia filaharana hentitra: afangaro amin'ny loko aloha ny ra efa nampiana akora manakana ny fivainganana, avela mandritra ny fotoana voafaritra, avy eo atao sosona manify ary dinihina tsy nanaovana fiksasiona na fandokoana fanampiny. Ny fiksasiona alohan'ny fandokoana, na ny fandokoana fanampiny izay manarona ireo kofehy zara raha hita, dia manimba ny fampahalalana iankinan'ny fanisana.

Fomba fiasa azo ampiharina amin'ny retikilosita amin'ny manga metilena vaovao

Tsy misy fangaro tokana ampiasaina maneran-tany, ka lazao izay tena nampiasaina. Ireto karazany telo voarakitra ireto no mampiseho ny elanelan'ny fomba misy.

Ny fomba mahazatra karazana Brecher dia mampiasa manga metilena vaovao manodidina ny 0.5 percent miaraka amin'ny ôksalata potasioma, afangaro amin'ny ra misy EDTA efa nafangaro tsara, amin'ny habetsahana mitovy, ary avela eo amin'ny mari-pana ao amin'ny efitra mandritra ny 10 ka hatramin'ny 15 minitra eo ho eo. Rehefa avy afangaro moramora indray, dia atao sosona manify miendrika anja, avela ho mainan'ny rivotra, ary dinihina tsy misy fiksasiona amin'ny ôbjektifa 100x ampiasana menaka. Ny fomba NCBI fanisana retikilosita dia mamaritra io fizotran'ny asa io sy ny faritra fanisana ampiasaina miaraka aminy.

Ny karazany Dacie sy Lewis dia mampiasa manga metilena vaovao 1.0 percent ao anaty ranon-tsira misy sitrata, afangaro amin'ny ra manana habetsahana 2 ka hatramin'ny 4 heny, ary tazonina amin'ny 37 C mandritra ny 15 ka hatramin'ny 20 minitra alohan'ny hanaovana sosona manify. Fampiharana vao haingana ho fampirindrana ny fomba CLSI H44 no nampiasa vahaolana tsy dia mifantoka, 0.1 percent, ao anaty ranon-tsira misy tampon fôsfata amin'ny pH 7.4, navela tamin'ny 20 C nandritra ny 10 minitra ary tsy nanaovana fiksasiona, araka ny voalaza ao amin'ny fanadihadiana 2026 momba ny fampirindrana NMB.

Mitovy amin'ireo karazany rehetra ireo ny fitsipika fanisana. Isao ho retikilosita ny sela rehefa misy voa madinika manga na sombin-kofehy roa misaraka farafahakeliny ao anatiny, ka tsy tafiditra amin'izany ny tahirin-loko mitokana. Manisà liomena 1,000 farafahakeliny amin'ny asa andavanandro ary asehoy ho isan-jato ny retikilosita. Rehefa ambany ny isan-jato dia mitaky sela betsaka kokoa ny statistika. Ny famerenana ny fomba CLSI H44 dia manamarika fa rehefa manakaiky ny 1 percent ny retikilosita dia ilaina ny sela manodidina ny 4,400 mba hampidinana ny fiovaovan'ny fanisana ho 5 percent, ao amin'ny famerenana CLSI H44 ao amin'ny De Gruyter. Manamora ny fanisana sela maro ny kapila Miller ao amin'ny ôkilera. Sivano ny loko na manamboara vaovao, satria mety ho toa voa madinika ao anatin'ny sela ny loko mivaingana.

Vatan'i Heinz ao amin'ilay santionany ihany

Ilay sosona supravital ihany dia afaka mampiseho vatan'i Heinz koa, izay fitambaran'ny hemôglôbinina niharan'ny ôksidasiona sy niova firafitra, fa tsy sisa tavela amin'ny RNA. Ao amin'ny santionany voaomana amin'ny manga metilena vaovao, dia miseho ho vatana boribory izy ireo, matetika tokana sy akaikin'ny fonon'ny sela, ary manga hatsatra kokoa noho ilay akora toy ny tambajotran-kofehy. Tsy voatahiry tsara izy ireo rehefa atao ny fiksasiona sy ny fandokoana fanampiny, ka diniho ilay sosona tsy nanaovana fiksasiona. Fomba fiasa vao haingana nampiasa ra misy EDTA 20 microliters miaraka amin'ny manga metilena vaovao 1 percent 20 microliters, ary fotoana fiandrasana 15 minitra, no nanisa ireo sela misy vatan'i Heinz tamin'ny eritrosita 250, araka ny fanadihadiana PMC mitatitra io fomba io.

Misy fanavahana roa misoroka ny fandikana diso. Voalohany, mandoko vatan'i Heinz mafimafy kokoa noho ny manga metilena vaovao ny volomparasy metila sy ny volomparasy kristaly, araka ny voalaza ao amin'ny lohahevitra ScienceDirect momba ny vatan'i Heinz. Ny manga metilena vaovao no safidy mora ampiasaina rehefa tombanana miaraka ny retikilosita sy ny vatan'i Heinz, fa tsy izy no loko mahery indrindra natokana ho an'ny vatan'i Heinz. Faharoa, ireo fitambaran-javatra HbH ao amin'ny sela amin'ny endrika mpitondra talasemia alfa dia miteraka teboka madinika maro manerana ny sela aorian'ny fandokoana supravital, fa ny vatan'i Heinz mahazatra kosa vitsy kokoa, lehibe kokoa, ary matetika mifandray amin'ny fonon'ny sela. Ny tahirin-loko no zavatra fahatelo mety hampifangaro: eo ivelan'ny velarana ifantohan'ny sela izy ary miovaova isaky ny saha jerena.

Manga kresila mamirapiratra raha oharina amin'ny manga metilena vaovao

Samy loko supravital ho an'ny retikilosita ireo loko roa ireo, saingy ny iray no omen'ny fametrahana fenitra lanja kokoa. Ny fomba CLSI H44-A2 ho an'ny retikilosita, novolavolaina niaraka tamin'ny Filankevitra Iraisam-pirenena momba ny Fametrahana Fenitra amin'ny Hematolojia ary voatanisa ao amin'ny pejin'ny fenitra CLSI H44, dia manondro ny fandokoana ra misy EDTA amin'ny manga metilena vaovao ho fomba fampitahana atao amin'ny tanana. Mifanaraka amin'izany ny fampianarana hematolojia mahazatra momba ny endrika hita: ny manga metilena vaovao dia mandoko kofehy lalina kokoa sy mitovy kokoa, fa ny manga kresila mamirapiratra kosa miovaova kokoa eo amin'ny andiana vokatra sy ny santionany.

Mila fanazavana fanampiny anefa izany sata izany. Ny torolalana ICSH momba ny fanombanana fitaovana mpanadihady dia manaiky ny mikrôskôpia amin'ny tanana mampiasa manga metilena vaovao ho fomba fampitahana fanovozan-kevitra, saingy milaza fa miankina amin'ny mpandinika izany ary somary tsy marina tsara, ka ny fomba fanovozan-kevitra amin'ny sitômetria mikoriana no tsara kokoa raha misy. Ny fampitahana santionany 100 natao tamin'ny 2022 dia nahita fitongilanana ambany kokoa raha oharina amin'ilay fitaovana mpanadihady rehefa manga kresila mamirapiratra no nampiasaina fa tsy manga metilena vaovao, araka ny fampitahana fomba fandokoana ao amin'ny PMC. Izao no famintinana azo ianteherana ho an'ny mpianatra: ampiasao ny manga metilena vaovao ho fomba fampitahana amin'ny tanana voafaritra araka ny fenitra, hamarino izay fomba manga kresila mamirapiratra ampiasaina eo an-toerana amin'ny fampitahana aminy na amin'ny fomba mandeha ho azy, ary antenao fa hiparitaka kokoa ny valin'ny mikrôskôpia amin'ny tanana na inona na inona loko ampiasaina. Ny literatiora tranainy momba ny fametrahana fenitra dia nanohana koa ny Azure B voadio ho safidy madio kokoa ara-tsimika, satria niovaova ireo andiana loko amidy, araka ny fanadihadiana Marshall momba ny Azure B. Izany no manazava ny antony mbola iresahana ny haavon'ny fahadiovan'ny réactif ao amin'ny fifanakalozan-kevitra momba ny fomba fiasa.

Fisorohana ireo fahadisoana mahazatra

Fahadisoana efatra no mahatonga ny ankamaroan'ny fanomanana tsy hahomby. Ny fanafarana manga metilena mahazatra fa tsy manga metilena vaovao N dia miteraka fandokoana malemy noho ny simia, fa tsy noho ny teknika. Ny fanaovana fiksasiona na fandokoana fanampiny alohan'ny fandinihana dia manala ny famantarana supravital. Ny fanisana loko mivaingana ho voa madinika dia mampiakatra diso ny valiny; misoroka izany ny fitsipika mitaky voa madinika roa sy ny fanivanana ny loko. Ny fanisana sela vitsy loatra rehefa ambany ny isan-jaton'ny retikilosita dia manome tarehimarika toa marina tsara nefa manana elanelam-pitokisana midadasika. Mitovy ny famantarana amin'ireo fahadisoana rehetra ireo: ny mpandinika amin'ny mikrôskôpy dia manome tsiny ny mikrôskôpy noho ny vokatra efa voafaritry ny dingana fampiasana réactif.