Spektruma Absorpsiyona Şîniya Metîlenê û Koefîsyenta Vemirandina Molar

Spektruma şîniya metîlenê hêsan xuya dike, heta ku hûn hewl bidin jimareyek ji wê ji nû ve bi kar bînin. Laboratûwarek koefîsyenta vemirandina molar li nêzî 82,000 rapor dike. Yeke din 67,000 rapor dike. Ya sêyemîn jî ji 100,000 zêdetir rapor dike. Her sê dikarin danasînên rast ên pîvandinên xwe bin, û tu yek ji wan ji bo vê rengê sabîteke gerdûnî nîne.

Tevlihevî ji tevlîkirina du têgehên cuda tê. Absorbans pîvandinek e ku li ser çareseriyeke diyarkirî di hucreyeke diyarkirî de tê kirin. Absorptîvîteya molar, ku gelek caran wek epsîlon tê nivîsandin, parametreyek di modela wê çareseriyê de ye. Dema şîniya metîlenê rewşa xwe ya hevgirêdanê diguherîne, model jî diguhere, ji ber vê yekê parametre jî diguhere. Adeta bikêrhatî ew e ku her koefîsyent wek nirxek bi şertên diyarkirî bê dîtin: dirêjahiya pêlê, helîner, pH an tampon, germahî, navbera konsantrasyonê û dirêjahiya rêya optîkî bi jimareyê re bên tomarkirin.

Banda monomerê di ava bi konsantrasyona kêm de

Di çareseriya avî ya bi konsantrasyona kêm de, banda serdest a katyona şîniya metîlenê li nêzî 664 heta 665 nm ye; li gor amûr û hilbijartinên kalîbrasyonê, bi gelemperî di nav 664 heta 668 nm de tê gotin. Ew band ji bo diyarkirina mîqdarê hilbijartina rast e, dema konsantrasyona çareseriyê ewqas kêm be ku piraniya rengê di forma monomerê de be.

Sê nirxên ji wêjeya zanistî nîşan didin çima şert ji jimareya sereke girîngtir in. Lêkolînerên axê gilî ku nimûneyên avî di hucreyên 1 cm de di bin nêzî 7 micromolar de digirtin, li 665 nm epsîlona nêzî 82,000 M-1 cm-1 rapor kirin. Ev nirx wek meyla kalîbrasyona ezmûnî ya nimûneyên avê yên bi konsantrasyona pir kêm, bi awayekî neasayî baş hatiye belgekirin. Paşê, kalîbrasyoneke bingehîn di ava bêiyon de, ku 2.34 heta 37.52 micromolar û rêyeke 1 cm bi kar anî, li 665 nm ji bo tevahiya rengê nêzî 67,100 M-1 cm-1 da. Encama kêmtir tê hêvîkirin û ne nakokî ye, ji ber ku nîvê jorîn ê wê navbera kalîbrasyonê jixwe mîqdareke berçav a dîmerê dihewîne. Nirxê sêyemîn, nêzî 73,460 M-1 cm-1 li 664 nm, ji xebateke li pH 6.86 û 293 K tê ku spektruma dîtî li beşên monomer û dîmer veqetand, wek ku di nirxandineke rexneyî ya nû ya fotofîzîka şîniya metîlenê de hatiye kurtkirin. Ew jimare pêkhateyeke monomerê ye ku bi dekonvolûsyonê hatiye veqetandin, ne meyla rasterast a absorbansê li hember tevahiya rengê.

Xala pratîkî: koefîsyenta ku şertên wê bi nimûneyên we re li hev tên hilbijêrin, an kalîbrasyona xwe bikin. 82,000 ji bo ceribandineke di tampona fosfatê ya 30 micromolar de bi kar neynin û texmîn nekin ku xêzîbûn hêj derbasdar e.

Milê li dirêjahiya pêla kurt tevliheviyek e

Her ku konsantrasyon bilind dibe, milek li nêzî 600 heta 615 nm li gor lûtkeya 664 nm mezin dibe. Xebatên nû bi gelemperî beşdariya dîmera cureya H li nêzî 605 heta 610 nm diyar dikin. Analîza spektral a giştî ya şîniya metîlenê di avê de maksimûma dîmerê li 607 nm û maksimûma agregatekî mezintir li 600 nm veqetîne, bi pêkhateyên rezonansa monomerê li 664 û 650 nm. Nivîsa wê ya tevahî bi rêya tomara gihîştina vekirî ya PMID 33251415 berdest e.

Divê ew mil wek absorbansa dîmera saf neyê binavkirin. Struktura vîbronîk a monomerê jî di heman herêmê de beşdar dibe, ji ber vê yekê bilindahiya pîvandî encama lihevketina wan e. Lihevkirineke giştî dît ku modela monomer û dîmerê li ser tevahiya navbera 1.1 micromolar heta 3.4 millimolar têrê nekir, lê zêdekirina tetramerê lihevkirina herî baş da; sînyala tetramerê jixwe di bin 34 micromolar de dikaribû bê tesbîtkirin. Hêzên pêkhateyên ku bi lihevkirinê hatin diyarkirin mezin bûn: nêzî 107,800 M-1 cm-1 li 664 nm ji bo pêkhateya sereke ya monomerê, nêzî 101,400 ji bo dîmerê li 607 nm, û nêzî 138,500 ji bo tetramerê li 600 nm, di ava bêiyon a bê tampon de, bi klorîda sodyûmê ji 0 heta 0.15 M û germahiyên ji 282 heta 333 K. Ev beş bi modelê hatine veqetandin, ji ber vê yekê divê li şûna meyla ezmûnî ya Beer Lambert neyên bikaranîn.

Hêza dîmerbûnê rasterast hatiye mîqdarkirin. Li pH 6.86 û 293 K, lêkolînek sabîteke dîmerbûnê ya nêzî 3,900 M-1 bi dest xist. Ev mezinahî rave dike çima çareseriyeke xebatê ya 5 micromolar hema hema bi awayekî xêzî tevdigere, lê çareseriyeke stokê ya 50 micromolar wisa nake. Di dema pêşxistina rêbazê de, kontrola rêjeya absorbansa li nêzî 610 nm bi absorbansa li nêzî 665 nm re bikêrhatî ye. Dema ev rêje bi konsantrasyonê re bilind dibe, epsîlona li 664 nm êdî cureyeke neguhêrbar danasîn nake.

Di navbereke konsantrasyonê de ku cotekî bi hev vediguhere serdest e, spektrum dikarin xalek îzosbestîk a hevpar hebin; di rêzên avî de, ev xal bi ceribandinê li nêzî 625 nm hatiye dîtin. Xaleke sabît û zelal bi hebûna du cureyên serdest re li hev tê. Dema bi bilindbûna konsantrasyonê xal cih diguhere an winda dibe, wê wek hişyariyekê bibînin ku agregatên mezintir an hevsengiyên guhêrbar ketine nav pergalê, ne wek xeletiya amûrê.

Helîner, pH û germahî spektrumê diguherînin

Av hevgirêdanê hêsan dike. Li gor lêkolîna helînerê ya şîniya metîlenê di tevliheviyên av û DMSO de, ku wek PMID 30933781 hatiye îndekskirin, zêdekirina dîmetîl sulfoksîdê dîmerbûnê kêm dike, maksimûmên absorpsiyon û fluoresansê ber bi dirêjahiya pêla dirêjtir ve diguherîne, û berhema kuantûmî ya fluoresansê nêzî çar qat zêde dike. Ew xebat spektrumên avî wek hevsengiya monomer û dîmerê dinirxîne, bi absorbansa monomerê li nêzî 650 heta 670 nm û absorbansa dîmerê li nêzî 580 heta 615 nm, û ji spektrumên li 293.15 K sabîtên dîmerbûnê derdixe.

Alkohol hem cih û hem hêza xuya diguherînin, lê agregasyonê ji holê ranakin. Di berawirdkirineke bingehîn de, li 31.3 micromolar û germahiya odeyê, ku di lêkolîneke helînerê ya şîniya metîlenê de hatiye raporkirin, maksimûma dirêjahiya pêla dirêj di avê de 665 nm bû, lê di metanolê de 655 nm bû; nirxên xuya yên tevahiya çareseriyê di avê de nêzî 37,100 û di metanolê de 60,800 bûn. Validasyoneke cuda di etanola mutleq de li 298 K maksimûmek li 655 nm da, bi epsîlona nêzî 68,000.

Guhertinên asayî yên pH spektrumê ji ya ku gelek protokol texmîn dikin kêmtir diguherînin. Nirxandina rexneyî ya li jor hatî binavkirin rapor dike ku ji nêzî pH 2 heta pH 12, maksimûm li nêzî 665 nm ma û heta pH 11 tenê guhertinên biçûk di hêzê de hebûn. Nasnameya tamponê û hêza iyonî dikarin bi qasî pH-ya navkirî encaman biguherînin, ji ber vê yekê tampon û xwêya ku bi rastî hatine bikaranîn tomar bikin, ne tenê nirxa xwendî ya pH-metreya. Asîda xurt an alkalîya xurt rewşeke cuda ye, ji ber ku reng dikare li şûna hevgirêdana vegerbar, guhertineke kîmyewî derbas bike. Germahî û xwê jî hevsengiyê diguherînin; ji ber vê yekê lêkolîna avê ya 2020 her du jî bi qest guhertin.

Pîvandin bi awayekî ku jimare derbasdar bimîne

Xebata mîqdarî xwe dispêre têkiliya Beer Lambert: absorbans wekhev e bi epsîlon carî konsantrasyon carî dirêjahiya rêya optîkî; ligel vê, divê were îspatkirin ku navbera xêzî di şertên we de bi rastî derbasdar e.

Ji bo xebata bi konsantrasyonên kêm ên micromolar hucreyeke 1 cm bi kar bînin. Bi epsîlona nêzî 82,000, 5 micromolar absorbansa nêzî 0.41 dide û 10 micromolar nêzî 0.82 dide. Ji bo pîvandina ku li ser monomerê disekine di ava sade de, mayîna li nêzî an di bin nêzî 5 heta 7 micromolar de ji kalîbrasyona di dehên micromolar de ewletir e. Ji bo çareseriyên stokê yên bi konsantrasyona bilind, li şûna pejirandina absorbansa ku pir li ser 1 e, rêya optîkî kurt bikin.

Ji bo pîvandina blankê matrîseke heman bi kar bînin: heman pileya kalîteya avê, heman para hevhelînerê, heman tampon û xwê, bê reng. Çareseriyên kalîbrasyonê di heman matrîsê de û li heman germahiyê amade bikin. Di dema pêşxistinê de tevahiya qada xuya, bi awayekî îdeal nêzî 550 heta 750 nm, sken bikin, li şûna xwendina tenê yek dirêjahiya pêlê. Şiklê bişopînin, ne tenê bilindahiyê. Heke tenikkirina rêzî şiklê normalîzekirî biguherîne, pergal ji aliyê kîmyewî ve bi konsantrasyonê ve girêdayî ye. Maksimûmek sabît û rêjeyeke sabît a 610 bi 665 nm re, ji bo navbereke pejirandî delîlên bihêztir in ji tenê nirxeke bilind a R-ya çargoşekirî.

Forma reaktîfê belge bikin. Madeya bazirganî dikare klorîda metîltiyonînyûmê ya bêav an hîdratek wek trîhîdratê be, ji ber vê yekê girseya molar a ku ji bo hesabên stokê tê bikaranîn divê bi madeya rastîn a di şûşeyê de li hev bê. Tenê ev gav beşek ji nakokiya di nav konsantrasyonên molar ên navkirî yên laboratûwaran de rave dike. Heman rêkûpêkî pêwîst e dema encam di hesabên ceribandinên mîqdarî de tên bikaranîn, dema spektrum piştgiriyê didin kontrolên aramiya formulasyonê, û dema profîlên nepakiyan nirxandina safî û taybetmendiyên diyarkirî dixwazin.

Kurteya bi şertên diyarkirî

Vê tabloyê wek şablona destpêkê ya tomareke laboratûwarê bi kar bînin, ne wek çavkaniya sabîtên ku dikarin li şûna hev bên bikaranîn.

Cure û dirêjahiya pêlê	Şert	Epsîlon an tevgera raporkirî
Monomer, 665 nm	Av, di bin nêzî 7 micromolar de, 1 cm, pH nehatiye raporkirin	Nêzî 82,000 M-1 cm-1, meyla ezmûnî ya tevahiya rengê
Pêkhateya monomerê, 664 nm	Av, pH 6.86, 293 K, bi dekonvolûsyonê ji dîmerê veqetandî	Nêzî 73,460 M-1 cm-1, tenê beşa monomerê
Tevahiya rengê, 665 nm	Ava bêiyon, 2.34 heta 37.52 micromolar, 1 cm	Nêzî 67,100 M-1 cm-1, meyla kalîbrasyonê li ser navberekê ku hinek agregasyon lê çêdibe
Rezonansa monomerê, 664 nm	Ava bêiyon a bê tampon, rêza 1.1 micromolar heta 3.4 millimolar, NaCl 0 heta 0.15 M, 282 heta 333 K	Nêzî 107,800 M-1 cm-1, pêkhateya bi modelê veqetandî
Dîmer, 607 nm	Heman rêza li jor	Nêzî 101,400 M-1 cm-1, pêkhateya bi modelê veqetandî
Tetramer, 600 nm	Heman rêza li jor	Nêzî 138,500 M-1 cm-1, pêkhateya bi modelê veqetandî
Tevahiya rengê, 665 nm di avê de li hember 655 nm di metanolê de	31.3 micromolar, germahiya odeyê	Di avê de nêzî 37,100, di metanolê de nêzî 60,800, nirxên xuya li wê konsantrasyonê
Hevsengiya monomer û dîmerê	Tevliheviyên av û DMSO, 293.15 K	DMSO dîmerê kêm dike, maksimûm ber bi dirêjahiya pêla dirêjtir ve diguherin, berhema weşana ronahiyê zêde dibe

Ji ber vê yekê, dirêjahiya pêla absorbansa şîniya metîlenê bersiveke kurt e bi têbîniyeke dirêj. Lûtkeya ku we pîva, di çareseriya ku we pîva de, li konsantrasyona ku we pîva, rapor bikin. Ev adet nahêle ku nirxek di çareseriya avî ya bi konsantrasyona kêm de li nêzî 664 nm bibe sabîteke gerdûnî ya şaş.