ನ್ಯೂ ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ರೆಟಿಕ್ಯುಲೋಸೈಟ್ ವರ್ಣರಂಜನೆ: ಕಾರ್ಯವಿಧಾನ ಮತ್ತು ವರ್ಣಕಗಳ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳು

ಒಬ್ಬ ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿ ರೆಟಿಕ್ಯುಲೋಸೈಟ್ ಎಣಿಕೆಗೆ ಸಿದ್ಧತೆ ಮಾಡಿಕೊಳ್ಳುತ್ತಾನೆ, ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ತರಿಸಿಕೊಳ್ಳುತ್ತಾನೆ, ಅದನ್ನು ರಕ್ತದೊಂದಿಗೆ ಬೆರೆಸುತ್ತಾನೆ; ಆದರೆ ಬಹುತೇಕ ಏನೂ ಕಾಣುವುದಿಲ್ಲ. ಅವನ ಸಹಪಾಠಿ ನ್ಯೂ ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಎಂದು ಲೇಬಲ್ ಇರುವ ಬಾಟಲಿಯನ್ನು ಬಳಸಿದಾಗ, ಕೆಲವು ಕೆಂಪು ರಕ್ತಕೋಶಗಳ ಒಳಗೆ ಸ್ಪಷ್ಟವಾದ ನೀಲಿ ತಂತುಗಳು ಕಾಣಿಸುತ್ತವೆ. ಎರಡನೆಯ ಬಾಟಲಿಯಲ್ಲಿರುವುದು ಹೆಚ್ಚು ತಾಜಾ ಅಥವಾ ಹೆಚ್ಚು ಸಾಂದ್ರವಾದ ವರ್ಣಕವೆಂದು ಮೊದಲ ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿ ಊಹಿಸುತ್ತಾನೆ. ಅವೆರಡೂ ಅಲ್ಲ. ಅದರಲ್ಲಿ ಇರುವುದೇ ಬೇರೆ ಅಣು.

ಈ ಕ್ಷೇತ್ರದಲ್ಲಿನ ಬಹುತೇಕ ಗೊಂದಲಗಳಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗಿರುವ ಪರಿಕಲ್ಪನಾತ್ಮಕ ತಪ್ಪು ಇದೇ. ನ್ಯೂ ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಎಂದರೆ ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂನ ಸುಧಾರಿತ ಉತ್ಪಾದನಾ ಬ್ಯಾಚ್ ಎಂಬ ಭಾವನೆಯನ್ನು ಅದರ ಹೆಸರು ಮೂಡಿಸುತ್ತದೆ. ಆದರೆ ರಸಾಯನಶಾಸ್ತ್ರ ಬೇರೆ ಸಂಗತಿಯನ್ನು ಹೇಳುತ್ತದೆ. ನ್ಯೂ ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ N ಒಂದು ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಫಿನೋಥಯಜೀನ್ ವರ್ಣಕವಾಗಿದ್ದು, ತನ್ನದೇ ಆದ ಕಲರ್ ಇಂಡೆಕ್ಸ್ ಸಂಖ್ಯೆ, ಪ್ರತಿಸ್ಥಾಪಕ ಗುಂಪುಗಳ ವಿನ್ಯಾಸ ಮತ್ತು ರಕ್ತಶಾಸ್ತ್ರದಲ್ಲಿ ಪ್ರಮಾಣೀಕೃತ ಪಾತ್ರವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ. ಈ ವ್ಯತ್ಯಾಸ ಸ್ಪಷ್ಟವಾದ ನಂತರ, ವಿಧಾನದ ಉಳಿದ ಅಂಶಗಳು—ವರ್ಣರಂಜನೆ ಮಾಡುವಾಗ ಕೋಶಗಳು ಏಕೆ ಜೀವಂತವಾಗಿರಬೇಕು, ಯಾವುದನ್ನು ರೆಟಿಕ್ಯುಲೋಸೈಟ್ ಎಂದು ಎಣಿಸಬೇಕು, ಹೈನ್ಸ್ ಕಾಯಗಳ ಪಾತ್ರವೇನು ಮತ್ತು ಬ್ರಿಲಿಯಂಟ್ ಕ್ರೆಸಿಲ್ ಬ್ಲೂ ಅನ್ನು ಯಾವಾಗ ಪರಿಗಣಿಸಬೇಕು—ಸುಲಭವಾಗಿ ಅರ್ಥವಾಗುತ್ತವೆ.

ಸಂಕ್ಷಿಪ್ತ ಉತ್ತರ

ರಕ್ತಶಾಸ್ತ್ರದ ಕಾರಕವಾದ ನ್ಯೂ ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ N ಅನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ನ್ಯೂ ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಕುರಿತ PubChem ದಾಖಲೆಯಲ್ಲಿ ಬೇಸಿಕ್ ಬ್ಲೂ 24 ಎಂದು ಗುರುತಿಸಲಾಗಿದೆ: C.I. 52030, CAS 1934-16-3, ಸೂತ್ರ C18H22ClN3S. ಸಾಮಾನ್ಯ ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಅನ್ನು ಅದರ PubChem ದಾಖಲೆಯಲ್ಲಿ ಮಿಥಿಲ್ಥಯೋನಿನಿಯಮ್ ಕ್ಲೋರೈಡ್, ಬೇಸಿಕ್ ಬ್ಲೂ 9 ಎಂದು ಗುರುತಿಸಲಾಗಿದೆ: C.I. 52015, CAS 61-73-4, ಸೂತ್ರ C16H18ClN3S. ರಚನಾತ್ಮಕವಾಗಿ, ನ್ಯೂ ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂನಲ್ಲಿ ಉಂಗುರಕ್ಕೆ ಜೋಡಿಸಲಾದ ಎರಡು ಮಿಥೈಲ್ ಗುಂಪುಗಳು ಮತ್ತು ಎಥೈಲ್‌ಅಮಿನೋ ಪಾರ್ಶ್ವ ಸರಪಳಿಗಳಿವೆ; ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂನಲ್ಲಿ ಡೈಮಿಥೈಲ್‌ಅಮಿನೋ ಗುಂಪುಗಳಿವೆ. ಈ ವ್ಯತ್ಯಾಸವು ವರ್ಣರಂಜನೆಯ ವರ್ತನೆಯನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸುತ್ತದೆ. ರಕ್ತಶಾಸ್ತ್ರದ ಪಠ್ಯಗಳು ಸಾಮಾನ್ಯ ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಅನ್ನು ತುಲನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ದುರ್ಬಲ ರೆಟಿಕ್ಯುಲೋಸೈಟ್ ವರ್ಣಕವೆಂದೂ, ನ್ಯೂ ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಅನ್ನು ಹೆಚ್ಚು ಗಾಢವಾದ ಮತ್ತು ಏಕರೂಪವಾದ ವರ್ಣರಂಜನೆ ನೀಡುವ ವರ್ಣಕವೆಂದೂ ವಿವರಿಸುತ್ತವೆ. ಈ ಹೋಲಿಕೆಯನ್ನು ನ್ಯೂ ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಕುರಿತ ScienceDirect ವಿಷಯ ಪುಟದಲ್ಲಿ ಸಂಕ್ಷೇಪಿಸಲಾಗಿದೆ.

ಹೌದು, ನ್ಯೂ ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಒಂದು ಸುಪ್ರಾವೈಟಲ್ ವರ್ಣಕ. ಸುಪ್ರಾವೈಟಲ್ ವರ್ಣರಂಜನೆಯ ತತ್ವಗಳ ಕುರಿತ NCBI ವಿಮರ್ಶೆಯಲ್ಲಿ ವ್ಯಾಖ್ಯಾನಿಸಿರುವಂತೆ, ಸುಪ್ರಾವೈಟಲ್ ವರ್ಣರಂಜನೆ ಎಂದರೆ ಜೀವಂತ ಕೋಶಗಳನ್ನು ದೇಹದಿಂದ ಹೊರತೆಗೆದ ನಂತರ ಮತ್ತು ಸ್ಥಿರೀಕರಣ ಮಾಡುವ ಮೊದಲು ವರ್ಣರಂಜನೆ ಮಾಡುವುದು. ನ್ಯೂ ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಮತ್ತು ಬ್ರಿಲಿಯಂಟ್ ಕ್ರೆಸಿಲ್ ಬ್ಲೂ ಎರಡೂ ಈ ವರ್ಗಕ್ಕೆ ಸೇರಿವೆ; CLSI ರೆಟಿಕ್ಯುಲೋಸೈಟ್ ಮಾನದಂಡವು ನ್ಯೂ ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಅನ್ನು ಸುಪ್ರಾವೈಟಲ್ ವರ್ಣಕವೆಂದು ಸ್ಪಷ್ಟವಾಗಿ ಒಳಗೊಂಡಿದೆ. ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿಗಳು ಕೆಲವೊಮ್ಮೆ ಇದನ್ನು ಸ್ಥಿರೀಕರಿಸಿದ ಲೇಪನಗಳ ರೊಮಾನೋವ್ಸ್ಕಿ ವರ್ಣರಂಜನೆಯೊಂದಿಗೆ ಒಂದೇ ವರ್ಗದಲ್ಲಿ ಪರಿಗಣಿಸುತ್ತಾರೆ. ಆ ಪರಿಕಲ್ಪನೆ ಇಲ್ಲಿ ಸರಿಹೊಂದುವುದಿಲ್ಲ. ಮೊದಲು ಸ್ಥಿರೀಕರಣ ಮಾಡಿದರೆ ಈ ವಿಧಾನ ಕೆಲಸ ಮಾಡುವುದಿಲ್ಲ.

ಹೋಲುವ ಹೆಸರುಗಳಿರುವ ವರ್ಣಕಗಳನ್ನು ಅರಿಯಲು ಬಯಸುವ ಓದುಗರಿಗಾಗಿ, ಮಿಥೈಲ್ ಬ್ಲೂ ಮತ್ತು ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ನಡುವಿನ ವ್ಯತ್ಯಾಸ ಋಣಾಯನಿಕ ಟ್ರೈಅರೈಲ್‌ಮೀಥೇನ್ ವರ್ಣಕ ಮತ್ತು ಧನಾಯನಿಕ ಫಿನೋಥಯಜೀನ್ ವರ್ಗದ ನಡುವಿನ ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾದ, ಇನ್ನೂ ದೊಡ್ಡ ಗೊಂದಲವನ್ನು ವಿವರಿಸುತ್ತದೆ. ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದ ವರ್ಣರಂಜನೆಯ ಅವಲೋಕನ ಸ್ಥಿರೀಕರಿಸಿದ ಲೇಪನ ವಿಧಾನಗಳೊಂದಿಗೆ ಸುಪ್ರಾವೈಟಲ್ ವಿಧಾನಗಳ ಸ್ಥಾನವನ್ನು ವಿವರಿಸುತ್ತದೆ; ರಕ್ತಕೋಶಗಳ ರೂಪವಿಜ್ಞಾನ ಮಾರ್ಗದರ್ಶಿಯು ವಿಶಾಲವಾದ ವಿಭೇದಕ ಕೋಶ ಎಣಿಕೆಯಲ್ಲಿ ರೆಟಿಕ್ಯುಲೋಸೈಟ್ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಎಲ್ಲಿ ಹೊಂದಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ ಎಂಬುದನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ.

ಕಾರಕ	ಗುರುತು	C.I. / CAS	ರೆಟಿಕ್ಯುಲೋಸೈಟ್ ಪರೀಕ್ಷೆಯಲ್ಲಿ ಪಾತ್ರ
ನ್ಯೂ ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ N	ಎಥೈಲ್‌ಅಮಿನೋ, ಉಂಗುರದಲ್ಲಿ ಎರಡು ಮಿಥೈಲ್ ಗುಂಪುಗಳಿರುವ ಫಿನೋಥಯಜೀನ್	C.I. 52030 (ಬೇಸಿಕ್ ಬ್ಲೂ 24); ಕ್ಲೋರೈಡ್‌ಗೆ CAS 1934-16-3	ಪ್ರಮಾಣೀಕೃತ ಕೈಯಾರೆ ಮಾಡುವ ಸುಪ್ರಾವೈಟಲ್ ವರ್ಣರಂಜನೆ, ಹೋಲಿಕೆಗೆ ಆದ್ಯತೆಯ ವಿಧಾನ
ಸಾಮಾನ್ಯ ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ	ಬಿಸ್(ಡೈಮಿಥೈಲ್‌ಅಮಿನೋ) ಫಿನೋಥಯಜೀನ್ (ಮಿಥಿಲ್ಥಯೋನಿನಿಯಮ್ ಕ್ಲೋರೈಡ್)	C.I. 52015 (ಬೇಸಿಕ್ ಬ್ಲೂ 9); CAS 61-73-4	ದುರ್ಬಲ ರೆಟಿಕ್ಯುಲೋಸೈಟ್ ವರ್ಣಕ, ಪರ್ಯಾಯವಲ್ಲ
ಬ್ರಿಲಿಯಂಟ್ ಕ್ರೆಸಿಲ್ ಬ್ಲೂ	ಆಕ್ಸಜೀನ್ ವರ್ಣಕ, ಸಂಯೋಜನೆ ಪೂರೈಕೆದಾರರ ಪ್ರಕಾರ ಬದಲಾಗುತ್ತದೆ	C.I. 51010; ಲವಣದ ರೂಪವನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿ CAS 81029-05-2 ಅಥವಾ 10127-36-3	ಸ್ವೀಕಾರಾರ್ಹ ಸುಪ್ರಾವೈಟಲ್ ವರ್ಣಕ, ಕಡಿಮೆ ಏಕರೂಪತೆ, ಸಮನ್ವಯಿತ ಹೋಲಿಕೆ ವಿಧಾನವಲ್ಲ

ಉತ್ಪನ್ನ ಪಟ್ಟಿಯ ಬಗ್ಗೆ ಒಂದು ಎಚ್ಚರಿಕೆ: ನ್ಯೂ ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂನ ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಜಿಂಕ್ ಕ್ಲೋರೈಡ್ ದ್ವಿಲವಣ ರೂಪವು CAS 6586-05-6 ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಲಭ್ಯವಿದೆ. ಆದ್ದರಿಂದ ವಿಧಾನಗಳ ವಿಭಾಗದಲ್ಲಿ ಕೇವಲ ಸಾಮಾನ್ಯ ಹೆಸರನ್ನಷ್ಟೇ ಅಲ್ಲ, ಲವಣದ ರೂಪ ಮತ್ತು ಪೂರೈಕೆದಾರರನ್ನೂ ಹೆಸರಿಸಬೇಕು.

ಸುಪ್ರಾವೈಟಲ್ ವರ್ಣರಂಜನೆ ವಾಸ್ತವವಾಗಿ ಏನು ಮಾಡುತ್ತದೆ

ರೆಟಿಕ್ಯುಲೋಸೈಟ್ ಎಂದರೆ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್ ಅನ್ನು ಕಳೆದುಕೊಂಡಿದ್ದರೂ ಉಳಿಕೆಯ ರೈಬೋಸೋಮಲ್ RNA ಹೊಂದಿರುವ ಎಳೆಯ ಕೆಂಪು ರಕ್ತಕೋಶ. ವರ್ಣರಂಜನೆ ಮಾಡದ ತೇವ ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ ಆ RNA ಕಾಣುವುದಿಲ್ಲ. ಸುಪ್ರಾವೈಟಲ್ ವರ್ಣಕವು ಜೀವಂತ ಕೋಶವನ್ನು ಪ್ರವೇಶಿಸಿ, ಆ RNA ಅನ್ನು ನೀಲಿ ಕಣಗಳು ಮತ್ತು ತಂತುಗಳಾಗಿ ಅವಕ್ಷೇಪಿಸುತ್ತದೆ ಅಥವಾ ಒಟ್ಟುಗೂಡಿಸುತ್ತದೆ. ಇವೇ ತೈಲ ಮುಳುಗಿಸುವಿಕೆ ವಿಧಾನದಲ್ಲಿ ಕಾಣುವ ಜಾಲ-ತಂತುರೂಪದ ಪದಾರ್ಥ. ಹೀಗಾಗಿ ಈ ಜಾಲವು ವರ್ಣರಂಜನೆಯಿಂದ ಉಂಟಾದದ್ದು; ಬಣ್ಣಕ್ಕಾಗಿ ಕಾಯುತ್ತಿರುವ, ಮೊದಲೇ ರೂಪುಗೊಂಡ ಅಸ್ಥಿಪಂಜರವಲ್ಲ. ಆದ್ದರಿಂದಲೇ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನದ ಅಂಶಗಳು—ವರ್ಣಕದ ಸಾಂದ್ರತೆ, ಬಫರ್, ರಕ್ತ ಮತ್ತು ವರ್ಣಕದ ಅನುಪಾತ, ತಾಪಮಾನ, ಸಮಯ—ವರ್ಣಕದ ಹೆಸರಿನಷ್ಟೇ ಮುಖ್ಯವಾಗಿವೆ.

ಇದರ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಪರಿಣಾಮವೆಂದರೆ ಕಾರ್ಯಗಳ ಕಟ್ಟುನಿಟ್ಟಾದ ಕ್ರಮ: ಮೊದಲು ಹೆಪ್ಪುಗಟ್ಟದಂತೆ ಮಾಡಿರುವ ರಕ್ತವನ್ನು ವರ್ಣಕದೊಂದಿಗೆ ಬೆರೆಸಿ, ಇನ್‌ಕ್ಯುಬೇಟ್ ಮಾಡಿ; ನಂತರ ಲೇಪನಗಳನ್ನು ತಯಾರಿಸಿ, ಸ್ಥಿರೀಕರಣವಿಲ್ಲದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿವರ್ಣರಂಜನೆಯಿಲ್ಲದೆ ಪರೀಕ್ಷಿಸಿ. ವರ್ಣರಂಜನೆಗೆ ಮೊದಲು ಸ್ಥಿರೀಕರಣ ಮಾಡುವುದು ಅಥವಾ ಮಸುಕಾದ ತಂತುಗಳನ್ನು ಮರೆಮಾಡುವ ಪ್ರತಿವರ್ಣರಂಜನೆ ಬಳಸುವುದು ಎಣಿಕೆಗೆ ಅಗತ್ಯವಾದ ಮಾಹಿತಿಯನ್ನು ನಾಶಪಡಿಸುತ್ತದೆ.

ನ್ಯೂ ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಬಳಸುವ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ರೆಟಿಕ್ಯುಲೋಸೈಟ್ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನ

ಎಲ್ಲೆಡೆ ಅನ್ವಯಿಸುವ ಒಂದೇ ಸಂಯೋಜನೆ ಇಲ್ಲ; ಆದ್ದರಿಂದ ಬಳಸಿದ ಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ವರದಿ ಮಾಡಿ. ದಾಖಲಿಸಲಾದ ಮೂರು ರೂಪಾಂತರಗಳು ಈ ವೈವಿಧ್ಯವನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತವೆ.

ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ಬ್ರೆಚರ್ ಮಾದರಿಯ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನದಲ್ಲಿ ಪೊಟ್ಯಾಸಿಯಮ್ ಆಕ್ಸಲೇಟ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಸುಮಾರು 0.5 ಪ್ರತಿಶತ ನ್ಯೂ ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಅದನ್ನು ಚೆನ್ನಾಗಿ ಬೆರೆಸಿದ EDTA ರಕ್ತದೊಂದಿಗೆ ಸಮಾನ ಪರಿಮಾಣಗಳಲ್ಲಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಿ, ಕೋಣೆಯ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ ಸುಮಾರು 10 ರಿಂದ 15 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಇನ್‌ಕ್ಯುಬೇಟ್ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ. ನಿಧಾನವಾಗಿ ಮತ್ತೆ ಬೆರೆಸಿದ ನಂತರ ತೆಳುವಾದ ಬೆಣೆಯಾಕಾರದ ಲೇಪನಗಳನ್ನು ತಯಾರಿಸಿ, ಗಾಳಿಯಲ್ಲಿ ಒಣಗಿಸಿ, ಸ್ಥಿರೀಕರಣ ಮಾಡದೆ 100x ತೈಲ ಆಬ್ಜೆಕ್ಟಿವ್ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ರೆಟಿಕ್ಯುಲೋಸೈಟ್ ಎಣಿಕೆಯ NCBI ಕಾರ್ಯವಿಧಾನ ಈ ಕಾರ್ಯಕ್ರಮ ಮತ್ತು ಅದರೊಂದಿಗೆ ಬಳಸುವ ಎಣಿಕೆ ಚೌಕಟ್ಟನ್ನು ವಿವರಿಸುತ್ತದೆ.

ಡೇಸಿ ಮತ್ತು ಲೂಯಿಸ್ ರೂಪಾಂತರದಲ್ಲಿ ಸಿಟ್ರೇಟ್ ಸಲೈನ್‌ನಲ್ಲಿರುವ 1.0 ಪ್ರತಿಶತ ನ್ಯೂ ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಅನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಅದನ್ನು ಅದರ ಪರಿಮಾಣದ 2 ರಿಂದ 4 ಪಟ್ಟು ರಕ್ತದೊಂದಿಗೆ ಬೆರೆಸಿ, ಲೇಪನ ತಯಾರಿಸುವ ಮೊದಲು 37 C ನಲ್ಲಿ 15 ರಿಂದ 20 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಇಡಲಾಗುತ್ತದೆ. CLSI H44 ಕಾರ್ಯವಿಧಾನದ ಇತ್ತೀಚಿನ ಸಮನ್ವಯಿತ ಅನುಷ್ಠಾನದಲ್ಲಿ pH 7.4 ಇರುವ ಫಾಸ್ಫೇಟ್ ಬಫರ್ಡ್ ಸಲೈನ್‌ನಲ್ಲಿ ಕಡಿಮೆ ಸಾಂದ್ರತೆಯ 0.1 ಪ್ರತಿಶತ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಬಳಸಲಾಯಿತು; 20 C ನಲ್ಲಿ 10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಇನ್‌ಕ್ಯುಬೇಟ್ ಮಾಡಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಸ್ಥಿರೀಕರಣ ಮಾಡಲಿಲ್ಲ. ಇದನ್ನು 2026ರ NMB ಸಮನ್ವಯೀಕರಣ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ ವರದಿ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.

ಎಣಿಕೆಯ ನಿಯಮಗಳು ಎಲ್ಲ ರೂಪಾಂತರಗಳಲ್ಲೂ ಒಂದೇ ಆಗಿವೆ. ಒಂದು ಕೋಶದಲ್ಲಿ ಕನಿಷ್ಠ ಎರಡು ಪ್ರತ್ಯೇಕ ನೀಲಿ ಬಣ್ಣದ ಕಣಗಳು ಅಥವಾ ತಂತು ಭಾಗಗಳು ಇದ್ದಾಗ ಅದನ್ನು ರೆಟಿಕ್ಯುಲೋಸೈಟ್ ಎಂದು ಎಣಿಸಿ; ಇದರಿಂದ ಒಂಟಿಯಾದ ವರ್ಣಕ ನಿಕ್ಷೇಪವನ್ನು ಹೊರಗಿಡಬಹುದು. ನಿತ್ಯದ ಪರೀಕ್ಷೆಯಲ್ಲಿ ಕನಿಷ್ಠ 1,000 ಕೆಂಪು ರಕ್ತಕೋಶಗಳನ್ನು ಎಣಿಸಿ, ರೆಟಿಕ್ಯುಲೋಸೈಟ್‌ಗಳನ್ನು ಶೇಕಡಾವಾರು ಪ್ರಮಾಣದಲ್ಲಿ ವರದಿ ಮಾಡಿ. ಶೇಕಡಾವಾರು ಪ್ರಮಾಣ ಕಡಿಮೆಯಿದ್ದಾಗ, ಸಂಖ್ಯಾಶಾಸ್ತ್ರೀಯವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಎಣಿಸಬೇಕಾಗುತ್ತದೆ. ರೆಟಿಕ್ಯುಲೋಸೈಟ್‌ಗಳು ಸುಮಾರು 1 ಪ್ರತಿಶತ ಇದ್ದಾಗ, ಎಣಿಕೆಯ ವ್ಯತ್ಯಾಸವನ್ನು 5 ಪ್ರತಿಶತಕ್ಕೆ ತರಲು ಸುಮಾರು 4,400 ಕೋಶಗಳು ಅಗತ್ಯವೆಂದು CLSI H44 ವಿಧಾನಶಾಸ್ತ್ರದ ವಿಮರ್ಶೆ ತಿಳಿಸುತ್ತದೆ; ಇದು De Gruyterನಲ್ಲಿರುವ CLSI H44 ವಿಮರ್ಶೆಯಲ್ಲಿದೆ. ಮಿಲ್ಲರ್ ಆಕ್ಯುಲರ್ ಡಿಸ್ಕ್ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂಖ್ಯೆಯ ಎಣಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕವಾಗಿ ಸುಲಭಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ. ವರ್ಣಕವನ್ನು ಶೋಧಿಸಿ ಅಥವಾ ತಾಜಾವಾಗಿ ತಯಾರಿಸಿ, ಏಕೆಂದರೆ ಅವಕ್ಷೇಪವು ಕೋಶದೊಳಗಿನ ಕಣರೂಪದ ಸೇರ್ಪಡೆಗಳಂತೆ ಕಾಣಬಹುದು.

NMB ರೆಟಿಕ್ಯುಲೋಸೈಟ್ ವರ್ಣರಂಜನೆ, ಹೈನ್ಸ್ ಕಾಯಗಳು ಮತ್ತು ಬ್ರಿಲಿಯಂಟ್ ಕ್ರೆಸಿಲ್ ಬ್ಲೂನ ಪಕ್ಕಪಕ್ಕದ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕ ಹೋಲಿಕೆ

ಅದೇ ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ ಹೈನ್ಸ್ ಕಾಯಗಳು

ಅದೇ ಸುಪ್ರಾವೈಟಲ್ ಲೇಪನದಲ್ಲಿ ಹೈನ್ಸ್ ಕಾಯಗಳನ್ನೂ ತೋರಿಸಬಹುದು. ಅವು ಉಳಿಕೆಯ RNA ಅಲ್ಲ; ಆಕ್ಸಿಡೀಕರಣಗೊಂಡ ಮತ್ತು ಸ್ವಾಭಾವಿಕ ರಚನೆ ಕಳೆದುಕೊಂಡ ಹಿಮೋಗ್ಲೋಬಿನ್‌ನ ಗುಚ್ಛಗಳು. ನ್ಯೂ ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ ಅವು ದುಂಡಾದ ಕಾಯಗಳಾಗಿ ಕಾಣುತ್ತವೆ; ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಒಂದೇ ಕಾಯವಿದ್ದು, ಕೋಶಪೊರೆಯ ಸಮೀಪ ಇರುತ್ತದೆ. ಅವು ಜಾಲ-ತಂತುರೂಪದ ಪದಾರ್ಥಕ್ಕಿಂತ ತಿಳಿ ನೀಲಿ ಬಣ್ಣ ಪಡೆಯುತ್ತವೆ. ಸ್ಥಿರೀಕರಣ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿವರ್ಣರಂಜನೆಯ ನಂತರ ಅವು ಸರಿಯಾಗಿ ಉಳಿಯುವುದಿಲ್ಲ; ಆದ್ದರಿಂದ ಸ್ಥಿರೀಕರಿಸದ ಲೇಪನವನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಿ. ಇತ್ತೀಚಿನ ಒಂದು ಕಾರ್ಯವಿಧಾನದಲ್ಲಿ 20 ಮೈಕ್ರೊಲೀಟರ್ EDTA ರಕ್ತವನ್ನು 20 ಮೈಕ್ರೊಲೀಟರ್ 1 ಪ್ರತಿಶತ ನ್ಯೂ ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂನೊಂದಿಗೆ ಬೆರೆಸಿ, 15 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಇನ್‌ಕ್ಯುಬೇಟ್ ಮಾಡಿ, 250 ಕೆಂಪು ರಕ್ತಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಹೈನ್ಸ್ ಕಾಯಗಳಿರುವ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಎಣಿಸಲಾಯಿತು. ಇದನ್ನು ಆ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವನ್ನು ವರದಿ ಮಾಡಿದ PMC ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ ವಿವರಿಸಲಾಗಿದೆ.

ಎರಡು ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನು ತಿಳಿದಿರುವುದು ತಪ್ಪು ವ್ಯಾಖ್ಯಾನಗಳನ್ನು ತಡೆಯುತ್ತದೆ. ಮೊದಲನೆಯದಾಗಿ, ScienceDirectನ ಹೈನ್ಸ್ ಕಾಯಗಳ ವಿಷಯ ಪುಟದಲ್ಲಿ ಹೇಳಿರುವಂತೆ, ಮಿಥೈಲ್ ವೈಲೆಟ್ ಮತ್ತು ಕ್ರಿಸ್ಟಲ್ ವೈಲೆಟ್ ಹೈನ್ಸ್ ಕಾಯಗಳಿಗೆ ನ್ಯೂ ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಗಾಢವಾಗಿ ಬಣ್ಣ ನೀಡುತ್ತವೆ. ರೆಟಿಕ್ಯುಲೋಸೈಟ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಹೈನ್ಸ್ ಕಾಯಗಳನ್ನು ಒಟ್ಟಿಗೆ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡುವಾಗ ನ್ಯೂ ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಅನುಕೂಲಕರ ಆಯ್ಕೆ; ಆದರೆ ಹೈನ್ಸ್ ಕಾಯಗಳಿಗಾಗಿಯೇ ಬಳಸುವ ಅತ್ಯಂತ ಪ್ರಬಲ ವರ್ಣಕವಲ್ಲ. ಎರಡನೆಯದಾಗಿ, ಆಲ್ಫಾ ಥಲಸ್ಸೀಮಿಯಾ ಲಕ್ಷಣ ಹೊಂದಿರುವವರಲ್ಲಿ HbH ಸೇರ್ಪಡೆಗಳು ಸುಪ್ರಾವೈಟಲ್ ವರ್ಣರಂಜನೆಯ ನಂತರ ಕೋಶದಾದ್ಯಂತ ಅನೇಕ ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಚುಕ್ಕೆಗಳಾಗಿ ಕಾಣುತ್ತವೆ; ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ಹೈನ್ಸ್ ಕಾಯಗಳು ಸಂಖ್ಯೆಯಲ್ಲಿ ಕಡಿಮೆ, ಗಾತ್ರದಲ್ಲಿ ದೊಡ್ಡವು ಮತ್ತು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಕೋಶಪೊರೆಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದವು. ವರ್ಣಕ ನಿಕ್ಷೇಪವು ಮೂರನೆಯ ಅನುಕರಣಕಾರಿ ಅಂಶ: ಅದು ಕೋಶಗಳ ಫೋಕಲ್ ಸಮತಲದ ಹೊರಗೆ ಇರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ವೀಕ್ಷಣಾ ಕ್ಷೇತ್ರಗಳ ನಡುವೆ ಬದಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಬ್ರಿಲಿಯಂಟ್ ಕ್ರೆಸಿಲ್ ಬ್ಲೂ ಮತ್ತು ನ್ಯೂ ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ನಡುವಿನ ಹೋಲಿಕೆ

ಎರಡೂ ವರ್ಣಕಗಳು ರೆಟಿಕ್ಯುಲೋಸೈಟ್‌ಗಳಿಗೆ ಸುಪ್ರಾವೈಟಲ್ ವರ್ಣಕಗಳಾಗಿವೆ; ಆದರೆ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣವು ಅವುಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದಕ್ಕೆ ಆದ್ಯತೆ ನೀಡುತ್ತದೆ. ರಕ್ತಶಾಸ್ತ್ರದ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣಕ್ಕಾಗಿ ಅಂತರರಾಷ್ಟ್ರೀಯ ಮಂಡಳಿಯೊಂದಿಗೆ ಜಂಟಿಯಾಗಿ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಿ, CLSI H44 ಮಾನದಂಡದ ಪುಟದಲ್ಲಿ ಪಟ್ಟಿ ಮಾಡಿರುವ CLSI H44-A2 ರೆಟಿಕ್ಯುಲೋಸೈಟ್ ವಿಧಾನವು EDTA ರಕ್ತಕ್ಕೆ ನ್ಯೂ ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ವರ್ಣರಂಜನೆ ಮಾಡುವುದನ್ನು ಕೈಯಾರೆ ನಡೆಸುವ ತುಲನಾತ್ಮಕ ವಿಧಾನವೆಂದು ಗುರುತಿಸುತ್ತದೆ. ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ರಕ್ತಶಾಸ್ತ್ರ ಬೋಧನೆಯೂ ಕಾಣಿಕೆಯ ವಿಷಯದಲ್ಲಿ ಇದನ್ನು ಸಮರ್ಥಿಸುತ್ತದೆ: ನ್ಯೂ ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ತಂತುಗಳಿಗೆ ಹೆಚ್ಚು ಗಾಢವಾದ ಮತ್ತು ಏಕರೂಪವಾದ ವರ್ಣರಂಜನೆ ನೀಡುತ್ತದೆ; ಬ್ರಿಲಿಯಂಟ್ ಕ್ರೆಸಿಲ್ ಬ್ಲೂನಲ್ಲಿ ಉತ್ಪಾದನಾ ಬ್ಯಾಚ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಮಾದರಿಗಳ ನಡುವೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ವ್ಯತ್ಯಾಸವಿರುತ್ತದೆ.

ಆ ಸ್ಥಾನಮಾನಕ್ಕೆ ಒಂದು ಮಿತಿಯನ್ನೂ ಸ್ಪಷ್ಟಪಡಿಸಬೇಕು. ICSH ವಿಶ್ಲೇಷಕ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾರ್ಗಸೂಚಿ ಕೈಯಾರೆ ನಡೆಸುವ ನ್ಯೂ ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕ ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ಉಲ್ಲೇಖ ಹೋಲಿಕೆ ವಿಧಾನವಾಗಿ ಒಪ್ಪಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ. ಆದರೆ ಅದನ್ನು ವೀಕ್ಷಕರ ನಿರ್ಣಯಕ್ಕೆ ಅವಲಂಬಿತವಾದ ಮತ್ತು ತುಲನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ನಿಖರವಾದ ವಿಧಾನವೆಂದು ಹೇಳುತ್ತದೆ; ಲಭ್ಯವಿರುವಲ್ಲಿ ಫ್ಲೋ ಸೈಟೊಮೆಟ್ರಿಕ್ ಉಲ್ಲೇಖ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳಿಗೆ ಆದ್ಯತೆ ನೀಡುತ್ತದೆ. 2022ರಲ್ಲಿ 100 ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಹೋಲಿಸಿದ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, ಬಳಸಿದ ವಿಶ್ಲೇಷಕದ ಫಲಿತಾಂಶಗಳೊಂದಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದಾಗ ನ್ಯೂ ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂಗಿಂತ ಬ್ರಿಲಿಯಂಟ್ ಕ್ರೆಸಿಲ್ ಬ್ಲೂನಲ್ಲಿ ಕಡಿಮೆ ವ್ಯವಸ್ಥಿತ ವ್ಯತ್ಯಾಸ ಕಂಡುಬಂತು. ಇದನ್ನು ವರ್ಣರಂಜನೆ ವಿಧಾನಗಳ PMC ಹೋಲಿಕೆಯಲ್ಲಿ ವರದಿ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ. ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿಗಳಿಗೆ ಸಮರ್ಥಿಸಬಹುದಾದ ಸಾರಾಂಶ ಹೀಗಿದೆ: ನ್ಯೂ ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಅನ್ನು ಪ್ರಮಾಣೀಕೃತ ಕೈಯಾರೆ ನಡೆಸುವ ಹೋಲಿಕೆ ವಿಧಾನವಾಗಿ ಬಳಸಿ; ಸ್ಥಳೀಯವಾಗಿ ಬಳಸುವ ಯಾವುದೇ ಬ್ರಿಲಿಯಂಟ್ ಕ್ರೆಸಿಲ್ ಬ್ಲೂ ವಿಧಾನವನ್ನು ಅದರೊಂದಿಗೆ ಅಥವಾ ಸ್ವಯಂಚಾಲಿತ ವಿಧಾನದೊಂದಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿ ಪರಿಶೀಲಿಸಿ; ಎರಡೂ ಸಂದರ್ಭಗಳಲ್ಲಿ ಕೈಯಾರೆ ಮಾಡುವ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕ ಪರೀಕ್ಷೆಯಿಂದ ಫಲಿತಾಂಶಗಳಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ಹರಡುವಿಕೆಯನ್ನು ನಿರೀಕ್ಷಿಸಿ. ವಾಣಿಜ್ಯ ವರ್ಣಕದ ಬ್ಯಾಚ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ವ್ಯತ್ಯಾಸವಿದ್ದ ಕಾರಣ, ಹಳೆಯ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ ಸಾಹಿತ್ಯವು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ Azure B ಅನ್ನು ರಾಸಾಯನಿಕವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚು ಶುದ್ಧವಾದ ಪರ್ಯಾಯವೆಂದು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಿತ್ತು. ಇದು Azure B ಕುರಿತ ಮಾರ್ಷಲ್ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿದೆ; ವಿಧಾನಗಳ ಚರ್ಚೆಯಲ್ಲಿ ಕಾರಕದ ಗುಣಮಟ್ಟ ಇನ್ನೂ ಏಕೆ ಪ್ರಸ್ತಾಪವಾಗುತ್ತದೆ ಎಂಬುದನ್ನು ಇದು ವಿವರಿಸುತ್ತದೆ.

ಸಾಮಾನ್ಯ ತಪ್ಪುಗಳನ್ನು ತಪ್ಪಿಸುವುದು

ವಿಫಲವಾಗುವ ಬಹುತೇಕ ಮಾದರಿ ತಯಾರಿಕೆಗಳಿಗೆ ನಾಲ್ಕು ತಪ್ಪುಗಳು ಕಾರಣ. ನ್ಯೂ ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ N ಬದಲಿಗೆ ಸಾಮಾನ್ಯ ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ತರಿಸುವುದರಿಂದ ದುರ್ಬಲ ವರ್ಣರಂಜನೆ ಉಂಟಾಗುತ್ತದೆ; ಇದಕ್ಕೆ ಕಾರಣ ರಾಸಾಯನಿಕ ವ್ಯತ್ಯಾಸವೇ ಹೊರತು ತಂತ್ರವಲ್ಲ. ವೀಕ್ಷಿಸುವ ಮೊದಲು ಸ್ಥಿರೀಕರಣ ಅಥವಾ ಪ್ರತಿವರ್ಣರಂಜನೆ ಮಾಡುವುದರಿಂದ ಸುಪ್ರಾವೈಟಲ್ ಸಂಕೇತ ಕಳೆದುಹೋಗುತ್ತದೆ. ವರ್ಣಕದ ಅವಕ್ಷೇಪವನ್ನು ಕಣಗಳೆಂದು ಎಣಿಸುವುದರಿಂದ ಫಲಿತಾಂಶ ಹೆಚ್ಚಾಗುತ್ತದೆ; ಎರಡು ಕಣಗಳ ನಿಯಮ ಮತ್ತು ಶೋಧಿಸಿದ ವರ್ಣಕ ಇದನ್ನು ತಡೆಯುತ್ತವೆ. ರೆಟಿಕ್ಯುಲೋಸೈಟ್ ಶೇಕಡಾವಾರು ಪ್ರಮಾಣ ಕಡಿಮೆಯಿರುವಾಗ ತುಂಬಾ ಕಡಿಮೆ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಎಣಿಸುವುದರಿಂದ, ವಿಶಾಲ ವಿಶ್ವಾಸ ಮಿತಿಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದ್ದರೂ ನಿಖರವೆಂದು ಕಾಣುವ ಸಂಖ್ಯೆ ದೊರೆಯುತ್ತದೆ. ಪ್ರತಿಯೊಂದು ತಪ್ಪಿನಲ್ಲೂ ಒಂದೇ ಮಾದರಿ ಕಂಡುಬರುತ್ತದೆ: ಕಾರಕ ಬಳಸುವ ಹಂತದಲ್ಲೇ ನಿರ್ಧಾರವಾದ ಫಲಿತಾಂಶಕ್ಕೆ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕ ಪರೀಕ್ಷಕನು ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕವನ್ನು ದೂಷಿಸುತ್ತಾನೆ.