ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಸರಳ ರಂಜನೆ ಮತ್ತು ಗ್ರಾಂ ರಂಜನೆಯ ಹೋಲಿಕೆ

ಒಬ್ಬ ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿ E. coli ಎಂದು ಲೇಬಲ್ ಮಾಡಲಾದ ಕಲ್ಚರ್‌ನಿಂದ ತೆಳುವಾದ ಲೇಪನವನ್ನು ತಯಾರಿಸಿ, ಅದನ್ನು ಒಂದು ನಿಮಿಷ ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂನಿಂದ ಆವರಿಸಿ, ತೊಳೆದು, ತೈಲ ಇಮ್ಮರ್ಷನ್ ಮಸೂರದ ಮೂಲಕ ನೋಡುತ್ತಾನೆ. ವೀಕ್ಷಣಾ ಕ್ಷೇತ್ರದ ತುಂಬೆಲ್ಲ ನೀಲಿ ದಂಡಾಕಾರದ ಕೋಶಗಳು ಕಾಣುತ್ತವೆ. ಪ್ರಯೋಗಾಲಯ ವರದಿಯಲ್ಲಿ ಹೀಗೆ ಬರೆಯಲಾಗಿದೆ: "E. coli ಎಂದು ಗುರುತಿಸಲಾದ ಗ್ರಾಂ-ಋಣಾತ್ಮಕ ದಂಡಾಕಾರದ ಕೋಶಗಳು." ಗಮನಿಸಿದ ಸಂಗತಿ ಸರಿಯಾಗಿದೆ. ಆದರೆ ಆ ನಿರ್ಣಯಕ್ಕೆ ಆ ಸ್ಲೈಡ್ ಸಾಕ್ಷ್ಯ ಒದಗಿಸುವುದಿಲ್ಲ.

ಈ ತಪ್ಪು ಪರಿಕಲ್ಪನೆಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ್ದು, ತಾಂತ್ರಿಕವಾದುದಲ್ಲ. ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿಯು ಸರಳ ರಂಜನೆಯನ್ನು ವಿಭೇದಕ ಪರೀಕ್ಷೆಯಂತೆ ಪರಿಗಣಿಸಿದ್ದಾನೆ. ಸರಳ ರಂಜನೆ ಮತ್ತು ಗ್ರಾಂ ರಂಜನೆ ವಿಭಿನ್ನ ರಂಜನಾ ಪರಿಕಲ್ಪನೆಗಳನ್ನು ಆಧರಿಸಿರುವುದರಿಂದ ವಿಭಿನ್ನ ಪ್ರಶ್ನೆಗಳಿಗೆ ಉತ್ತರಿಸುತ್ತವೆ. ಒಂದು ಕೇಳುವುದು: ಇಲ್ಲಿ ಯಾವ ಆಕಾರವಿದೆ. ಇನ್ನೊಂದು ಕೇಳುವುದು: ಪರೀಕ್ಷೆಗೆ ಒಳಪಡಿಸಿದಾಗ ಕೋಶಭಿತ್ತಿ ಹೇಗೆ ವರ್ತಿಸುತ್ತದೆ. ಇವೆರಡನ್ನು ಗೊಂದಲಗೊಳಿಸಿದರೆ, ಸರಿಯಾಗಿ ರಂಜಿಸಿದ ಸ್ಲೈಡ್‌ನಿಂದಲೂ ಆಧಾರವಿಲ್ಲದ ವರದಿ ಹೊರಬರುತ್ತದೆ.

ಈ ಹೋಲಿಕೆಯು ಎರಡು ವಿಧಾನಗಳ ನಡುವಿನ ವ್ಯತ್ಯಾಸವನ್ನು ಸ್ಪಷ್ಟವಾಗಿರಿಸುತ್ತದೆ, ಪ್ರತಿ ಫಲಿತಾಂಶವು ಯಾವ ಹೇಳಿಕೆಗೆ ಆಧಾರ ನೀಡುತ್ತದೆ ಎಂಬುದನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿಗಳು ಹೆಚ್ಚಾಗಿ ಕೇಳುವ ಎರಡು ಪ್ರಶ್ನೆಗಳಿಗೆ ಉತ್ತರಿಸುತ್ತದೆ: ಗ್ರಾಂ ರಂಜನೆಯಲ್ಲಿ ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಬಳಸಬಹುದೇ, ಮತ್ತು E. coli ಯ ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ರಂಜನೆಯು ನಿಜವಾಗಿ ಏನನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ.

ಒಂದೇ ನೀಲಿ ಬಣ್ಣದ ಸರಳ ರಂಜನೆಯ ಕ್ಷೇತ್ರವನ್ನು ನೇರಳೆ ಮತ್ತು ಗುಲಾಬಿ ಬಣ್ಣದ ಗ್ರಾಂ ರಂಜನೆಯ ಕ್ಷೇತ್ರಗಳೊಂದಿಗೆ ಹೋಲಿಸುವ ವಿವರಣಾತ್ಮಕ ಮುಖಪುಟ ಫಲಕ. ಶೈಲೀಕೃತ ಚಿತ್ರಣ, ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕ ಛಾಯಾಚಿತ್ರವಲ್ಲ.

ಸಂಕ್ಷಿಪ್ತ ಉತ್ತರ

ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಸರಳ ರಂಜನೆಯು ರಂಜಿಸಬಹುದಾದ ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಕೋಶಕ್ಕೂ ಒಂದೇ ನೀಲಿ ಬಣ್ಣ ನೀಡುತ್ತದೆ. ಆದ್ದರಿಂದ ಅದು ರೂಪವಿಜ್ಞಾನವನ್ನು (ದಂಡಗಳು, ಗೋಳಗಳು, ಸುರುಳಿಗಳು) ಮತ್ತು ಜೋಡಣೆಯನ್ನು (ಒಂಟಿಯಾಗಿ, ಜೋಡಿಗಳಲ್ಲಿ, ಸರಪಳಿಗಳಲ್ಲಿ) ತೋರಿಸುತ್ತದೆ; ಗ್ರಾಂ ವರ್ಗದ ಬಗ್ಗೆ ಏನನ್ನೂ ತಿಳಿಸುವುದಿಲ್ಲ. ಗ್ರಾಂ ರಂಜನೆಯಲ್ಲಿ ಅಯೋಡಿನ್, ವರ್ಣನಿವಾರಣ ಹಂತ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿರಂಜಕವನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಆದ್ದರಿಂದ ಕೋಶ ಆವರಣಗಳು ರಂಜಕವನ್ನು ಹೇಗೆ ಉಳಿಸಿಕೊಳ್ಳುತ್ತವೆ ಎಂಬುದರ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾಗಳನ್ನು ಗ್ರಾಂ-ಧನಾತ್ಮಕ (ನೇರಳೆ) ಮತ್ತು ಗ್ರಾಂ-ಋಣಾತ್ಮಕ (ಗುಲಾಬಿ ಅಥವಾ ಕೆಂಪು) ಎಂದು ಬೇರ್ಪಡಿಸುತ್ತದೆ. ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಬಳಿಕ ಕಾಣುವ ನೀಲಿ ದಂಡಾಕಾರದ ಕೋಶಗಳ ಅರ್ಥ "ದಂಡಾಕಾರದ ಕೋಶಗಳು ಇವೆ." ಸಂಪೂರ್ಣ ಗ್ರಾಂ ಕ್ರಮದ ಬಳಿಕ ಕಾಣುವ ಗುಲಾಬಿ ದಂಡಾಕಾರದ ಕೋಶಗಳ ಅರ್ಥ "ಗ್ರಾಂ-ಋಣಾತ್ಮಕ ದಂಡಾಕಾರದ ಕೋಶಗಳು ಇವೆ." ಎರಡನೆಯ ಹೇಳಿಕೆಗೆ ಹೆಚ್ಚು ಬಲವಾದ ಆಧಾರವಿದೆ, ಏಕೆಂದರೆ ಆ ವಿಧಾನವು ಒಂದು ಹೆಚ್ಚುವರಿ ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಿದೆ.

ಈ ಲೇಖನಕ್ಕೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ, ಒಂದೇ ರಂಜಕವನ್ನು ಬಳಸುವ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾ ರಂಜನಾ ವಿಧಾನಗಳ ವಿಶಾಲ ಗುಂಪಿನ ಬಗ್ಗೆ ತಿಳಿಯಲು, ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕ ರಂಜನಾ ಅಟ್ಲಸ್ ನೋಡಿ.

ಸರಳ ರಂಜನೆ: ಒಂದು ರಂಜಕ, ಒಂದು ಪ್ರಶ್ನೆ

ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಒಂದು ಕ್ಷಾರೀಯ (ಧನ ಅಯಾನಿಕ) ರಂಜಕ. ಅದರ ಬಣ್ಣದ ಅಯಾನ್ ಧನ ವಿದ್ಯುದಾವೇಶವನ್ನು ಹೊಂದಿದ್ದು, ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲಗಳು ಮತ್ತು ಆಮ್ಲೀಯ ಮೇಲ್ಮೈ ಗುಂಪುಗಳು ಸೇರಿದಂತೆ ಕೋಶದಲ್ಲಿನ ಋಣ ವಿದ್ಯುದಾವೇಶದ ರಚನೆಗಳಿಗೆ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ. ಹೀಗಾಗಿ ತಿಳಿಯಾದ ಹಿನ್ನೆಲೆಯ ಮೇಲೆ ಕೋಶಗಳು ನೀಲಿಯಾಗಿ ಕಾಣುತ್ತವೆ. OpenStax ತನ್ನ ರಂಜನೆಯ ಅಧ್ಯಾಯದಲ್ಲಿ ಈ ಧನಾತ್ಮಕ ರಂಜನೆಯ ತತ್ವವನ್ನು ವಿವರಿಸುತ್ತದೆ. ರಂಜಕದ ಧನ ಅಯಾನ್ ಸ್ವತಃ ಒಂದು ಸಣ್ಣ, ಚಪ್ಪಟೆಯಾದ ಫೀನೋಥಯಾಜಿನ್ ಅಯಾನ್ ಆಗಿದ್ದು, ಅದನ್ನು ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ರಸಾಯನಶಾಸ್ತ್ರದ ಉಲ್ಲೇಖದಲ್ಲಿ ವಿವರಿಸಲಾಗಿದೆ; ಕ್ಲೋರೈಡ್ ಪ್ರತಿಅಯಾನ್ ಬಣ್ಣ ನೀಡುವುದಿಲ್ಲ.

ಪ್ರಮಾಣಿತ ಬೋಧನಾ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವನ್ನು ಉದ್ದೇಶಪೂರ್ವಕವಾಗಿ ಸರಳವಾಗಿಡಲಾಗಿದೆ: ತೆಳುವಾದ ಲೇಪನ ತಯಾರಿಸಿ, ಗಾಳಿಯಲ್ಲಿ ಒಣಗಿಸಿ, ಶಾಖದಿಂದ ಸ್ಥಿರಗೊಳಿಸಿ, ಸುಮಾರು ಒಂದು ನಿಮಿಷದವರೆಗೆ ಸುಮಾರು 1% ಜಲೀಯ ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂನಿಂದ ಆವರಿಸಿ, ನೀರಿನಿಂದ ನಿಧಾನವಾಗಿ ತೊಳೆದು, ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವ ಕಾಗದದಿಂದ ಒತ್ತಿ ಒಣಗಿಸಿ, ತೈಲ ಇಮ್ಮರ್ಷನ್ ಮೂಲಕ ಪರೀಕ್ಷಿಸಿ. LibreTexts ಬೋಧನಾ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವು ಇದೇ 1%, ಒಂದು ನಿಮಿಷದ ವಿಧಾನವನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ, ಜೊತೆಗೆ ಕೆಲವು ಪ್ರಯೋಗಾಲಯಗಳು ಅವಧಿಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತವೆ ಎಂದೂ ತಿಳಿಸುತ್ತದೆ. ರಂಜಕಬಂಧಕವಿಲ್ಲ, ವರ್ಣನಿವಾರಕವಿಲ್ಲ, ಎರಡನೆಯ ರಂಜಕವಿಲ್ಲ. ಇವುಗಳ ಅನುಪಸ್ಥಿತಿಯೇ ಮುಖ್ಯ ಅಂಶ. ಒಂದೇ ರಂಜಕವಿದ್ದು, ಆಯ್ದ ಕೋಶಗಳಿಂದ ಅದನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕುವ ಹಂತವಿಲ್ಲದ ಕಾರಣ, ರಂಜಕವನ್ನು ಬಂಧಿಸುವ ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಕೋಶವೂ ಒಂದೇ ಬಣ್ಣ ಪಡೆಯುತ್ತದೆ.

E. coli ಯಲ್ಲಿ ನಿರೀಕ್ಷಿತ ವೀಕ್ಷಣಾ ಕ್ಷೇತ್ರವು ನೀಲಿ ದಂಡಾಕಾರದ ಕೋಶಗಳನ್ನು (ಬ್ಯಾಸಿಲಿಗಳನ್ನು) ಒಂಟಿಯಾಗಿ, ಜೋಡಿಗಳಲ್ಲಿ ಅಥವಾ ಸಣ್ಣ ಗುಂಪುಗಳಲ್ಲಿ ತೋರಿಸುತ್ತದೆ. ನೀಲಿ ಬಣ್ಣ ರಂಜಕದಿಂದ ಬರುತ್ತದೆ. ದಂಡಾಕಾರವು ಜೀವಿಯ ಸ್ವರೂಪದಿಂದ ಬರುತ್ತದೆ. ಆದರೆ ಇವೆರಡರ ಸಂಯೋಜನೆಯು ಜೀವಿಯನ್ನು ಗುರುತಿಸುವುದಿಲ್ಲ, ಏಕೆಂದರೆ ಅನೇಕ ಪ್ರಜಾತಿಗಳು ದಂಡಾಕಾರದಲ್ಲಿವೆ ಮತ್ತು ಅನೇಕ ದಂಡಾಕಾರದ ಕೋಶಗಳು ಸರಳ ರಂಜನೆಯಲ್ಲಿ ನೀಲಿಯಾಗುತ್ತವೆ. ATCC ತನ್ನ ಸೂಕ್ಷ್ಮಜೀವಶಾಸ್ತ್ರ ಕಲ್ಚರ್ ಮಾರ್ಗದರ್ಶಿಯಲ್ಲಿ ರೂಪವಿಜ್ಞಾನಕ್ಕೆ ಮಾತ್ರ ಸೀಮಿತವಾದ ಈ ಮಿತಿಯನ್ನು ಸ್ಪಷ್ಟಪಡಿಸುತ್ತದೆ. ಸರಿಯಾದ ವರದಿ ಹೀಗಿರುತ್ತದೆ: "ನೀಲಿ ಬ್ಯಾಸಿಲಿಗಳು ಕಂಡುಬಂದಿವೆ." ಆಕಾರ ಮತ್ತು ಜೋಡಣೆಯನ್ನು ಮೀರಿದ ಯಾವುದೇ ಹೇಳಿಕೆಗೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಕ್ಷ್ಯ ಬೇಕು.

ಗ್ರಾಂ ರಂಜನೆ: ನಾಲ್ಕು ಕಾರಕಗಳು, ಒಂದು ವರ್ತನಾ ಪರೀಕ್ಷೆ

ಗ್ರಾಂ ರಂಜನೆಯು ವಿಭೇದಕ ರಂಜನೆ. ಇದು ಎಲ್ಲ ಕೋಶಗಳಿಗೂ ಒಂದೇ ಕ್ರಮವನ್ನು ಅನ್ವಯಿಸಿ, ಯಾವ ಕೋಶಗಳು ಮೊದಲ ರಂಜಕವನ್ನು ಉಳಿಸಿಕೊಳ್ಳುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಯಾವವು ಅದನ್ನು ಕಳೆದುಕೊಳ್ಳುತ್ತವೆ ಎಂಬುದನ್ನು ಪರಿಶೀಲಿಸುತ್ತದೆ. ಅಮೆರಿಕನ್ ಸೊಸೈಟಿ ಫಾರ್ ಮೈಕ್ರೋಬಯಾಲಜಿಯ ಗ್ರಾಂ ರಂಜನಾ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳು ಪ್ರಮಾಣಿತ ನಾಲ್ಕು ಹಂತಗಳ ಕ್ರಮವನ್ನು ನಿರ್ದಿಷ್ಟಪಡಿಸುತ್ತವೆ: ಕ್ರಿಸ್ಟಲ್ ವೈಯೊಲೆಟ್ (ಪ್ರಾಥಮಿಕ ರಂಜಕ), ಗ್ರಾಂ ಅಯೋಡಿನ್ (ರಂಜಕಬಂಧಕ), ಆಲ್ಕೊಹಾಲ್ ಅಥವಾ ಅಸಿಟೋನ್-ಆಲ್ಕೊಹಾಲ್ (ವರ್ಣನಿವಾರಕ), ಬಳಿಕ ಸಾಫ್ರಾನಿನ್ (ಪ್ರತಿರಂಜಕ).

ಹಂತ	ಕಾರಕ	ಕಾರ್ಯ	ಗ್ರಾಂ-ಧನಾತ್ಮಕ ಫಲಿತಾಂಶ	ಗ್ರಾಂ-ಋಣಾತ್ಮಕ ಫಲಿತಾಂಶ
1	ಕ್ರಿಸ್ಟಲ್ ವೈಯೊಲೆಟ್	ಪ್ರಾಥಮಿಕ ರಂಜಕ, ಎಲ್ಲ ಕೋಶಗಳಿಗೆ ನೇರಳೆ ಬಣ್ಣ ನೀಡುತ್ತದೆ	ನೇರಳೆ	ನೇರಳೆ
2	ಗ್ರಾಂ ಅಯೋಡಿನ್	ರಂಜಕಬಂಧಕ, ಕ್ರಿಸ್ಟಲ್ ವೈಯೊಲೆಟ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಸಂಕೀರ್ಣ ರಚಿಸುತ್ತದೆ	ನೇರಳೆ	ನೇರಳೆ
3	ವರ್ಣನಿವಾರಕ	ಸಂಕೀರ್ಣವನ್ನು ಆಯ್ದ ಕೋಶಗಳಿಂದ ತೆಗೆದುಹಾಕುತ್ತದೆ	ನೇರಳೆ ಬಣ್ಣ ಉಳಿಯುತ್ತದೆ	ಬಣ್ಣರಹಿತವಾಗುತ್ತದೆ
4	ಸಾಫ್ರಾನಿನ್	ಪ್ರತಿರಂಜಕ, ವರ್ಣನಿವಾರಿತ ಕೋಶಗಳಿಗೆ ಬಣ್ಣ ನೀಡುತ್ತದೆ	ನೇರಳೆ ಬಣ್ಣ ಉಳಿಯುತ್ತದೆ	ಗುಲಾಬಿ ಅಥವಾ ಕೆಂಪು

ಪ್ರಮಾಣಿತ ಬೋಧನಾ ಮಾದರಿಯು ಈ ವ್ಯತ್ಯಾಸವನ್ನು ಕೋಶ ಆವರಣದ ರಚನೆಯ ಮೂಲಕ ವಿವರಿಸುತ್ತದೆ. ಗ್ರಾಂ-ಧನಾತ್ಮಕ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ದಪ್ಪವಾದ ಪೆಪ್ಟಿಡೋಗ್ಲೈಕ್ಯಾನ್ ಭಿತ್ತಿಯಿದ್ದು, ಅದು ಆಲ್ಕೊಹಾಲ್ ತೊಳಕೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ನಿರ್ಜಲೀಕರಣಗೊಂಡು ಕ್ರಿಸ್ಟಲ್ ವೈಯೊಲೆಟ್–ಅಯೋಡಿನ್ ಸಂಕೀರ್ಣವನ್ನು ಉಳಿಸಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ. ಗ್ರಾಂ-ಋಣಾತ್ಮಕ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ತೆಳುವಾದ ಪೆಪ್ಟಿಡೋಗ್ಲೈಕ್ಯಾನ್ ಪದರದ ಜೊತೆಗೆ ಲಿಪಿಡ್‌ಗಳಿಂದ ಸಮೃದ್ಧವಾದ ಹೊರಪೊರೆ ಇರುತ್ತದೆ. ವರ್ಣನಿವಾರಕವು ಆ ಹೊರಪೊರೆಯನ್ನು ಅಸ್ತವ್ಯಸ್ತಗೊಳಿಸುವುದರಿಂದ ಸಂಕೀರ್ಣವು ತೊಳೆದುಹೋಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಬಳಿಕ ಕೋಶಗಳು ಸಾಫ್ರಾನಿನ್ ಅನ್ನು ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುತ್ತವೆ. NCBI Bookshelf ನ ಗ್ರಾಂ ರಂಜನೆಯ ವಿಮರ್ಶೆಯು ಈ ಕೋಶಭಿತ್ತಿಯ ವಿವರಣೆಯನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ. ಸಂಪೂರ್ಣ ಭೌತ-ರಸಾಯನಿಕ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯು ಕೇವಲ ಭಿತ್ತಿಯ ದಪ್ಪಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಸಂಕೀರ್ಣವಾಗಿದೆ ಎಂದು ತಜ್ಞರು ಸೇರಿಸುತ್ತಾರೆ. ಆದರೆ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದ ಫಲಿತಾಂಶವನ್ನು ವ್ಯಾಖ್ಯಾನಿಸುವಾಗ ವರ್ತನೆಯ ನಿಯಮ ಅನ್ವಯಿಸುತ್ತದೆ: ನೇರಳೆ ಎಂದರೆ ರಂಜಕ ಉಳಿದಿದೆ; ಗುಲಾಬಿ ಎಂದರೆ ಮೊದಲ ರಂಜಕ ಕಳೆದುಹೋಗಿ, ಬಳಿಕ ಪ್ರತಿರಂಜನೆಗೊಂಡಿದೆ.

ಹೋಲಿಕೆಗೆ ಹೊಂದಿಸಲಾದ ವಿವರಣಾತ್ಮಕ ಫಲಕಗಳು. ಎಡ: ನೀಲಿ ದಂಡಾಕಾರದ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಮಾತ್ರ ತೋರಿಸುವ ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಸರಳ ರಂಜನೆ. ಮಧ್ಯ: ನೇರಳೆ ಬಣ್ಣದ ಗ್ರಾಂ-ಧನಾತ್ಮಕ ಕ್ಷೇತ್ರ. ಬಲ: ಗುಲಾಬಿ-ಕೆಂಪು ಬಣ್ಣದ ಗ್ರಾಂ-ಋಣಾತ್ಮಕ E. coli ಕ್ಷೇತ್ರ. ವಿಧಾನಗಳ ಹೋಲಿಕೆಗಾಗಿ ಶೈಲೀಕೃತ ಚಿತ್ರಣ, ರೋಗನಿರ್ಣಯದ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕ ಛಾಯಾಚಿತ್ರವಲ್ಲ.

ವಿವರಣಾತ್ಮಕ ಫಲಕಗಳು. ವಿಧಾನಗಳ ಹೋಲಿಕೆಗಾಗಿ ಶೈಲೀಕೃತ ರೇಖಾಚಿತ್ರಗಳು, ಕ್ಯಾಮೆರಾದ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕ ಛಾಯಾಚಿತ್ರಗಳಲ್ಲ. ತರ್ಕವನ್ನು ಕಲಿಸಲು ಬಣ್ಣಗಳನ್ನು ಸರಳೀಕರಿಸಲಾಗಿದೆ: ಸರಳ ರಂಜನೆಯಲ್ಲಿ ಒಂದು ಬಣ್ಣ, ಗ್ರಾಂ ವರ್ಣನಿವಾರಣದ ಬಳಿಕ ಎರಡು ಬಣ್ಣಗಳು.

ಗ್ರಾಂ ರಂಜನೆಯಲ್ಲಿ ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಬಳಸಬಹುದೇ

ಈ ಪ್ರಶ್ನೆಯನ್ನು ಎರಡು ರೀತಿಯಲ್ಲಿ ಅರ್ಥೈಸಬಹುದು; ಅವುಗಳಿಗೆ ವಿಭಿನ್ನ ಉತ್ತರಗಳು ಬೇಕು.

ಮೊದಲ ಅರ್ಥ: ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂನಿಂದ ಒಮ್ಮೆ ಆವರಿಸುವುದು ಸಂಪೂರ್ಣ ಗ್ರಾಂ ಕ್ರಮಕ್ಕೆ ಬದಲಿಯಾಗಬಹುದೇ. ಇಲ್ಲ. ಅಯೋಡಿನ್, ವರ್ಣನಿವಾರಕ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿರಂಜಕವಿಲ್ಲದೆ ಯಾವುದೇ ವಿಭೇದಕ ಹಂತ ಇರುವುದಿಲ್ಲ. ಆದ್ದರಿಂದ ಯಾವುದೇ ಗ್ರಾಂ ವರ್ಗವನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಗುವುದಿಲ್ಲ. ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಮಾತ್ರ ಬಳಸಿದ ಬಳಿಕ ಕಂಡುಬರುವ ನೀಲಿ ಕ್ಷೇತ್ರವು ಸರಳ ರಂಜನೆಯ ಫಲಿತಾಂಶವೇ ಆಗಿರುತ್ತದೆ, ಆ ಬಾಟಲಿಯನ್ನು ಗ್ರಾಂ ಕಾರಕಗಳ ಪಕ್ಕದಲ್ಲಿಟ್ಟಿದ್ದರೂ ಸಹ. ಅದನ್ನು ಗ್ರಾಂ ಫಲಿತಾಂಶವೆಂದು ದಾಖಲಿಸಬೇಡಿ.

ಎರಡನೆಯ ಅರ್ಥ: ಹಂತ 4 ರಲ್ಲಿ ಪ್ರತಿರಂಜಕವಾಗಿ ಸಾಫ್ರಾನಿನ್ ಬದಲಿಗೆ ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಬಳಸಬಹುದೇ. ಕಾರ್ಯದ ದೃಷ್ಟಿಯಿಂದ ಅದು ವರ್ಣನಿವಾರಿತ ಕೋಶಗಳಿಗೆ ಬಣ್ಣ ನೀಡಬಲ್ಲದು. ಇಂತಹ ಬದಲಾವಣೆಯ ಬಳಿಕ ಗ್ರಾಂ-ಧನಾತ್ಮಕ ಕೋಶಗಳು ನೇರಳೆಯಾಗಿ ಮತ್ತು ಗ್ರಾಂ-ಋಣಾತ್ಮಕ ಕೋಶಗಳು ನೀಲಿಯಾಗಿ ಕಾಣುತ್ತವೆ ಎಂದು ಪಠ್ಯಪುಸ್ತಕದ ಅಭ್ಯಾಸವೊಂದು ಊಹಿಸುತ್ತದೆ. ಸರಿಯಾಗಿ ವರ್ಣನಿವಾರಿತ ಗ್ರಾಂ-ಋಣಾತ್ಮಕ ಕೋಶಗಳು ಬಹುತೇಕ ಬಣ್ಣರಹಿತವಾಗಿದ್ದು, ಮತ್ತೊಂದು ಧನ ಅಯಾನಿಕ ರಂಜಕವನ್ನು ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವುದರಿಂದ ಈ ತರ್ಕ ಸಮಂಜಸವಾಗಿದೆ. ಆದರೆ ಇದು ಪ್ರಮಾಣಿತ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವಲ್ಲ. ASM ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳು ಸಾಫ್ರಾನಿನ್ ಅನ್ನು ನಿರ್ದಿಷ್ಟಪಡಿಸುತ್ತವೆ; ಕೆಲವು ರೂಪಾಂತರಗಳಲ್ಲಿ ಕ್ಷಾರೀಯ ಫುಕ್ಸಿನ್‌ನಂತಹ ಮಾನ್ಯ ಪರ್ಯಾಯಗಳಿವೆ, ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಅಲ್ಲ. ಒಂದು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಅನಾನುಕೂಲವೂ ಇದೆ: ನೇರಳೆ ಮತ್ತು ಗುಲಾಬಿಯನ್ನು ಬೇರ್ಪಡಿಸುವುದಕ್ಕಿಂತ ನೇರಳೆ ಮತ್ತು ನೀಲಿಯನ್ನು ಬೇರ್ಪಡಿಸುವುದು ಕಷ್ಟ, ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಆರಂಭಿಕರಿಗೆ ಮತ್ತು ಬೆಳಕಿನ ತೀವ್ರತೆ ಕುಂದಿದ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕ ದೀಪಗಳ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ. ಪಠ್ಯಾಭ್ಯಾಸಕ್ಕೂ, ಮಹತ್ವವುಳ್ಳ ಯಾವುದೇ ಫಲಿತಾಂಶಕ್ಕೂ ನಿಮ್ಮ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನದಲ್ಲಿ ಹೆಸರಿಸಲಾದ ಪ್ರತಿರಂಜಕವನ್ನೇ ಬಳಸಿ; ಅದು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಸಾಫ್ರಾನಿನ್ ಆಗಿರುತ್ತದೆ. ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಪ್ರತಿರಂಜನೆಯನ್ನು ಸಮಾನ ಪ್ರಮಾಣಿತ ವಿಧಾನವೆಂದು ಪರಿಗಣಿಸದೆ, ಪ್ರಾತ್ಯಕ್ಷಿಕೆಯ ರೂಪಾಂತರವೆಂದು ಪರಿಗಣಿಸಿ.

ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಇತರ ಏಕ-ರಂಜಕ ಆಯ್ಕೆಗಳೊಂದಿಗೆ ಹೇಗೆ ಹೋಲಿಕೆಯಾಗುತ್ತದೆ ಎಂಬ ಸಂಬಂಧಿತ ಪ್ರಶ್ನೆಯನ್ನು ಸರಳ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾ ರಂಜನೆಗಳ ಹೋಲಿಕೆಯಲ್ಲಿ ಚರ್ಚಿಸಲಾಗಿದೆ.

E. coli ಯ ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ರಂಜನೆಯು ಏನನ್ನು ಸಾಬೀತುಪಡಿಸುತ್ತದೆ, ಏನನ್ನು ಸಾಬೀತುಪಡಿಸುವುದಿಲ್ಲ

E. coli ಒಂದು ಗ್ರಾಂ-ಋಣಾತ್ಮಕ ದಂಡಾಕಾರದ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾ. ಆದರೆ ಆ ವಾಕ್ಯವು ಹಲವು ವಿಧಾನಗಳಿಂದ ಪಡೆದ ಸಂಗತಿಗಳನ್ನು ಒಟ್ಟುಗೂಡಿಸುತ್ತದೆ: ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕ ವೀಕ್ಷಣೆಯಿಂದ ರೂಪವಿಜ್ಞಾನ, ಗ್ರಾಂ ರಂಜನೆಯಿಂದ ಗ್ರಾಂ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ, ಕಲ್ಚರ್ ಜೊತೆಗೆ ಜೀವರಾಸಾಯನಿಕ ಅಥವಾ ಅಣುಮಟ್ಟದ ಪರೀಕ್ಷೆಯಿಂದ ಗುರುತು. ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಲೇಪನವು ಮೊದಲ ಭಾಗಕ್ಕೆ ಮಾತ್ರ ಕೊಡುಗೆ ನೀಡುತ್ತದೆ. ರಂಜಿಸಿದ ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ ದಂಡಾಕಾರದ ಕೋಶಗಳಿವೆ ಮತ್ತು ಅವು ಹೇಗೆ ಜೋಡಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿವೆ ಎಂಬುದನ್ನು ಅದು ಸ್ಥಾಪಿಸುತ್ತದೆ. ವರ್ಣನಿವಾರಣ ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸದ ಕಾರಣ ಅದು ಗ್ರಾಂ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಸ್ಥಾಪಿಸುವುದಿಲ್ಲ. ಈ ಮಟ್ಟದ ವಿಭೇದನಾ ಸಾಮರ್ಥ್ಯದಲ್ಲಿ ಅನೇಕ ಪ್ರಜಾತಿಗಳ ದಂಡಾಕಾರದ ಕೋಶಗಳು ಒಂದೇ ರೀತಿಯಾಗಿ ಕಾಣುವುದರಿಂದ ಅದು ಪ್ರಜಾತಿಯನ್ನು ಗುರುತಿಸುವುದಿಲ್ಲ.

ವರದಿಗಳು ಊಹಿಸಬಹುದಾದ ರೀತಿಯಲ್ಲಿ ತಪ್ಪಾಗುವುದು ಇಲ್ಲಿಯೇ. ಬರಹಗಾರನು ಹಿನ್ನೆಲೆಯ ಜ್ಞಾನವನ್ನು ("ಈ ಕಲ್ಚರ್ E. coli ಆಗಿರಬೇಕೆಂದು ನಿರೀಕ್ಷಿಸಲಾಗಿದೆ, ಮತ್ತು E. coli ಗ್ರಾಂ-ಋಣಾತ್ಮಕವಾಗಿದೆ") ವೀಕ್ಷಣೆಯ ಸಾಲಿನಲ್ಲಿ ಸೇರಿಸುತ್ತಾನೆ. ಹೀಗಾಗಿ ವಾಸ್ತವದಲ್ಲಿ ಊಹಿಸಿದ್ದನ್ನು ಸ್ಲೈಡ್ ದೃಢೀಕರಿಸಿದಂತೆ ಕಾಣುತ್ತದೆ. ಹೆಚ್ಚು ಸ್ಪಷ್ಟವಾದ ವರದಿಯು ಈ ಅಂಶಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸುತ್ತದೆ: "ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಸರಳ ರಂಜನೆ: ನೀಲಿ ಬ್ಯಾಸಿಲಿಗಳು ಕಂಡುಬಂದಿವೆ; ರೂಪವಿಜ್ಞಾನ ಮಾತ್ರ, ಯಾವುದೇ ಗ್ರಾಂ ವರ್ಗವನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಿಲ್ಲ." ಬಳಿಕ, ನಿಯಂತ್ರಣ ಮಾದರಿಗಳೊಂದಿಗೆ ಗ್ರಾಂ ರಂಜನೆಯನ್ನು ಸರಿಯಾಗಿ ನಡೆಸಿದ್ದರೆ: "ಗ್ರಾಂ ರಂಜನೆ: ಗುಲಾಬಿ ದಂಡಾಕಾರದ ಕೋಶಗಳು, ಗ್ರಾಂ-ಋಣಾತ್ಮಕ ಫಲಿತಾಂಶಕ್ಕೆ ಹೊಂದಿಕೆಯಾಗುತ್ತವೆ." ಪ್ರಜಾತಿಯ ಗುರುತು ನಂತರ ಗುರುತಿಸುವ ಕಾರ್ಯಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಿಂದ ಬರುತ್ತದೆ, ಬಣ್ಣದಿಂದ ಮಾತ್ರವಲ್ಲ.

ಫಲಿತಾಂಶದ ವ್ಯಾಖ್ಯಾನಕ್ಕೆ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಮಾರ್ಗದರ್ಶಿ

ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದಲ್ಲಿ ಈ ನಿರ್ಣಯ ನಿಯಮವನ್ನು ಬಳಸಿ. ಎಲ್ಲ ಕೋಶಗಳೂ ಒಂದೇ ಬಣ್ಣದಲ್ಲಿದ್ದು, ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವು ವರ್ಣನಿವಾರಕವಿಲ್ಲದೆ ಒಂದೇ ರಂಜಕವನ್ನು ಬಳಸಿದ್ದರೆ, ನೀವು ಸರಳ ರಂಜನೆ ನಡೆಸಿದ್ದೀರಿ. ಆಕಾರ, ಗಾತ್ರದ ಅಂದಾಜು ಮತ್ತು ಜೋಡಣೆಯನ್ನು ವರದಿ ಮಾಡಿ. ಅಲ್ಲಿಗೇ ನಿಲ್ಲಿಸಿ. ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವು ತಿಳಿದಿರುವ ಧನಾತ್ಮಕ ಮತ್ತು ಋಣಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣ ಮಾದರಿಗಳೊಂದಿಗೆ ಕ್ರಿಸ್ಟಲ್ ವೈಯೊಲೆಟ್, ಅಯೋಡಿನ್, ವರ್ಣನಿವಾರಕ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿರಂಜಕವನ್ನು ಬಳಸಿದ್ದರೆ, ನೀವು ಗ್ರಾಂ ರಂಜನೆ ನಡೆಸಿದ್ದೀರಿ. ಬಣ್ಣದ ಜೊತೆಗೆ ರೂಪವಿಜ್ಞಾನವನ್ನು ವರದಿ ಮಾಡಿ: ಸರಪಳಿಗಳಲ್ಲಿರುವ ನೇರಳೆ ಗೋಳಾಕಾರದ ಕೋಶಗಳು, ಗುಲಾಬಿ ದಂಡಾಕಾರದ ಕೋಶಗಳು, ಇತ್ಯಾದಿ.

ಹೆಚ್ಚಿನ ಗೊಂದಲಕ್ಕೆ ಮೂರು ತಪ್ಪುಗಳು ಕಾರಣವಾಗುತ್ತವೆ. ಮೊದಲನೆಯದು, ನೀಲಿ ದಂಡಾಕಾರದ ಕೋಶಗಳನ್ನು E. coli ಯ ದೃಢೀಕರಣವೆಂದು ಅತಿಯಾಗಿ ವ್ಯಾಖ್ಯಾನಿಸುವುದು. ಎರಡನೆಯದು, ನೋಟ್‌ಬುಕ್‌ನಲ್ಲಿ ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಸ್ಲೈಡ್ ಅನ್ನು "ಗ್ರಾಂ ರಂಜನೆ" ಶೀರ್ಷಿಕೆಯಡಿ ದಾಖಲಿಸುವುದು; ಇದನ್ನು ನಂತರ ಓದುವವರು ತಪ್ಪಾಗಿ ಅರ್ಥೈಸುತ್ತಾರೆ. ಮೂರನೆಯದು, ಪ್ರತಿರಂಜಕಗಳನ್ನು ಯೋಚಿಸದೆ ಬದಲಿಸಿ, ಬಳಿಕ ವಿವಿಧ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯಗಳ ಬಣ್ಣಗಳ ಗುಂಪು ಒಂದೇ ಆಗಿದೆ ಎಂಬಂತೆ ಬಣ್ಣಗಳನ್ನು ಹೋಲಿಸುವುದು. ಪ್ರತಿ ತಪ್ಪಿಗೂ ಒಂದೇ ಪರಿಹಾರ: ನಿಜವಾಗಿ ನಡೆಸಿದ ವಿಧಾನವನ್ನು ಹೆಸರಿಸಿ, ಮತ್ತು ಆ ವಿಧಾನವು ಪರೀಕ್ಷಿಸುವುದನ್ನು ಮಾತ್ರ ಹೇಳಿ.

ಸರಳ ರಂಜನೆಯು ಕಡಿಮೆ ವಿಷಯಗಳನ್ನು ಮಾತ್ರ ದೃಢಪಡಿಸುವುದರಿಂದಲೇ ತನ್ನ ಸ್ಥಾನವನ್ನು ಗಳಿಸುತ್ತದೆ. ಅದು ವೇಗವಾದದ್ದು, ಸಣ್ಣ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನು ಸಹಿಸಬಲ್ಲದ್ದು ಮತ್ತು ಪ್ರಶ್ನೆಯು ರೂಪವಿಜ್ಞಾನಕ್ಕೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ್ದಾಗ ಸಾಕಾಗುತ್ತದೆ: ಅಲ್ಲಿ ಏನಾದರೂ ಇದೆಯೇ, ಮತ್ತು ಅದರ ಆಕಾರವೇನು. ಪ್ರಶ್ನೆಯು ವರ್ಗೀಕರಣಕ್ಕೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ್ದಾಗ, ವಿಭೇದಕ ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಿ. ನೀಲಿ ಸ್ಲೈಡ್ ಕೋಶಗಳು ಹೇಗೆ ಕಾಣುತ್ತವೆ ಎಂಬುದನ್ನು ತಿಳಿಸುತ್ತದೆ. ನೇರಳೆ ಅಥವಾ ಗುಲಾಬಿ ಸ್ಲೈಡ್ ಅವುಗಳ ಭಿತ್ತಿಗಳು ಹೇಗೆ ವರ್ತಿಸುತ್ತವೆ ಎಂಬುದನ್ನು ತಿಳಿಸುತ್ತದೆ. ಯಾವುದೇ ಒಂದು ಸ್ಲೈಡ್ ಮಾತ್ರದಿಂದ ಪ್ರಜಾತಿ ತಿಳಿಯುವುದಿಲ್ಲ.