ಆಮ್ಲ-ಸ್ಥಿರ ರಂಜನೆಯಲ್ಲಿ ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಅನ್ನು ಪ್ರತಿರಂಜಕವಾಗಿ ಏಕೆ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ

ಸಂಪೂರ್ಣ ರಂಜನಾ ಕ್ರಮದ ನಂತರ ತಂತ್ರಜ್ಞರೊಬ್ಬರು ಕಫದ ಸ್ಮಿಯರ್ ಅನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸುತ್ತಾರೆ. ನೀಲಿ ಕ್ಷೇತ್ರದ ಮೇಲೆ ಕೆಂಪು ದಂಡಾಕಾರದ ಜೀವಿಗಳು ಎದ್ದು ಕಾಣುತ್ತವೆ; ಆಮ್ಲ-ಸ್ಥಿರ ಬ್ಯಾಸಿಲ್ಲೈ ಕಂಡುಬಂದಿವೆ ಎಂಬ ವರದಿ ಹೊರಹೋಗುತ್ತದೆ. ಮರುದಿನ, ಮತ್ತೊಂದು ಸ್ಲೈಡ್‌ನಲ್ಲಿ ಕೆಂಪು ದಂಡಾಕಾರದ ಜೀವಿಗಳಿಲ್ಲದ ಏಕರೂಪದ ನೀಲಿ ಕ್ಷೇತ್ರ ಕಾಣುತ್ತದೆ; ಅದನ್ನು ಕ್ಷಯರೋಗಕ್ಕೆ ನಕಾರಾತ್ಮಕ ಎಂದು ವರದಿ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ. ಈ ವರದಿಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದು, ಸ್ಲೈಡ್ ಸಮರ್ಥಿಸುವುದಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿನ ನಿರ್ಣಯವನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ; ಅದು ಮೊದಲನೆಯ ವರದಿಯಲ್ಲ.

ಗೊಂದಲವು ಪರಿಕಲ್ಪನೆಯಲ್ಲಿದೆ. ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಮೈಕೋಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾಗಳನ್ನು ಹುಡುಕಲು ನೆರವಾಗುತ್ತದೆ ಎಂಬಂತೆ ತಂತ್ರಜ್ಞರು ನೀಲಿ ರಂಜಕವನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚುವ ರಾಸಾಯನಿಕ ಕ್ರಿಯೆಯ ಭಾಗವೆಂದು ಪರಿಗಣಿಸಿದರು. ಅದು ಹಾಗೆ ಮಾಡುವುದಿಲ್ಲ. ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಸ್ಲೈಡ್‌ಗೆ ತಾಗುವ ಹೊತ್ತಿಗೆ ಪರೀಕ್ಷೆ ಈಗಾಗಲೇ ಮುಗಿದಿರುತ್ತದೆ. ಫಲಿತಾಂಶವನ್ನು ಓದಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗುವಂತೆ ರಂಜಕವು ಕೇವಲ ಹಿನ್ನೆಲೆಗೆ ಬಣ್ಣ ನೀಡುತ್ತದೆ. ಆಮ್ಲ-ಸ್ಥಿರ ರಂಜನೆಯಲ್ಲಿ ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂನ ಉದ್ದೇಶವೇನು, ಬೇರೆ ಬಣ್ಣದ ಬದಲು ನೀಲಿಯನ್ನೇ ಏಕೆ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನೀಲಿ ಹಿನ್ನೆಲೆಯ ಮೇಲಿನ ಕೆಂಪು ಬಣ್ಣದಿಂದ ಯಾವ ನಿರ್ಣಯಕ್ಕೆ ಬರಬಹುದು ಎಂಬುದನ್ನು ಈ ಲೇಖನ ವಿವರಿಸುತ್ತದೆ.

ಸಂಕ್ಷಿಪ್ತ ಉತ್ತರ

ಆಮ್ಲ-ಸ್ಥಿರ ರಂಜನೆಯು ಮೂರು ಪರಿಕಲ್ಪನೆಗಳನ್ನು ಆಧರಿಸಿದ ವಿಭೇದಕ ಪರೀಕ್ಷೆ. ಪ್ರಾಥಮಿಕ ರಂಜಕವಾದ ಕಾರ್ಬಾಲ್ ಫುಕ್ಸಿನ್ ಅನ್ನು ಮೇಣದಂಥ ಆವರಣವಿರುವ ಮೈಕೋಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾ ಸೇರಿದಂತೆ ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಕೋಶದೊಳಗೂ ಬಲವಂತವಾಗಿ ಪ್ರವೇಶಿಸುವಂತೆ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ. ಬಣ್ಣ ತೆಗೆಯುವ ದ್ರವವಾದ ಆಮ್ಲ-ಆಲ್ಕೋಹಾಲ್ ಸಾಮಾನ್ಯ ಕೋಶಗಳಿಂದ ಕೆಂಪು ರಂಜಕವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ಆಮ್ಲ-ಸ್ಥಿರ ಕೋಶಗಳಿಂದ ಅದನ್ನು ಹೊರತೆಗೆಯಲು ವಿಫಲವಾಗುತ್ತದೆ. ನಂತರ ಪ್ರತಿರಂಜಕವಾದ ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ, ಬಣ್ಣ ತೆಗೆಯುವ ದ್ರವವು ರಂಜಕವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಿದ ಎಲ್ಲವಕ್ಕೂ ಬಣ್ಣ ನೀಡುತ್ತದೆ. ಇದರಿಂದ ಆಮ್ಲ-ಸ್ಥಿರವಲ್ಲದ ಕೋಶಗಳು, ಆತಿಥೇಯ ಕೋಶಗಳು ಮತ್ತು ಅವಶೇಷಗಳು ನೀಲಿಯಾಗಿ ಕಾಣುತ್ತವೆ; ಆಮ್ಲ-ಸ್ಥಿರ ಬ್ಯಾಸಿಲ್ಲೈ ಕೆಂಪಾಗಿಯೇ ಉಳಿಯುತ್ತವೆ. ಪ್ರತಿರಂಜಕವು ಬಣ್ಣದ ವೈದೃಶ್ಯವನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ. ಕೋಶವನ್ನು ಆಮ್ಲ-ಸ್ಥಿರವಾಗಿಸುವ ರಾಸಾಯನಿಕ ಗುಣಗಳಲ್ಲಿ ಅದು ಯಾವುದೇ ಪಾತ್ರ ವಹಿಸುವುದಿಲ್ಲ.

ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಹಂತ ಏನು ಮಾಡುತ್ತದೆ

ಕೆಳಗಿನ ರೇಖಾಚಿತ್ರವು ಕೆಲಸದ ವಿಭಜನೆಯನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ. ಅದನ್ನು ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವಾಗಿ ಎಡದಿಂದ ಬಲಕ್ಕೆ ಓದಿ; ಪ್ರತಿಯೊಂದು ರಂಜನಾ ವಿಧಾನಗಳ ಗುಂಪು ವಿಭಿನ್ನ ಪ್ರಶ್ನೆಯನ್ನು ಕೇಳುತ್ತದೆ ಎಂಬ ನೆನಪಿಗಾಗಿ ಕೆಳಗಿನ ಪಟ್ಟಿಯನ್ನು ಓದಿ.

ಮೊದಲು ಒಳಪ್ರವೇಶ. ಮೈಕೋಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾಗಳ ಆವರಣವು ಅಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಜಲವಿರೋಧಿಯಾಗಿರುವುದರಿಂದ ಅವು ಸಾಮಾನ್ಯ ಜಲೀಯ ರಂಜಕಗಳ ಪ್ರವೇಶವನ್ನು ತಡೆಯುತ್ತವೆ; ಆದ್ದರಿಂದ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವು ಬಲವಂತದ ಪ್ರವೇಶವನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ. ಝೀಲ್-ನೀಲ್ಸೆನ್ ವಿಧಾನದಲ್ಲಿ, ಆವಿ ಬರುವಂತೆ ಬಿಸಿಮಾಡುವುದು ಫೀನಾಲ್ ಹೊಂದಿರುವ ಕಾರ್ಬಾಲ್ ಫುಕ್ಸಿನ್ ಅನ್ನು ಮೇಣದಂಥ ಕೋಶಗೋಡೆಯ ಮೂಲಕ ಒಳಕ್ಕೆ ದೂಡುತ್ತದೆ. ಕಿನ್ಯೌನ್ ಶೀತ ವಿಧಾನದಲ್ಲಿ, ಬಿಸಿಮಾಡುವ ಬದಲು ಬಹಳ ಹೆಚ್ಚು ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಪ್ರಾಥಮಿಕ ರಂಜಕ ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ; ಕೆಲವು ಮಾರ್ಪಡಿಸಿದ ಉಷ್ಣರಹಿತ ವಿಧಾನಗಳಲ್ಲಿ ಮೇಲ್ಮೈ-ಸಕ್ರಿಯ ಪದಾರ್ಥಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಅಮೆರಿಕನ್ ಸೊಸೈಟಿ ಫಾರ್ ಮೈಕ್ರೋಬಯಾಲಜಿಯ ಆಮ್ಲ-ಸ್ಥಿರ ರಂಜನಾ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳು ಈ ಎರಡೂ ಮಿಶ್ರಣಗಳನ್ನು ಅಕ್ಕಪಕ್ಕದಲ್ಲಿ ದಾಖಲಿಸುತ್ತವೆ. ಸಾಂದ್ರತೆಯ ವ್ಯತ್ಯಾಸ ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿದೆ: ಬಿಸಿಮಾಡುವ ವಿಧಾನದಲ್ಲಿ ಪ್ರತಿ 100 mL ಗೆ ಸುಮಾರು 0.3 g ಮೂಲೀಯ ಫುಕ್ಸಿನ್, ಶೀತ ವಿಧಾನದಲ್ಲಿ ಸುಮಾರು 4 g.

ಎರಡನೆಯದು ವಿಭೇದನ. ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ 97 mL ನ 95 percent ಎಥನಾಲ್‌ನಲ್ಲಿ 3 mL ಸಾಂದ್ರ ಹೈಡ್ರೋಕ್ಲೋರಿಕ್ ಆಮ್ಲವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ ತಯಾರಿಸುವ ಆಮ್ಲ-ಆಲ್ಕೋಹಾಲ್, ವಿಶೇಷ ನಿರೋಧಕತೆ ಇಲ್ಲದ ಕೋಶಗೋಡೆಯಿರುವ ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಕೋಶದಿಂದ ಕೆಂಪು ರಂಜಕವನ್ನು ತೊಳೆದುಹಾಕುತ್ತದೆ. ಅಖಂಡ ಮೈಕೋಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಲ್ ಲಿಪಿಡ್ ಆವರಣವಿರುವ ಕೋಶಗಳು ರಂಜಕವನ್ನು ಉಳಿಸಿಕೊಳ್ಳುತ್ತವೆ. ಇಡೀ ವಿಧಾನವು ಅವಲಂಬಿಸಿರುವ ಹಂತ ಇದೇ; ಕೆಳಗೆ ಚರ್ಚಿಸಿರುವಂತೆ, ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಣೆಯ ರೀತಿಗೆ ಅತ್ಯಂತ ಸಂವೇದನಾಶೀಲವಾದ ಹಂತವೂ ಇದೇ.

ಕೊನೆಯದು ಬಣ್ಣದ ವೈದೃಶ್ಯ. ಈಗ ಸ್ಲೈಡ್‌ನಲ್ಲಿ ರಂಜಕ ಕಳೆದುಕೊಂಡ ಕೋಶಗಳ ಬಹುತೇಕ ಬಣ್ಣರಹಿತ ಹಿನ್ನೆಲೆಯ ಮೇಲೆ ಕೆಂಪು ಆಮ್ಲ-ಸ್ಥಿರ ಕೋಶಗಳಿರುತ್ತವೆ. 0.3 percent w/v ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ, ಕೆಂಪಿನಿಂದ ಗರಿಷ್ಠವಾಗಿ ಭಿನ್ನವಾಗಿರುವ ಬಣ್ಣದ ಮೂಲಕ ಆ ಹಿನ್ನೆಲೆ ಮತ್ತೆ ಕಾಣುವಂತೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ಪ್ರತಿರಂಜನೆ ಅಲ್ಪಾವಧಿಯದ್ದು: ಬಿಸಿಮಾಡುವ ವಿಧಾನದಲ್ಲಿ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ 20 ರಿಂದ 30 ಸೆಕೆಂಡುಗಳು, ಕೆಲವು ಶೀತ-ವಿಧಾನದ ರೂಪಾಂತರಗಳಲ್ಲಿ ಕೆಲವು ನಿಮಿಷಗಳವರೆಗೆ. ಈ ಅವಧಿಯು ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿರುತ್ತದೆ; ಅದು ರಂಜಕದ ಸ್ವಂತ ಗುಣವಲ್ಲ.

ಈ ರಂಜಕವೇ ಏಕೆ, ನೀಲಿಯೇ ಏಕೆ

ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಧನಾಯನಿಕ ಮೂಲೀಯ ರಂಜಕ. ಅಂದರೆ ಅದರ ಬಣ್ಣದ ಅಯಾನು ಧನ ವಿದ್ಯುದಾವೇಶವನ್ನು ಹೊಂದಿದ್ದು, ಬಣ್ಣ ತೆಗೆದ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾ, ಆತಿಥೇಯ ಕೋಶಗಳು ಮತ್ತು ಅವಶೇಷಗಳ ಋಣ ವಿದ್ಯುದಾವೇಶಿತ ಮೇಲ್ಮೈಗಳಿಗೆ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ. ಓಪನ್‌ಸ್ಟ್ಯಾಕ್ಸ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮಜೀವವಿಜ್ಞಾನ ಈ ವಿದ್ಯುದಾವೇಶದ ತರ್ಕವನ್ನು ಮೂಲೀಯ ರಂಜಕಗಳ ಹಿಂದಿರುವ ಸಾಮಾನ್ಯ ತತ್ವವೆಂದು ವಿವರಿಸುತ್ತದೆ. ಆದರೆ ಇಲ್ಲಿ ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ರಾಸಾಯನಿಕವಾಗಿ ಅನನ್ಯವಲ್ಲ. ಕ್ರಿಸ್ಟಲ್ ವೈಲೆಟ್ ಮತ್ತು ಸ್ಯಾಫ್ರನಿನ್ ಕೂಡ ಮೂಲೀಯ ರಂಜಕಗಳೇ. ಈ ಆಯ್ಕೆ ದೃಶ್ಯಾತ್ಮಕವಾದದ್ದು, ರಾಸಾಯನಿಕವಾದದ್ದಲ್ಲ.

ಕೆಂಪು ದಂಡಾಕಾರದ ಜೀವಿಗಳಿಗೆ ವೈದೃಶ್ಯವಿರುವ ವರ್ಣದ ಹಿನ್ನೆಲೆ ಬೇಕು; ಪ್ರಕಾಶಮಾನ-ಕ್ಷೇತ್ರ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕ ವೀಕ್ಷಣೆಗೆ ಅತ್ಯಂತ ಉಪಯುಕ್ತವಾಗುವ ರೀತಿಯಲ್ಲಿ ನೀಲಿ ಬಣ್ಣವು ಕೆಂಪಿಗೆ ವಿರುದ್ಧವಾಗಿರುತ್ತದೆ. ಸ್ಯಾಫ್ರನಿನ್ ಸೂಕ್ತ ಪ್ರತಿರಂಜಕವಾಗುವುದಿಲ್ಲ. ಏಕೆಂದರೆ ಅದರ ಅಂತಿಮ ಗುಲಾಬಿ-ಕೆಂಪು ಬಣ್ಣವು ಉಳಿದುಕೊಂಡ ಕಾರ್ಬಾಲ್ ಫುಕ್ಸಿನ್‌ನ ಬಣ್ಣಕ್ಕೆ ತುಂಬ ಹತ್ತಿರವಾಗಿದ್ದು, ವಿಧಾನವು ಸೃಷ್ಟಿಸಿದ ಭೇದವನ್ನೇ ಅಳಿಸಿಹಾಕುತ್ತದೆ. ಕ್ರಿಸ್ಟಲ್ ವೈಲೆಟ್ ಗಾಢ ನೇರಳೆ ಹಿನ್ನೆಲೆಯನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ; ಅದು ತೆಳ್ಳಗಿನ ಕೆಂಪು ಬ್ಯಾಸಿಲ್ಲೈಗಳಿಂದ ಗಮನವನ್ನು ಬೇರೆಡೆ ಸೆಳೆಯುತ್ತದೆ. ಇದರ ಕೆಲಸ ಬಣ್ಣದ ವೈದೃಶ್ಯವೇ ಹೊರತು ರಾಸಾಯನಿಕ ಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲ ಎಂಬುದಕ್ಕೆ ಅತ್ಯಂತ ಬಲವಾದ ಸಾಕ್ಷಿ ಪರ್ಯಾಯ ಬಳಕೆ: ಕೆಲವು ಪಶುವೈದ್ಯಕೀಯ ಮತ್ತು ಮಾರ್ಪಡಿಸಿದ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳಲ್ಲಿ ಮ್ಯಾಲಕೈಟ್ ಗ್ರೀನ್ ಹಾಗೂ ಬ್ರಿಲಿಯಂಟ್ ಗ್ರೀನ್‌ನಂತಹ ಹಸಿರು ಪ್ರತಿರಂಜಕಗಳನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಆದರೂ ಪರೀಕ್ಷೆ ಕೆಲಸ ಮಾಡುತ್ತದೆ, ಏಕೆಂದರೆ ಸ್ಪಷ್ಟವಾಗಿ ಭಿನ್ನವಾದ ಯಾವುದೇ ವರ್ಣವೂ ಅದೇ ಕೆಲಸ ಮಾಡುತ್ತದೆ.

ಇದರಿಂದ ಎರಡು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಅಂಶಗಳು ಹೊರಹೊಮ್ಮುತ್ತವೆ. ಮೊದಲನೆಯದು, ಪ್ರಮಾಣಿತ ತಯಾರಿಕಾ ವಿಧಾನವು ಯಾವುದೇ pH ಹೊಂದಾಣಿಕೆಯನ್ನು ಸೂಚಿಸುವುದಿಲ್ಲ. ಈ ಸರಳ ಜಲೀಯ 0.3 percent ದ್ರಾವಣವನ್ನು, ಬೇರೆ ರಂಜನಾ ಪರಿಕಲ್ಪನೆಗೆ ಸೇರಿದ ಲೋಫ್ಲರ್‌ನ ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಮುಂತಾದ ಕ್ಷಾರೀಯ ಮಿಶ್ರಣಗಳೊಂದಿಗೆ ಗೊಂದಲಗೊಳಿಸಬೇಡಿ. ಎರಡನೆಯದು, ಅತಿಯಾದ ಬಳಕೆ ಹಾನಿಕರ. ಅತಿಯಾಗಿ ದಟ್ಟವಾದ ನೀಲಿ ಹಿನ್ನೆಲೆಯು ವಿರಳವಾಗಿರುವ ಬ್ಯಾಸಿಲ್ಲೈಗಳನ್ನು ಮರೆಮಾಡಬಹುದು ಎಂದು ಅಂಗಾಂಶವಿಜ್ಞಾನದ ಸಾಹಿತ್ಯವು ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ಎಚ್ಚರಿಸುತ್ತದೆ. ಆದ್ದರಿಂದ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವು ಅನುಮತಿಸುವುದಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಸಮಯ ಸ್ಲೈಡ್ ಅನ್ನು ರಂಜಕದಲ್ಲಿ ಮುಳುಗಿಸಿಡುವುದು ಯಾವುದೇ ಲಾಭವಿಲ್ಲದೆ ಓದುವ ಸ್ಪಷ್ಟತೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.

ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ಸಾಧ್ಯವಾಗಿಸುವ ಕೋಶಗೋಡೆಯ ರಸಾಯನಶಾಸ್ತ್ರ

ಆಮ್ಲ-ಆಲ್ಕೋಹಾಲ್ ಭೇದಿಸುವುದಕ್ಕೆ ಕಾರಣ ಮೈಕೋಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಲ್ ಆವರಣದಲ್ಲಿದೆ. ಅದರ ರಚನಾತ್ಮಕ ತಿರುಳು ಮೈಕೋಲಿಲ್-ಅರಬಿನೋಗ್ಯಾಲಕ್ಟಾನ್-ಪೆಪ್ಟಿಡೋಗ್ಯ್ಲೈಕಾನ್ ಸಂಕೀರ್ಣವಾಗಿದೆ: ಪೆಪ್ಟಿಡೋಗ್ಯ್ಲೈಕಾನ್ ಅರಬಿನೋಗ್ಯಾಲಕ್ಟಾನ್‌ಗೆ ಜೋಡಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿರುತ್ತದೆ; ಅದರ ಹೊರ ತುದಿಗಳಲ್ಲಿ ಅತ್ಯಂತ ಉದ್ದದ ಸರಪಳಿಯ ಮೈಕೋಲಿಕ್ ಆಮ್ಲಗಳಿರುತ್ತವೆ. ಇವು ಅಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಪ್ರವೇಶಸಾಧ್ಯತೆಯ, ಲಿಪಿಡ್ ಸಮೃದ್ಧ ಹೊರಗಿನ ಮೈಕೋಮೆಂಬ್ರೇನ್ ಅನ್ನು ರೂಪಿಸುತ್ತವೆ. ಮೈಕೋಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಲ್ ಹೊರಪೊರೆಯ ಕುರಿತ ಸಮೀಕ್ಷೆ ಈ ರಚನೆಯನ್ನು ವಿವರಿಸುತ್ತದೆ. ಈ ತಡೆಗೋಡೆ ಎರಡೂ ದಿಕ್ಕುಗಳಲ್ಲಿ ಕೆಲಸ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ಅದು ರಂಜಕದ ಒಳಪ್ರವೇಶವನ್ನು ತಡೆಯುತ್ತದೆ; ಅದಕ್ಕಾಗಿಯೇ ಒಳಪ್ರವೇಶಕ್ಕೆ ಉಷ್ಣ ಅಥವಾ ಬಲಪಡಿಸಿದ ಪ್ರಾಥಮಿಕ ರಂಜಕ ಬೇಕಾಗುತ್ತದೆ. ಅದು ರಂಜಕದ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಯನ್ನೂ ತಡೆಯುತ್ತದೆ; ಅದಕ್ಕಾಗಿಯೇ ಕಾರ್ಬಾಲ್ ಫುಕ್ಸಿನ್ ಒಮ್ಮೆ ಒಳಹೋದ ನಂತರ ಆಮ್ಲ-ಆಲ್ಕೋಹಾಲ್ ಅದನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲು ವಿಫಲವಾಗುತ್ತದೆ. ಸಾಮಾನ್ಯ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾಗಳಲ್ಲಿ ಈ ಆವರಣ ಇರುವುದಿಲ್ಲ, ಆದ್ದರಿಂದ ಅವು ರಂಜಕವನ್ನು ಕಳೆದುಕೊಳ್ಳುತ್ತವೆ. ಹೀಗಾಗಿ ಆಮ್ಲ-ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು, ಫುಕ್ಸಿನ್ ಮೈಕೋಲಿಕ್ ಆಮ್ಲಕ್ಕೆ ರಾಸಾಯನಿಕವಾಗಿ ಬಂಧಿಸುವುದಾಗಿ ನೋಡದೆ, ಲಿಪಿಡ್ ತಡೆಗೋಡೆಯ ವಿದ್ಯಮಾನವಾಗಿ ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳುವುದು ಸೂಕ್ತ.

ಈ ರಸಾಯನಶಾಸ್ತ್ರವು ಒಂದು ಸಾಮಾನ್ಯ ಒಗಟನ್ನೂ ವಿವರಿಸುತ್ತದೆ: ಗ್ರಾಂ ವಿಧಾನದಲ್ಲಿ ಮೈಕೋಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾಗಳು ಸರಿಯಾಗಿ ಮತ್ತು ಊಹಿಸಬಹುದಾದ ರೀತಿಯಲ್ಲಿ ಬಣ್ಣಗೊಳ್ಳುವುದಿಲ್ಲ; ಕೆಲವೊಮ್ಮೆ ಮಸುಕಾದ ಮಣಿಸರದಂಥ ರೂಪಗಳಾಗಿ ಅಥವಾ ಬಣ್ಣಗೊಳ್ಳದ ನೆರಳಿನಂಥ ರೂಪಗಳಾಗಿ ಕಾಣುತ್ತವೆ. ಅವುಗಳ ಜಲವಿರೋಧಿ ಕೋಶಗೋಡೆಯು ಕ್ರಿಸ್ಟಲ್ ವೈಲೆಟ್‌ನ ಒಳಪ್ರವೇಶವನ್ನು ಮಿತಿಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ. ಆಮ್ಲ-ಸ್ಥಿರ ರಂಜನೆಯು ಮಾರ್ಪಡಿಸಿದ ಗ್ರಾಂ ರಂಜನೆಯಲ್ಲ. ಅದು ಕೋಶಗೋಡೆಯ ಬೇರೆ ಗುಣವನ್ನು ಆಧರಿಸಿರುವ ವಿಭಿನ್ನ ವಿಭೇದಕ ತತ್ವವಾಗಿದೆ. ಇತರ ಎರಡು ವಿಧಾನಗಳಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದಂತೆ ಸರಳ ರಂಜನೆ ಮತ್ತು ಗ್ರಾಂ ರಂಜನೆಯ ಹೋಲಿಕೆ ಇದನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ.

ಮೂರು ವಿಧಾನಗಳು, ಮೂರು ಪ್ರಶ್ನೆಗಳು

ಒಂದೇ ರಂಜಕ ಬಳಸುವ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾ ವಿಧಾನಗಳ ವಿಶಾಲ ಗುಂಪಿಗಾಗಿ, ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕ ರಂಜನಾ ಅಟ್ಲಾಸ್ ನೋಡಿ.

ನೀಲಿ ಹಿನ್ನೆಲೆಯ ಮೇಲಿನ ಕೆಂಪು ಏನನ್ನು ಸಾಬೀತುಪಡಿಸಲಾರದು

ಕೆಂಪು ದಂಡಾಕಾರದ ಜೀವಿಗಳು ಎಂದರೆ, ಆಮ್ಲ-ಆಲ್ಕೋಹಾಲ್‌ಗೆ ಒಡ್ಡಿದ ನಂತರವೂ ಜೀವಿಗಳು ಕಾರ್ಬಾಲ್ ಫುಕ್ಸಿನ್ ಅನ್ನು ಉಳಿಸಿಕೊಂಡಿವೆ. ಈ ಕಂಡುಬರುವಿಕೆ Mycobacterium tuberculosis ಗೆ ಹೊಂದಿಕೆಯಾಗುತ್ತದೆ. ಆದರೆ ಇತರ ಮೈಕೋಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾಗಳೂ ಆಮ್ಲ-ಸ್ಥಿರವಾಗಿವೆ ಎಂದು CDC ಕ್ಷಯರೋಗ ರೋಗನಿರ್ಣಯ ಮಾರ್ಗದರ್ಶನ ಸ್ಪಷ್ಟವಾಗಿ ತಿಳಿಸುತ್ತದೆ. ಹೀಗಾಗಿ ಪ್ರಭೇದವನ್ನು ಗುರುತಿಸಲು ಕಲ್ಚರ್ ಮತ್ತು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳು ಬೇಕು, ಬಣ್ಣವಲ್ಲ.

ತಾಂತ್ರಿಕ ದೋಷಗಳು ಎರಡು ತೊಳೆಯುವ ಹಂತಗಳ ಸುತ್ತ ಹೆಚ್ಚಾಗಿ ಕಂಡುಬರುತ್ತವೆ. ಅಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಬಣ್ಣ ತೆಗೆಯುವುದರಿಂದ ಹಿನ್ನೆಲೆಯ ವಸ್ತು ಕೆಂಪಾಗಿಯೇ ಉಳಿದು, ತಪ್ಪು ಧನಾತ್ಮಕ ಓದುಗಳಿಗೆ ಅವಕಾಶವಾಗುತ್ತದೆ. ಅತಿಯಾಗಿ ಬಣ್ಣ ತೆಗೆಯುವುದು ದುರ್ಬಲವಾಗಿ ಉಳಿದಿರುವ ಪ್ರಾಥಮಿಕ ರಂಜಕವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಿ, ತಪ್ಪು ನಕಾರಾತ್ಮಕ ಫಲಿತಾಂಶಗಳಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ. ಅತಿಯಾಗಿ ಪ್ರತಿರಂಜಕ ಹಚ್ಚುವುದರಿಂದ ವಿರಳವಾಗಿರುವ ಬ್ಯಾಸಿಲ್ಲೈ ನೀಲಿ ಬಣ್ಣದಲ್ಲಿ ಮರೆಯಾಗುತ್ತವೆ. ದಪ್ಪ ಸ್ಮಿಯರ್‌ಗಳು, ಅವಕ್ಷೇಪಗೊಂಡ ಕಾರಕಗಳು ಮತ್ತು ಕಲುಷಿತ ತೊಳೆಯುವ ನೀರು ತಮ್ಮದೇ ಕೃತಕ ಗುರುತುಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸುತ್ತವೆ.

ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಣೆ ಎಷ್ಟೇ ಸರಿಯಾಗಿದ್ದರೂ, ಸಂವೇದನಾಶೀಲತೆಯನ್ನು ಜೀವಿಗಳ ಪ್ರಮಾಣ ಮಿತಿಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ. ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ಸ್ಮಿಯರ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕ ಪರೀಕ್ಷೆಗೆ ಪ್ರತಿ ಮಿಲಿಲೀಟರ್ ಕಫದಲ್ಲಿ ಸುಮಾರು 5,000 ರಿಂದ 10,000 ಬ್ಯಾಸಿಲ್ಲೈ ಬೇಕಾಗುತ್ತವೆ. ಹಳೆಯ CDC ಸಾಕ್ಷ್ಯ ಸಮೀಕ್ಷೆಗಳು, ಕಲ್ಚರ್ ಮೂಲಕ ದೃಢಪಟ್ಟ ಶ್ವಾಸಕೋಶದ ಪ್ರಕರಣಗಳಲ್ಲಿ ಸ್ಮಿಯರ್ ಸಂವೇದನಾಶೀಲತೆಯನ್ನು ಸುಮಾರು 45 ರಿಂದ 80 percent ಎಂದು ಅಂದಾಜಿಸಿವೆ. ಆದ್ದರಿಂದ ನಕಾರಾತ್ಮಕ ಸ್ಮಿಯರ್ ಎಂದಿಗೂ ಕ್ಷಯರೋಗವನ್ನು ತಳ್ಳಿಹಾಕುವುದಿಲ್ಲ. ಪ್ರಸ್ತುತ CDC ಮಾರ್ಗದರ್ಶನವು ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಸ್ಮಿಯರ್ ಜೊತೆಗೆ ಕಲ್ಚರ್ ಅನ್ನು ಉಳಿಸಿಕೊಂಡಿದೆ. ಶ್ವಾಸಕೋಶದ ಕ್ಷಯರೋಗವನ್ನು ಪರಿಗಣಿಸುತ್ತಿರುವಾಗ ಮತ್ತು ಫಲಿತಾಂಶವು ನಿರ್ವಹಣೆಯನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸುವಂತಿದ್ದರೆ, ಕನಿಷ್ಠ ಒಂದು ಶ್ವಾಸನಾಳದ ಮಾದರಿಯ ಮೇಲೆ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲ ವರ್ಧನೆ ಪರೀಕ್ಷೆ ನಡೆಸಲು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡುತ್ತದೆ.

ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಕೆಲಸಕ್ಕೆ ಅಧಿಕೃತ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳೇ ಆಧಾರ

ಈ ಲೇಖನ ಸೇರಿದಂತೆ ಬೋಧನಾ ವಿವರಣೆಗಳು ವೈದ್ಯಕೀಯ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದ ಕೆಲಸಕ್ಕೆ ಅಧಿಕೃತ ಅನುಮತಿ ನೀಡುವುದಿಲ್ಲ. ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದಲ್ಲಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುವಾಗ, ಪ್ರಸ್ತುತ CDC, APHL ಅಥವಾ CLSI ದಾಖಲೆಗಳಿಗೆ ಹೊಂದಿಕೆಯಾಗುವ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದ ಮಾನ್ಯೀಕರಿಸಿದ ಪ್ರಮಾಣಿತ ಕಾರ್ಯಾಚರಣಾ ವಿಧಾನವನ್ನು ಅನುಸರಿಸಿ. CDC ಯ Stacks ಸಂಗ್ರಹದಲ್ಲಿರುವ ಆಮ್ಲ-ಸ್ಥಿರ ರಂಜನಾ ಉಲ್ಲೇಖ ಇಂತಹ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳು ಕಾರಕಗಳು ಮತ್ತು ಫಲಿತಾಂಶ ಓದುವಿಕೆಯನ್ನು ಹೇಗೆ ನಿರ್ದಿಷ್ಟಪಡಿಸುತ್ತವೆ ಎಂಬುದನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ. ಕ್ಷಯರೋಗದ ಮಾದರಿಗಳೊಂದಿಗೆ ಕೆಲಸ ಮಾಡಲು ಜೈವಿಕ ಅಪಾಯ ನಿಯಂತ್ರಣ ಅಗತ್ಯ: ಸ್ಮಿಯರ್ ತಯಾರಿಸುವಾಗ ಏರೋಸಾಲ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಚಿಮ್ಮಾಟಗಳು ಉಂಟಾಗುವುದರಿಂದ ಅವನ್ನು ಜೈವಿಕ ಸುರಕ್ಷತಾ ಕ್ಯಾಬಿನೆಟ್‌ನಲ್ಲಿ ತಯಾರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಉಷ್ಣದಿಂದ ಸ್ಥಿರಗೊಳಿಸಿದ ಸ್ಮಿಯರ್‌ಗಳಲ್ಲಿಯೂ ಜೀವಂತ ಕ್ಷಯರೋಗ ಬ್ಯಾಸಿಲ್ಲೈ ಇರಬಹುದು ಮತ್ತು ಅವನ್ನು ಕಲುಷಿತವೆಂದೇ ಪರಿಗಣಿಸಿ ನಿರ್ವಹಿಸಬೇಕು ಎಂದು CDC ಪ್ರಯೋಗಾಲಯ ಸುರಕ್ಷತಾ ಮಾರ್ಗದರ್ಶನ ತಿಳಿಸುತ್ತದೆ. M. leprae ಗಾಗಿ ಪರೀಕ್ಷಿಸಿದ ಕಾರ್ಬಾಲ್-ಫುಕ್ಸಿನ್ ಮತ್ತು ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಸ್ಮಿಯರ್ ಕುರಿತ CDC ಸಾರ್ವಜನಿಕ ಆರೋಗ್ಯ ಚಿತ್ರ ಗ್ರಂಥಾಲಯದ ದಾಖಲೆ ಈ ವಿಧಾನವು ಕ್ಷಯರೋಗದಾಚೆಗೂ ಬಳಕೆಯಾಗುವುದನ್ನು ನೆನಪಿಸುತ್ತದೆ: ಆಮ್ಲ-ಸ್ಥಿರ ಜೀವಿಗಳನ್ನು ಹುಡುಕುವ ಎಲ್ಲೆಡೆಯೂ ನೀಲಿ ಹಿನ್ನೆಲೆಯ ಮೇಲಿನ ಅದೇ ಕೆಂಪು ವೈದೃಶ್ಯ ನೆರವಾಗುತ್ತದೆ. ಎಚ್ಚರಿಕೆಯಿಂದ ನಿರ್ಧರಿಸಿದ ನಕಾರಾತ್ಮಕ ಓದು ಕೂಡ ದಾಖಲಿಸಬೇಕಾದ ಫಲಿತಾಂಶವೇ ಆಗಿದೆ.

ಪೂರ್ಣಗೊಂಡ ಸ್ಲೈಡ್ ಅನ್ನು ಓದುವುದು

ತಪಾಸಣೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಪ್ರತಿರಂಜಕದ ಉಪಯೋಗ ಸ್ಪಷ್ಟವಾಗುತ್ತದೆ. ಕಡಿಮೆ ವರ್ಧನೆಯಲ್ಲಿ ಸ್ಲೈಡ್ ಪರಿಶೀಲಿಸುವ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕ ತಜ್ಞರು ಮೊದಲು ನೀಲಿ ಹಿನ್ನೆಲೆಯನ್ನು ಬಳಸಿ ಸ್ಮಿಯರ್‌ನ ಗುಣಮಟ್ಟವನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸುತ್ತಾರೆ: ಸಮವಾದ ಕೋಶ ವಿತರಣೆ, ಫೋಕಸ್ ಮಾಡಲು ಅಖಂಡ ಆತಿಥೇಯ ಕೋಶಗಳು ಮತ್ತು ದಟ್ಟ ಅವಕ್ಷೇಪ ಇಲ್ಲದಿರುವಿಕೆ. ನಂತರ ಸಂಭವನೀಯ ಕೆಂಪು ಜೀವಿಗಳು ಗಮನ ಸೆಳೆಯುತ್ತವೆ; ಇದಕ್ಕೆ ಕಾರಣ ಸ್ಲೈಡ್‌ನಲ್ಲಿ ಬೇರೆ ಯಾವುದೂ ಕೆಂಪಾಗಿಲ್ಲ. ತೈಲ-ನಿಮಜ್ಜನ ವೀಕ್ಷಣೆಯಲ್ಲಿ ದೃಢೀಕರಣ ನಡೆಯುತ್ತದೆ. ಅಲ್ಲಿ ನಿಜವಾದ ಬ್ಯಾಸಿಲ್ಲೈ, ಏಕರೂಪದ ರಂಜಕ ಅವಶೇಷಗಳ ಬದಲು, ನಿರೀಕ್ಷಿತ ತೆಳ್ಳಗಿನ, ಕೆಲವೊಮ್ಮೆ ಸ್ವಲ್ಪ ಬಾಗಿದ ಅಥವಾ ಮಣಿಸರದಂಥ ದಂಡಾಕಾರದ ರೂಪಗಳನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತವೆ.

ಹಿನ್ನೆಲೆ ರಂಜನೆಯು ವರದಿಯ ಪದಪ್ರಯೋಗವನ್ನೂ ನಿರ್ಧರಿಸುತ್ತದೆ. ಕೆಂಪು ಬ್ಯಾಸಿಲ್ಲೈ ಇರುವ ಸ್ಲೈಡ್ ಅನ್ನು ಆಮ್ಲ-ಸ್ಥಿರ ಬ್ಯಾಸಿಲ್ಲೈ ಕಂಡುಬಂದಿವೆ ಎಂದು ವರದಿ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ; ಅನೇಕ ಸಂದರ್ಭಗಳಲ್ಲಿ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದ ಮಾಪಕದ ಪ್ರಕಾರ ಅರೆ-ಪ್ರಮಾಣಾತ್ಮಕ ದರ್ಜೆಯನ್ನೂ ನೀಡಲಾಗುತ್ತದೆ. ಕೆಂಪು ಜೀವಿಗಳಿಲ್ಲದ ಸ್ಲೈಡ್ ಅನ್ನು ಆಮ್ಲ-ಸ್ಥಿರ ಬ್ಯಾಸಿಲ್ಲೈ ಕಂಡುಬಂದಿಲ್ಲ ಎಂದು ವರದಿ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ; ಎಂದಿಗೂ ಕ್ಷಯರೋಗಕ್ಕೆ ನಕಾರಾತ್ಮಕ ಎಂದು ಅಲ್ಲ. ಈ ವ್ಯತ್ಯಾಸ ಮುಖ್ಯ: ನೀಲಿ ಕ್ಷೇತ್ರವು ರಂಜನೆ ಕೆಲಸ ಮಾಡಿದೆ, ಕೋಶಗಳು ಪ್ರತಿರಂಜಕವನ್ನು ಹೀರಿಕೊಂಡಿವೆ ಮತ್ತು ದೃಶ್ಯ ವ್ಯವಸ್ಥೆ ಸಮರ್ಪಕವಾಗಿತ್ತು ಎಂಬುದನ್ನು ಸಾಬೀತುಪಡಿಸುತ್ತದೆ. ಆದರೆ ಪತ್ತೆ ಮಿತಿಗಿಂತ ಕಡಿಮೆ ಪ್ರಮಾಣದಲ್ಲಿರುವ ಜೀವಿಗಳ ಬಗ್ಗೆ ಅದು ಏನನ್ನೂ ಹೇಳುವುದಿಲ್ಲ. ಕೆಂಪು ಜೀವಿಗಳಿಲ್ಲದ ನೀಲಿ ಕ್ಷೇತ್ರವು ಸ್ಲೈಡ್ ಕುರಿತ ಮಾನ್ಯ ಫಲಿತಾಂಶವೇ ಹೊರತು ರೋಗಿಯ ಕುರಿತ ತೀರ್ಪಲ್ಲ.

ಕೆಲಸದ ವಿಭಜನೆಯನ್ನು ನೆನಪಿಟ್ಟುಕೊಂಡರೆ ವರದಿಯನ್ನು ಸರಿಯಾಗಿ ಬರೆಯುವುದು ಸುಲಭ. ಕಾರ್ಬಾಲ್ ಫುಕ್ಸಿನ್ ಸಂಭವನೀಯ ಜೀವಿಗಳನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚುತ್ತದೆ. ಆಮ್ಲ-ಆಲ್ಕೋಹಾಲ್ ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸುತ್ತದೆ. ಮಿಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಕೇವಲ ಉತ್ತರವನ್ನು ಓದಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗಿಸುತ್ತದೆ: ಕೆಂಪು ಜೀವಿಗಳು ಆಮ್ಲದ ಎದುರಲ್ಲೂ ರಂಜಕವನ್ನು ಉಳಿಸಿಕೊಂಡವು, ನೀಲಿ ಕೋಶಗಳು ಅದನ್ನು ಕಳೆದುಕೊಂಡವು. ಉಳಿದ ಎಲ್ಲವೂ—ಪ್ರಭೇದ, ಜೀವಿಗಳ ಪ್ರಮಾಣ ಮತ್ತು ವೈದ್ಯಕೀಯ ಅರ್ಥ—ಸ್ಲೈಡ್‌ನಾಚೆಗಿನ ಕೆಲಸದಿಂದ ದೊರೆಯುತ್ತದೆ.