ಲೇಖನ
ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಮತ್ತು ನೈಟ್ರಿಕ್ ಆಕ್ಸೈಡ್: NOS, cGMP ಮತ್ತು ರಕ್ತನಾಳಗಳ ಸಂಕೇತ ಪ್ರಸರಣ
ಪ್ರಶ್ನೆ ಸರಳವಾಗಿ ಕೇಳಿಸುತ್ತದೆ: ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ನೈಟ್ರಿಕ್ ಆಕ್ಸೈಡ್ ಅನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆಯೇ? ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದಲ್ಲಿ ಇದರ ಉತ್ತರ ನಾಲ್ಕು ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಪ್ರಶ್ನೆಗಳಾಗಿ ವಿಭಜನೆಯಾಗುತ್ತದೆ; ಪ್ರತಿಯೊಂದಕ್ಕೂ ವಿಭಿನ್ನ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಪರೀಕ್ಷೆಯಿದೆ. ಇವುಗಳನ್ನು ಗೊಂದಲಗೊಳಿಸುವುದೇ ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಮತ್ತು ನೈಟ್ರಿಕ್ ಆಕ್ಸೈಡ್ ಕುರಿತ ಬರಹಗಳು ಆತ್ಮವಿಶ್ವಾಸದಿಂದ ಕೂಡಿದ್ದರೂ ಅಸ್ಪಷ್ಟವಾಗಿ ಕಾಣಲು ಮುಖ್ಯ ಕಾರಣ.
ನೈಟ್ರಿಕ್ ಆಕ್ಸೈಡ್ ಸಂಕೇತವನ್ನು ನಾಲ್ಕು ಕೊಂಡಿಗಳ ಸರಪಳಿಯಂತೆ ಪರಿಗಣಿಸಿ. ನೈಟ್ರಿಕ್ ಆಕ್ಸೈಡ್ ಸಿಂಥೇಸ್ ತಯಾರಿಸಲು ಒಂದು ಜೀನ್‌ನ ಪ್ರತಿಲೇಖನ ನಡೆಯುತ್ತದೆ. ಈ ಕಿಣ್ವ ಅರ್ಜಿನಿನ್ ಅನ್ನು ನೈಟ್ರಿಕ್ ಆಕ್ಸೈಡ್ ಆಗಿ ಪರಿವರ್ತಿಸುತ್ತದೆ. ಈ ಅನಿಲ ಬೇರೆ ಯಾವುದೊಂದಿಗಾದರೂ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಿಸುವ ಮೊದಲು ತನ್ನ ಗುರಿಗೆ ವಿಸರಣಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ. ಕರಗುವ ಗ್ವಾನಿಲೇಟ್ ಸೈಕ್ಲೇಸ್ ಅದನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಿ ಸೈಕ್ಲಿಕ್ GMP ಅನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುತ್ತದೆ. ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಕೊಂಡಿಯಲ್ಲೂ ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವ ಕುರಿತು ಪ್ರಕಟಿತ ಅಧ್ಯಯನಗಳಿವೆ; ಆದರೆ ಈ ಸಾಕ್ಷ್ಯಗಳು ವಿಭಿನ್ನ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಸಿದ್ಧತೆಗಳು, ವಿಭಿನ್ನ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳು ಮತ್ತು ವಿಭಿನ್ನ ಐಸೋಫಾರ್ಮ್‌ಗಳಿಂದ ಬಂದಿವೆ. ಒಂದು ಕೊಂಡಿಯಲ್ಲಿ ಕಂಡ ಫಲಿತಾಂಶವು ಮತ್ತೊಂದು ಕೊಂಡಿಯಲ್ಲಿ ಕ್ರಿಯೆ ನಡೆಯುವುದನ್ನು ಸಾಬೀತುಪಡಿಸುವುದಿಲ್ಲ.
ರೂಢಿಗತ ಸರಪಳಿಯ ಸರಳ ವಿವರಣೆ
ರಕ್ತನಾಳದ ಗೋಡೆಯಲ್ಲಿ ಸಾಮಾನ್ಯ ಅನುಕ್ರಮ ಹೀಗೆ ನಡೆಯುತ್ತದೆ. ಒಂದು ಪ್ರಚೋದನೆ ಎಂಡೋಥೀಲಿಯಲ್ ಕೋಶದ ಮೇಲೆ作用 ಬೀರುತ್ತದೆ. eNOS ಅಥವಾ NOS3 ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುವ ಎಂಡೋಥೀಲಿಯಲ್ ನೈಟ್ರಿಕ್ ಆಕ್ಸೈಡ್ ಸಿಂಥೇಸ್ ಅಲ್ಪ ಪ್ರಮಾಣದ ನೈಟ್ರಿಕ್ ಆಕ್ಸೈಡ್ ಅನ್ನು ಕ್ಷಣಿಕವಾಗಿ ಉತ್ಪಾದಿಸುತ್ತದೆ. ಈ ಅನಿಲ ಪಕ್ಕದ ನಯ ಸ್ನಾಯು ಕೋಶಕ್ಕೆ ವಿಸರಣಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ, ಕರಗುವ ಗ್ವಾನಿಲೇಟ್ ಸೈಕ್ಲೇಸ್‌ನ ಅಪಚಯಿತ ಕಬ್ಬಿಣದ ಹೀಮ್‌ಗೆ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು GTP ಸೈಕ್ಲಿಕ್ GMP ಆಗಿ ಪರಿವರ್ತನೆಗೊಳ್ಳುವುದನ್ನು ವೇಗಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ. ಸೈಕ್ಲಿಕ್ GMP ಪ್ರೋಟೀನ್ ಕೈನೇಸ್ G ಅನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ, ಕ್ಯಾಲ್ಸಿಯಂ ನಿರ್ವಹಣೆಯಲ್ಲಿ ಬದಲಾವಣೆಯಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಸ್ನಾಯು ಸಡಿಲಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ.
ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾಗಿ ಪರಿಗಣಿಸಬೇಕಾದ ಎರಡನೇ ಸರಪಳಿಯೂ ಇದೆ. ಸೋಂಕಿನ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಅಥವಾ ಸೈಟೋಕೈನ್‌ಗಳಿಗೆ ಒಡ್ಡಿಕೊಂಡಾಗ, ಕೋಶಗಳು ಪ್ರಚೋದನೀಯ ನೈಟ್ರಿಕ್ ಆಕ್ಸೈಡ್ ಸಿಂಥೇಸ್ ಅಥವಾ iNOS ಎಂಬ ಬೇರೆ ಕಿಣ್ವದ ಪ್ರತಿಲೇಖನ ಮಾಡುತ್ತವೆ; ಇದನ್ನು NOS2 ಎಂದೂ ಕರೆಯುತ್ತಾರೆ. ಇದು eNOS ಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರಮಾಣದಲ್ಲಿ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚು ಕಾಲ ನೈಟ್ರಿಕ್ ಆಕ್ಸೈಡ್ ಹರಿವನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುತ್ತದೆ. ಮೂರನೇ ಐಸೋಫಾರ್ಮ್ ಆದ ನರಕೋಶೀಯ NOS ಅಥವಾ nNOS ಇನ್ನೊಂದು ಸಂದರ್ಭಕ್ಕೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ. ಸಂಶೋಧನಾ ಲೇಖನವೊಂದು ಐಸೋಫಾರ್ಮ್ ಅನ್ನು ಸೂಚಿಸದೆ ನೈಟ್ರಿಕ್ ಆಕ್ಸೈಡ್ ಸಿಂಥೇಸ್ ಎಂದಾಗ, ತಡೆದು ಯಾವ ರೂಪವನ್ನು ಅಳೆಯಲಾಗಿದೆ ಎಂದು ಪರಿಶೀಲಿಸಿ. ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್‌ಗಳನ್ನು ಹೇಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸುತ್ತದೆ ಎಂಬ ಅವಲೋಕನವು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ರೆಡಾಕ್ಸ್ ಗುರಿಗಳಿಗೂ ಇದೇ ಅಂಶವನ್ನು ಒತ್ತಿಹೇಳುತ್ತದೆ: ಈ ವರ್ಗಾವಣೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆ ತನ್ನಷ್ಟಕ್ಕೆ ತಾನೇ ಏನನ್ನೂ ಮಾಡುವುದಿಲ್ಲ; ಎರಡೂ ತುದಿಗಳಲ್ಲಿರುವ ಪಾಲುದಾರಗಳು ಫಲಿತಾಂಶವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸುತ್ತವೆ.
ಅಳೆಯಲಾದ ಸೈಕ್ಲಿಕ್ GMP ಕೂಡ ಸಮಗ್ರ ಪರಿಣಾಮದ ಸೂಚಕವೇ ಹೊರತು ನೇರ ಕಿಣ್ವ ಪರೀಕ್ಷೆಯಲ್ಲ. ಅದರ ಮಟ್ಟವು ಸೈಕ್ಲೇಸ್‌ನಿಂದ ನಡೆಯುವ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯಿಂದ ಫಾಸ್ಫೋಡೈಎಸ್ಟರೇಸ್‌ಗಳು ಮಾಡುವ ವಿಘಟನೆಯನ್ನು ಕಳೆದಾಗ ಉಳಿಯುವ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಪ್ರತಿಬಿಂಬಿಸುತ್ತದೆ; ರಕ್ತನಾಳದ ನಯ ಸ್ನಾಯುವಿನಲ್ಲಿ ವಿಶೇಷವಾಗಿ PDE5 ಈ ಪಾತ್ರ ವಹಿಸುತ್ತದೆ. ಆದ್ದರಿಂದ ಸೈಕ್ಲಿಕ್ GMP ಇಳಿಕೆ ಎಂದರೆ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚುವ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗೆ ಕಡಿಮೆ ಸಂಕೇತ ತಲುಪಿದೆ ಎಂದರ್ಥ. ಯಾವ ಕೊಂಡಿ ವಿಫಲವಾಯಿತು ಎಂಬುದನ್ನು ಅದು ತನ್ನಷ್ಟಕ್ಕೆ ತಾನೇ ಸೂಚಿಸುವುದಿಲ್ಲ.
ಕೊಂಡಿ 1: ಕಡಿಮೆ iNOS ಕಿಣ್ವ ಉತ್ಪಾದನೆಯಾಗುತ್ತದೆ
ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾದ ಲಿಪೋಪಾಲಿಸ್ಯಾಕರೈಡ್, ಇಂಟರ್‌ಫೆರಾನ್ ಗಾಮಾ ಅಥವಾ ಇವೆರಡರಿಂದಲೂ ಪ್ರಚೋದಿಸಿದ ಇಲಿಗಳ ಮ್ಯಾಕ್ರೋಫೇಜ್‌ಗಳಲ್ಲಿ, ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ನಿರೀಕ್ಷಿತ iNOS ಪ್ರೋಟೀನ್ ಹೆಚ್ಚಳವನ್ನು ತಡೆದು, ಮ್ಯಾಕ್ರೋಫೇಜ್ ಪ್ರತಿಲೇಖನ ಪ್ರಯೋಗಗಳಲ್ಲಿ iNOS ಸಂದೇಶವಾಹಕ RNA ಅನ್ನು ತೀವ್ರವಾಗಿ ಕುಗ್ಗಿಸಿತು. ಯಾವುದು ಬದಲಾಗಲಿಲ್ಲ ಎಂಬುದೇ ಇಲ್ಲಿ ಮಾಹಿತಿಪೂರ್ಣ ಅಂಶ. ಪ್ರತಿಬಂಧಕ I ಕಪ್ಪಾ B ಆಲ್ಫಾದ ವಿಘಟನೆ, NF ಕಪ್ಪಾ B ಮತ್ತು STAT1 ಗಳ ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೀಕರಣ ಹಾಗೂ ಆ ಘಟಕಗಳು ಕೋಶಕೇಂದ್ರಕ್ಕೆ ಚಲಿಸುವಿಕೆ ಬಹುಮಟ್ಟಿಗೆ ಯಥಾಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲೇ ಉಳಿದವು. ಕಡಿಮೆಯಾದದ್ದು DNA ಗೆ ಅವುಗಳ ಬಂಧನ; iNOS ಪ್ರೊಮೋಟರ್‌ನಲ್ಲಿ ಅವುಗಳ ನೆಲೆಸುವಿಕೆ ಕಡಿಮೆಯಾದುದನ್ನು ತೋರಿಸಿದ ಕ್ರೊಮಾಟಿನ್ ಇಮ್ಯುನೊಪ್ರೆಸಿಪಿಟೇಶನ್ ಇದನ್ನು ದೃಢಪಡಿಸಿತು.
ಇದು ಕಿಣ್ವದ ಪ್ರಮಾಣ ನಿರ್ಧಾರವಾಗುವ ಮೊದಲು ನಡೆಯುವ ಜೀನ್ ನಿಯಂತ್ರಣದ ಪರಿಣಾಮವೇ ಹೊರತು ಈಗಾಗಲೇ ಇರುವ ಕಿಣ್ವದ ತಕ್ಷಣದ ತಡೆಯಲ್ಲ. ಇದು ಉರಿಯೂತದ ಸಂಕೇತ ಪ್ರಸರಣಕ್ಕೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ; ಇಲ್ಲಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಕಾಣಿಸಿಕೊಳ್ಳುವ ಮೊದಲು ಪ್ರತಿಲೇಖನ ಘಟಕಗಳು ಪ್ರೊಮೋಟರ್‌ಗೆ ಬಂಧಿಸಬೇಕು. ವಿಶ್ರಾಂತ ಸ್ಥಿತಿಯ ರಕ್ತನಾಳದಲ್ಲಿನ ಮೂಲಭೂತ eNOS ಕುರಿತು ಇದು ನೇರವಾಗಿ ಏನನ್ನೂ ಹೇಳುವುದಿಲ್ಲ; ಇದನ್ನು ಅದೇ ಮಿತಿಯೊಳಗೆ ವಿವರಿಸಬೇಕು.
ಕೊಂಡಿ 2: ಈಗಾಗಲೇ ಇರುವ NOS ಕಿಣ್ವ ನಿಧಾನವಾಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ
ಇಲಿಗಳ ಮೇಲಿನ ಒಂದು ಅಧ್ಯಯನ ಬೇರೆ ಹಂತವನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಿತು. ಪ್ರಜ್ಞೆಯಲ್ಲಿದ್ದ ಗಂಡು ಇಲಿಗಳಿಗೆ ಲಿಪೋಪಾಲಿಸ್ಯಾಕರೈಡ್ ಅನ್ನು ಶಿರೆಯ ಮೂಲಕ ನೀಡಲಾಯಿತು. ಮೂರು ಗಂಟೆಗಳ ನಂತರ ಸಲೈನ್ ಅಥವಾ 3 mg per kg ಪ್ರಮಾಣದ ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಅನ್ನು ಶಿರೆಯ ಮೂಲಕ ನೀಡಲಾಯಿತು. ಹೈಪೋಥಾಲಮಸ್‌ನ NOS ಚಟುವಟಿಕೆಯ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, ಗುರುತು ಹಾಕಲಾದ ಅರ್ಜಿನಿನ್ ಸಿಟ್ರುಲಿನ್ ಆಗಿ ಪರಿವರ್ತನೆಗೊಳ್ಳುವುದರ ಮೂಲಕ ಹೈಪೋಥಾಲಮಸ್‌ನ ಮಧ್ಯದ ತಳಭಾಗದಲ್ಲಿನ ನೈಟ್ರಿಕ್ ಆಕ್ಸೈಡ್ ಸಿಂಥೇಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಅಳೆಯಲಾಯಿತು. ಒತ್ತಡ ಮತ್ತು ಸಲೈನ್ ಮಾತ್ರವೇ ಕೆಲವು ಕ್ಯಾಲ್ಸಿಯಂ-ಸ್ವತಂತ್ರ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರಚೋದಿಸಿದವು; ಲಿಪೋಪಾಲಿಸ್ಯಾಕರೈಡ್ ಅದನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಣ ಮಟ್ಟದ ಸುಮಾರು ಹತ್ತು ಪಟ್ಟು ಹೆಚ್ಚಿಸಿತು. ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಪ್ರಚೋದಿತ ಎರಡೂ ಘಟಕಗಳನ್ನು ನಿವಾರಿಸಿತು. ಆ ಪ್ರಮಾಣದಲ್ಲಿ ಮತ್ತು ಆ ಸಮಯಬಿಂದುವಿನಲ್ಲಿ, ಆ ಅಂಗಾಂಶದ ಕ್ಯಾಲ್ಸಿಯಂ-ಅವಲಂಬಿತ ಮೂಲಭೂತ ಚಟುವಟಿಕೆ ಬದಲಾಗಲಿಲ್ಲ.
ಆ ಫಲಿತಾಂಶವನ್ನು ಬರೆದಿರುವಂತೆಯೇ ನಿಖರವಾಗಿ ಓದಿ: ಆ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಅಳೆಯಲಾದ iNOS ಮಾದರಿಯ ಚಟುವಟಿಕೆ ಕುಗ್ಗಿತು. ಇದು ಜೀನ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯ ಅಳತೆಯಲ್ಲ; eNOS ಅಥವಾ nNOS ಗಿಂತ iNOS ಮೇಲೆಯೇ ಯಾವಾಗಲೂ ಆಯ್ದ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ ಎಂಬುದಕ್ಕೂ ಸಾಕ್ಷ್ಯವಲ್ಲ. ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ ಕಿಣ್ವದ ಅಧ್ಯಯನಗಳು ಈ ಎಚ್ಚರಿಕೆಯನ್ನು ಇನ್ನಷ್ಟು ಬಲಪಡಿಸುತ್ತವೆ. ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ ನೈಟ್ರಿಕ್ ಆಕ್ಸೈಡ್ ಸಿಂಥೇಸ್‌ನ ನೇರ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳಲ್ಲಿ, ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ 30 micromolar ನಲ್ಲಿ ಸಿಟ್ರುಲಿನ್ ಉತ್ಪಾದನೆಯನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ತಡೆಯಿತು. ಅರ್ಧ ಪ್ರತಿಬಂಧ ಉಂಟುಮಾಡುವ ಸಾಂದ್ರತೆ ಸೂಪರ್‌ಆಕ್ಸೈಡ್ ಡಿಸ್ಮ್ಯೂಟೇಸ್ ಇಲ್ಲದೆ ಸುಮಾರು 5.3 micromolar ಮತ್ತು ಅದರೊಂದಿಗೆ 9.2 micromolar ಆಗಿತ್ತು ಎಂದು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ NOS ಮತ್ತು ಗ್ವಾನಿಲೇಟ್ ಸೈಕ್ಲೇಸ್ ಹೋಲಿಕೆಯಲ್ಲಿ ವರದಿಯಾಗಿದೆ. ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ nNOS ಕುರಿತ ಮತ್ತೊಂದು ಅಧ್ಯಯನವು ಕಿಣ್ವಕ್ಕೆ ಬಂಧಿತ ಹೀಮ್‌ನ ಆಕ್ಸೀಕರಣದ ಪಾತ್ರವನ್ನು ಸೂಚಿಸಿತು. ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಪಾಠವೆಂದರೆ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಿದ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳಲ್ಲಿ ನೇರ NOS ಪ್ರತಿಬಂಧ ನಿಜವಾಗಿಯೂ ನಡೆಯುತ್ತದೆ; ಆದರೆ ಹೈಪೋಥಾಲಮಸ್‌ನ ಫಲಿತಾಂಶವನ್ನು ವಿಸ್ತರಿಸಿ, ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಎಲ್ಲೆಡೆಯಲ್ಲೂ ಎಲ್ಲ ಮೂಲಭೂತ NOS ರೂಪಗಳನ್ನು ಬಾಧಿಸುವುದಿಲ್ಲ ಎಂಬ ಸಾಮಾನ್ಯ ಹೇಳಿಕೆ ನೀಡಲು ಸಾಧ್ಯವಿಲ್ಲ.
ಕೊಂಡಿ 3: ತಲುಪುವ ಮೊದಲೇ ನೈಟ್ರಿಕ್ ಆಕ್ಸೈಡ್ ನಷ್ಟವಾಗುತ್ತದೆ
ಕಿಣ್ವದ ತಡೆಯ ಹೊರತಾಗಿ ಬೇರೆ ಕಾರಣವೂ ಸೈಕ್ಲಿಕ್ GMP ಇಳಿಕೆಯನ್ನು ವಿವರಿಸಬಲ್ಲದು ಎಂಬುದಕ್ಕೆ ಅತ್ಯಂತ ಸ್ಪಷ್ಟ ನಿದರ್ಶನವು ಸಂವರ್ಧಿತ ಮೊಲದ ಶ್ವಾಸಕೋಶ ಧಮನಿಯ ನಯ ಸ್ನಾಯು ಕೋಶಗಳಿಂದ ಬಂದಿದೆ. ನೈಟ್ರಿಕ್ ಆಕ್ಸೈಡ್ ದಾತಗಳನ್ನು ನೇರವಾಗಿ ಸೇರಿಸುವ ಮೂಲಕ ಈ ಪ್ರಯೋಗ ವಿನ್ಯಾಸವು ಅಂತರ್ಜಾತ NOS ಅನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಬದಿಗೊತ್ತಿತು; ನಂತರ ರಕ್ತನಾಳದ ನಯ ಸ್ನಾಯುವಿನ ಸೂಪರ್‌ಆಕ್ಸೈಡ್ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಇನ್ನೂ ಸೈಕ್ಲಿಕ್ GMP ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಕುಗ್ಗಿಸುತ್ತದೆಯೇ ಎಂದು ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಯಿತು.
ಮೂರು ದಾತಗಳನ್ನು 1 ರಿಂದ 100 micromolar ವರೆಗೆ ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಯಿತು: S ನೈಟ್ರೊಸೊ L ಸಿಸ್ಟೀನ್, ಸೋಡಿಯಂ ನೈಟ್ರೊಪ್ರಸೈಡ್ ಮತ್ತು MPANO ಎಂಬ ಸ್ಥಿರ ಡೀಅಮಿನೀಕೃತ ಸದೃಶ ಸಂಯುಕ್ತ. ಇವೆಲ್ಲವೂ ಸೈಕ್ಲಿಕ್ GMP ಅನ್ನು ಸರಿಸುಮಾರು 1.5 ಪಟ್ಟಿನಿಂದ 12 ಪಟ್ಟು ಹೆಚ್ಚಿಸಿದವು. 10 micromolar ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಮೊದಲ ಎರಡರ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು 51 ರಿಂದ 100 ಪ್ರತಿಶತದಷ್ಟು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸಿತು; MPANO ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಬದಲಾಗಲಿಲ್ಲ. ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಕೇವಲ ಸೈಕ್ಲೇಸ್‌ನ ವೇಗವರ್ಧಕ ಸ್ಥಳವನ್ನು ತಡೆಯುತ್ತಿದ್ದರೆ, ದಾತಗಳ ನಡುವಿನ ಈ ಆಯ್ದ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ವಿವರಿಸುವುದು ಕಷ್ಟವಾಗುತ್ತಿತ್ತು; ಏಕೆಂದರೆ ಮೂರೂ ಅಂತಿಮವಾಗಿ ಅದೇ ಕಿಣ್ವದ ಮೇಲೆ作用 ಬೀರುತ್ತವೆ.
ನಂತರ ಮೂರು ನಿಯಂತ್ರಣ ಪ್ರಯೋಗಗಳು ಈ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಕ್ಕೆ ಸೂಪರ್‌ಆಕ್ಸೈಡ್ ಕಾರಣವೆಂದು ದೃಢಪಡಿಸಿದವು. ಮೊದಲನೆಯದಾಗಿ, ಕ್ಸಾಂಥೀನ್ ಮತ್ತು ಕ್ಸಾಂಥೀನ್ ಆಕ್ಸಿಡೇಸ್ ಬಳಸಿ ಕೋಶದ ಹೊರಗೆ ಸೂಪರ್‌ಆಕ್ಸೈಡ್ ಉತ್ಪಾದಿಸಿದಾಗ ಅದೇ ಮಾದರಿ ಮರುಕಳಿಸಿತು: CYSNO ಮತ್ತು ನೈಟ್ರೊಪ್ರಸೈಡ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳು ತಡೆಯಲ್ಪಟ್ಟವು, MPANO ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಬಾಧಿತವಾಗಲಿಲ್ಲ. ಎರಡನೆಯದಾಗಿ, ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ನಯ ಸ್ನಾಯು ಕೋಶಗಳಿಂದ ಪ್ರಮಾಣ ಮತ್ತು ಸಮಯವನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿದ ಸೂಪರ್‌ಆಕ್ಸೈಡ್ ಉತ್ಪಾದನೆಯನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡಿತು; ಇದನ್ನು ಸೈಟೋಕ್ರೋಮ್ c ಅಪಚಯದ ಮೂಲಕ ಅಳೆಯಲಾಯಿತು. ಮೂರನೆಯದಾಗಿ, ಸೂಪರ್‌ಆಕ್ಸೈಡ್ ಡಿಸ್ಮ್ಯೂಟೇಸ್ ಪ್ರತಿಬಂಧವನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ತಡೆದರೆ, ಕ್ಯಾಟಲೇಸ್ ಹಾಗೆ ಮಾಡಲಿಲ್ಲ. ಆ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಸಿದ್ಧತೆಯಲ್ಲಿ ಹೈಡ್ರೋಜನ್ ಪೆರಾಕ್ಸೈಡ್‌ಗಿಂತ ಸೂಪರ್‌ಆಕ್ಸೈಡ್ ತಕ್ಷಣದ ಕಾರಣವಾಗಿರುವ ರಾಸಾಯನಿಕ ಪ್ರಭೇದ ಎಂಬುದನ್ನು ಇದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.
ಈ ಪ್ರಯೋಗದ ಸಹಸಂವರ್ಧನಾ ರೂಪವನ್ನು ವಿವರಿಸುವುದು ಮುಖ್ಯ; ಏಕೆಂದರೆ ಅದು ಪರಿಣಾಮ ನಡೆಯುವ ಸ್ಥಳವನ್ನು ಗುರುತಿಸುತ್ತದೆ. ಕವರ್‌ಸ್ಲಿಪ್‌ಗಳ ಮೇಲಿದ್ದ ಎಂಡೋಥೀಲಿಯಲ್ ಕೋಶಗಳನ್ನು ನಯ ಸ್ನಾಯು ಕೋಶಗಳೊಂದಿಗೆ ಸ್ವಲ್ಪ ಸಮಯ ಸಹಸಂವರ್ಧಿಸಲಾಯಿತು. ಇದರಿಂದ ಮೂಲಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ಬಿಡುಗಡೆಯಾದ ಎಂಡೋಥೀಲಿಯಲ್ ಘಟಕವು ನಯ ಸ್ನಾಯುವಿನ ಸೈಕ್ಲಿಕ್ GMP ಅನ್ನು ಮೂರರಿಂದ ಎಂಟು ಪಟ್ಟು ಹೆಚ್ಚಿಸಿತು. ಎರಡರಲ್ಲಿ ಯಾವುದೇ ಕೋಶ ವಿಭಾಗಕ್ಕೆ ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಪೂರ್ವಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಿದಾಗ ಆ ಸಂಕೇತ ಕಡಿಮೆಯಾಯಿತು; ಸೂಪರ್‌ಆಕ್ಸೈಡ್ ಡಿಸ್ಮ್ಯೂಟೇಸ್ ಎಂಡೋಥೀಲಿಯಲ್ ಪೂರ್ವಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಭಾಗಶಃ ಹಿಮ್ಮೆಟ್ಟಿಸಿತು. ಬೇರೆ ರೀತಿಯಲ್ಲಿ ಹೇಳುವುದಾದರೆ, ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ನಯ ಸ್ನಾಯುವಿನ ಸಂಕೇತ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚುವ ಕೋಶದ ಒಳಗೆ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸಲೇಬೇಕಿಲ್ಲ. ಸಾಗುತ್ತಿರುವಾಗಲೇ ಸಂದೇಶವಾಹಕವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕುವ ಮೂಲಕ ಅದು ಸಂಕೇತವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಬಹುದು. ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಸಂಶೋಧನೆಯನ್ನು ಓದುವ ಮಾರ್ಗದರ್ಶಿ ಇದನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯ ನಿಯಮವಾಗಿ ಪರಿಗಣಿಸುತ್ತದೆ: ಆಣ್ವಿಕ ಗುರಿಯನ್ನು ಹೆಸರಿಸುವ ಮೊದಲು ಹಸ್ತಕ್ಷೇಪ ನಡೆದ ಕೋಶ ವಿಭಾಗವನ್ನು ಹೆಸರಿಸಿ.
ಇದನ್ನು NOS ಪ್ರತಿಬಂಧ ಎಂದು ಕರೆಯುವುದು ತಪ್ಪಾಗುತ್ತದೆ. ದಾತಗಳು ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸಲು ಯಾವುದೇ ಸಿಂಥೇಸ್ ಹಂತದ ಅಗತ್ಯವಿರಲಿಲ್ಲ; ಆದರೂ ಸಂಕೇತ ಇಳಿಯಿತು.
ಕೊಂಡಿ 4: ಪತ್ತೆಹಚ್ಚುವ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯೇ ಕಡಿಮೆಯಾಗುತ್ತದೆ
ಕರಗುವ ಗ್ವಾನಿಲೇಟ್ ಸೈಕ್ಲೇಸ್ ಮೇಲೆ ನೇರ ಪರಿಣಾಮಗಳು ಇವೆ; ಆದರೆ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳು ಮುಖ್ಯ. ಮೇಲೆ ಉಲ್ಲೇಖಿಸಿದ ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ ಕಿಣ್ವಗಳ ಹೋಲಿಕೆಯಲ್ಲಿ, ನೈಟ್ರಿಕ್ ಆಕ್ಸೈಡ್‌ನಿಂದ ಪ್ರಚೋದಿತ ಸೈಕ್ಲೇಸ್‌ಗೆ ಅರ್ಧ ಪ್ರತಿಬಂಧ ಉಂಟುಮಾಡಲು ಸುಮಾರು 60 micromolar ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಬೇಕಾಯಿತು. ಇದಕ್ಕೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ NOS ಗೆ ಅರ್ಧ ಪ್ರತಿಬಂಧ ಸುಮಾರು 5 ರಿಂದ 9 micromolar ನಲ್ಲಿ ಉಂಟಾಯಿತು; 1 millimolar ನಲ್ಲಿಯೂ ಗರಿಷ್ಠ ತಡೆ ಭಾಗಶಃ ಮಾತ್ರ ಇತ್ತು. ಇದು ಸರಿಸುಮಾರು ಆರರಿಂದ ಹನ್ನೊಂದು ಪಟ್ಟಿನ ಅಂತರ. ಆದ್ದರಿಂದ ಕಡಿಮೆ micromolar ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಕೋಶ ಪ್ರಯೋಗದಲ್ಲಿ ಸೈಕ್ಲಿಕ್ GMP ಇಳಿದಿದೆ ಎಂಬ ಅಳತೆಯೊಂದರ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ ಅದನ್ನು ಆಯ್ದ ಸೈಕ್ಲೇಸ್ ಪ್ರತಿಬಂಧ ಎಂದು ಕರೆಯಲು ಸಾಧ್ಯವಿಲ್ಲ.
ನಂತರದ ರೆಡಾಕ್ಸ್ ಅಧ್ಯಯನವು ಎರಡನೇ ಎಚ್ಚರಿಕೆಯನ್ನು ಸೇರಿಸಿತು: ಹೀಮ್‌ನ ಕಬ್ಬಿಣವು ಗಾಳಿಯಿಂದ ಸರಳವಾಗಿ ಆಕ್ಸೀಕರಣಗೊಳ್ಳುವ ಕ್ರಿಯೆಗಿಂತ ವಿಭಿನ್ನ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನದ ಮೂಲಕ ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ನೈಟ್ರಿಕ್ ಆಕ್ಸೈಡ್‌ನಿಂದ ಸಕ್ರಿಯಗೊಂಡ ಸೈಕ್ಲೇಸ್ ಅನ್ನು ನಿಷ್ಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಿತು. ಹೀಗಾಗಿ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚುವ ವ್ಯವಸ್ಥೆ ದುರ್ಬಲಗೊಳ್ಳಬಹುದು; ಆದರೆ ಅದರ ರಸಾಯನಶಾಸ್ತ್ರ ಇನ್ನೂ ನಿಶ್ಚಿತವಾಗಿಲ್ಲ. ಸಾಂದ್ರತೆಗಳ ನಡುವಿನ ಅಂತರವು ಕಡಿಮೆ micromolar ಒಡ್ಡುವಿಕೆಗಳಲ್ಲಿ ಮೊದಲು ಸೂಪರ್‌ಆಕ್ಸೈಡ್ ಮತ್ತು NOS ಪರಿಣಾಮಗಳ ಸಾಧ್ಯತೆಯನ್ನು ತಳ್ಳಿಹಾಕಬೇಕು ಎಂಬುದನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಫಾಸ್ಫೋಡೈಎಸ್ಟರೇಸ್ ನಿಯಂತ್ರಣವನ್ನೂ ಇಲ್ಲಿಯೇ ಪರಿಗಣಿಸಬೇಕು. ವಿಘಟನೆಯನ್ನು ಅಳೆಯದಿದ್ದರೆ ಅಥವಾ ತಡೆಯದಿದ್ದರೆ, ಸೈಕ್ಲಿಕ್ GMP ಸಂಗ್ರಹ ಕಡಿಮೆಯಾಗುವುದು ಕಡಿಮೆ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆ, ವೇಗವಾದ ವಿಘಟನೆ ಅಥವಾ ಇವೆರಡಕ್ಕೂ ಹೊಂದಿಕೆಯಾಗುತ್ತದೆ.
ಇದನ್ನು ರಕ್ತದೊತ್ತಡದ ಒಂದೇ ಹೇಳಿಕೆಗೆ ಸೀಮಿತಗೊಳಿಸಲು ಏಕೆ ಸಾಧ್ಯವಿಲ್ಲ
ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಕೊಂಡಿಯನ್ನೂ ವಿಭಿನ್ನ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಲ್ಲಿ ಸ್ಥಾಪಿಸಲಾಗಿದೆ. ಮ್ಯಾಕ್ರೋಫೇಜ್ ಪ್ರತಿಲೇಖನವು ಹೈಪೋಥಾಲಮಸ್‌ನ ಕಿಣ್ವ ಚಟುವಟಿಕೆಯಲ್ಲ. ಲಿಪೋಪಾಲಿಸ್ಯಾಕರೈಡ್ ನಂತರದ ಹೈಪೋಥಾಲಮಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯು ವಿಶ್ರಾಂತ ಸ್ಥಿತಿಯ ಎಂಡೋಥೀಲಿಯಲ್ ಟೋನ್ ಅಲ್ಲ. ಸಹಸಂವರ್ಧನೆಯಲ್ಲಿ ಮೂಲಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ಬಿಡುಗಡೆಯಾದ ಎಂಡೋಥೀಲಿಯಲ್ ಘಟಕವು ಅಗೊನಿಸ್ಟ್‌ನಿಂದ ಪ್ರಚೋದಿತ ರಕ್ತನಾಳ ವಿಸ್ತರಣೆಯಲ್ಲ. 10 micromolar ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂಗೆ ಒಡ್ಡಲಾದ ಸಂವರ್ಧಿತ ಶ್ವಾಸಕೋಶ ಧಮನಿಯ ಕೋಶಗಳು ಮಾನವನ ರಕ್ತಪರಿಚಲನಾ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಲ್ಲ. ಇವೆಲ್ಲವನ್ನೂ ಒಟ್ಟುಗೂಡಿಸಿ, ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ನೈಟ್ರಿಕ್ ಆಕ್ಸೈಡ್ ಅನ್ನು ತಡೆಯುವ ಮೂಲಕ ರಕ್ತದೊತ್ತಡ ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ ಎಂಬಂತಹ ಹೇಳಿಕೆ ನೀಡುವುದು, ನಿಯಂತ್ರಣ ಪ್ರಯೋಗಗಳು ಉಳಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು ವಿನ್ಯಾಸಗೊಂಡಿದ್ದ ನಿಖರವಾದ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನೇ ತಳ್ಳಿಹಾಕುತ್ತದೆ.
ಮೂರು ಪರಿಶೀಲನೆಗಳು ವಿವರಣೆಯನ್ನು ನಿಖರವಾಗಿರಿಸುತ್ತವೆ. ಮೊದಲನೆಯದಾಗಿ, ಐಸೋಫಾರ್ಮ್ ಅನ್ನು ಹೆಸರಿಸಿ: ವಿಶ್ರಾಂತ ಸ್ಥಿತಿಯ ರಕ್ತನಾಳದ ಟೋನ್‌ಗೆ eNOS, ಪ್ರಚೋದಿತ ಉರಿಯೂತದ ಹರಿವಿಗೆ iNOS, ನರಕೋಶೀಯ ಮತ್ತು ಕೆಲವು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ ಕಿಣ್ವಗಳ ಸಂದರ್ಭಗಳಿಗೆ nNOS. ಎರಡನೆಯದಾಗಿ, ನೈಟ್ರಿಕ್ ಆಕ್ಸೈಡ್ ಸಂಕೇತ ಹೇಗೆ ಒದಗಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿತು ಎಂಬುದನ್ನು ಹೆಸರಿಸಿ: ಅಂತರ್ಜಾತ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆ, ಮೂಲಸ್ಥಿತಿಯ ಎಂಡೋಥೀಲಿಯಲ್ ಬಿಡುಗಡೆ ಅಥವಾ CYSNO, ನೈಟ್ರೊಪ್ರಸೈಡ್ ಅಥವಾ MPANO ನಂತಹ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ದಾತ. ಏಕೆಂದರೆ ಸ್ಥಿರ ದಾತವು ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಪ್ರತಿರೋಧಿಸಿತು; ಅಸ್ಥಿರ ದಾತಗಳು ಹಾಗೆ ಮಾಡಲಿಲ್ಲ. ಮೂರನೆಯದಾಗಿ, ಸಾಂದ್ರತೆ ಮತ್ತು ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಹಿಮ್ಮೆಟ್ಟಿಸಿದ ನಿಯಂತ್ರಣವನ್ನು ಹೆಸರಿಸಿ: ಸೂಪರ್‌ಆಕ್ಸೈಡ್ ಡಿಸ್ಮ್ಯೂಟೇಸ್‌ನಿಂದ ಪರಿಣಾಮ ಹಿಮ್ಮೆಟ್ಟುವುದು ಸೂಪರ್‌ಆಕ್ಸೈಡ್‌ನ ಪಾತ್ರವನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ; ಕ್ಯಾಟಲೇಸ್ ವಿಫಲವಾಗುವುದು ಆ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಸಿದ್ಧತೆಯಲ್ಲಿ ಹೈಡ್ರೋಜನ್ ಪೆರಾಕ್ಸೈಡ್ ಕಾರಣ ಎಂಬುದಕ್ಕೆ ವಿರುದ್ಧವಾದ ಸಾಕ್ಷ್ಯ ನೀಡುತ್ತದೆ; ಕ್ಸಾಂಥೀನ್ ಆಕ್ಸಿಡೇಸ್‌ನಿಂದ ಅದೇ ಪರಿಣಾಮ ಮರುಕಳಿಸುವುದು ಅದು ಸಾಕಾಗುತ್ತದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ; ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ ಕಿಣ್ವ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳು ನೇರ ವೇಗವರ್ಧಕ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ಸಾಗುವಾಗ ಉಂಟಾಗುವ ನಷ್ಟಗಳಿಂದ ಬೇರ್ಪಡಿಸುತ್ತವೆ.
ಸಂಕ್ಷಿಪ್ತವಾಗಿ ಹೇಳುವುದಾದರೆ, ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಅನ್ನು ಆಯ್ದ ಸೈಕ್ಲೇಸ್ ತಡೆಕಾರಕಕ್ಕಿಂತ, ನೈಟ್ರಿಕ್ ಆಕ್ಸೈಡ್‌ನಿಂದ ಸೈಕ್ಲಿಕ್ GMP ವರೆಗೆ ನಡೆಯುವ ಸಂಕೇತ ಪ್ರಸರಣದ ಹಲವು ಸ್ಥಳಗಳಲ್ಲಿ ಬದಲಾವಣೆ ಉಂಟುಮಾಡುವ ವಸ್ತುವಾಗಿ ಪರಿಗಣಿಸುವುದು ಹೆಚ್ಚು ಸೂಕ್ತ. ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಸಿದ್ಧತೆ ಮತ್ತು ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿ, ಅದು iNOS ಪ್ರತಿಲೇಖನ ಘಟಕಗಳ ಬಂಧನವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಬಹುದು, NOS ಕಿಣ್ವಗಳನ್ನು ನೇರವಾಗಿ ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸಬಹುದು, ಸೂಪರ್‌ಆಕ್ಸೈಡ್ ಉತ್ಪಾದನೆಯ ಮೂಲಕ ನೈಟ್ರಿಕ್ ಆಕ್ಸೈಡ್ ಲಭ್ಯತೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಬಹುದು ಮತ್ತು ನೈಟ್ರಿಕ್ ಆಕ್ಸೈಡ್‌ನಿಂದ ಸಕ್ರಿಯಗೊಂಡ ಸೈಕ್ಲೇಸ್ ಅನ್ನು ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಬಹುದು. ರಕ್ತನಾಳಗಳ ಅಧ್ಯಯನಗಳಲ್ಲಿ ಸೈಕ್ಲಿಕ್ GMP ಸಂಕೇತ ಪ್ರಸರಣದ ಪಾತ್ರ ಮತ್ತು ಕೋಶ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳಲ್ಲಿ ಬಳಸುವ ನೈಟ್ರಿಕ್ ಆಕ್ಸೈಡ್ ದಾತಗಳ ಹೋಲಿಕೆ ಇವುಗಳಲ್ಲಿ ತಲಾ ಒಂದು ಶಾಖೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚು ವಿವರವಾಗಿ ಚರ್ಚಿಸುತ್ತವೆ. ರೆಡಾಕ್ಸ್ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ಕಿಣ್ವದ ಪರಿಣಾಮಗಳಿಂದ ಬೇರ್ಪಡಿಸಲು ಬಳಸುವ ವಿಧಾನಗಳು ಈ ಸಾಹಿತ್ಯದಲ್ಲಿ ಸೂಪರ್‌ಆಕ್ಸೈಡ್ ಡಿಸ್ಮ್ಯೂಟೇಸ್, ಕ್ಯಾಟಲೇಸ್ ಮತ್ತು ಸ್ಥಿರ ದಾತದ ನಿಯಂತ್ರಣ ಇಷ್ಟು ಬಾರಿ ಒಟ್ಟಿಗೆ ಕಾಣಿಸಿಕೊಳ್ಳುವುದೇಕೆ ಎಂಬುದನ್ನು ವಿವರಿಸುತ್ತದೆ.
ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ನಂತರ ಕಂಡುಬರುವ ಕಡಿಮೆ ಸೈಕ್ಲಿಕ್ GMP ಮೌಲ್ಯವು ಸರಪಳಿ ಮುರಿದಿದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಯಾವ ಕೊಂಡಿ ಮುರಿದಿದೆ ಎಂಬುದನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಣ ಪ್ರಯೋಗಗಳೇ ಹೇಳುತ್ತವೆ.