វិសាលគមស្រូបពន្លឺ និងមេគុណស្រូបពន្លឺម៉ូលរបស់មេទីឡែនប្លូ៖ ឯកសារយោងដែលមានបញ្ជាក់លក្ខខណ្ឌ

វិសាលគមរបស់មេទីឡែនប្លូមើលទៅសាមញ្ញ រហូតដល់អ្នកព្យាយាមយកតម្លៃមួយពីវាទៅប្រើឡើងវិញ។ មន្ទីរពិសោធន៍មួយរាយការណ៍មេគុណពន្លត់ពន្លឺម៉ូលនៅជិត 82,000។ មន្ទីរពិសោធន៍មួយទៀតរាយការណ៍ 67,000។ មន្ទីរពិសោធន៍ទីបីរាយការណ៍លើសពី 100,000។ តម្លៃទាំងបីអាចជាការពិពណ៌នាត្រឹមត្រូវអំពីការវាស់វែងរបស់មន្ទីរពិសោធន៍នីមួយៗ ប៉ុន្តែគ្មានតម្លៃណាមួយជាថេរសកលសម្រាប់សារធាតុពណ៌នេះទេ។

ភាពច្របូកច្របល់កើតឡើងពីការលាយបញ្ចូលគ្នានូវគោលគំនិតពីរដែលខុសគ្នា។ កម្រិតស្រូបពន្លឺ គឺជាលទ្ធផលវាស់វែងលើសូលុយស្យុងជាក់លាក់មួយ ក្នុងកោសិកាវាស់ជាក់លាក់មួយ។ មេគុណស្រូបពន្លឺម៉ូល ដែលជាញឹកញាប់សរសេរជា epsilon គឺជាប៉ារ៉ាម៉ែត្រនៅក្នុងម៉ូដែលនៃសូលុយស្យុងនោះ។ នៅពេលមេទីឡែនប្លូផ្លាស់ប្តូរស្ថានភាពនៃការភ្ជាប់គ្នា ម៉ូដែលក៏ផ្លាស់ប្តូរ ដូច្នេះប៉ារ៉ាម៉ែត្រក៏ផ្លាស់ប្តូរដែរ។ ទម្លាប់ដែលមានប្រយោជន៍គឺចាត់ទុកមេគុណនីមួយៗជាតម្លៃដែលមានបញ្ជាក់លក្ខខណ្ឌ៖ ប្រវែងរលក សារធាតុរំលាយ pH ឬសូលុយស្យុងប៊ូហ្វឺ សីតុណ្ហភាព ជួរកំហាប់ និងប្រវែងផ្លូវពន្លឺ ត្រូវភ្ជាប់ជាមួយតម្លៃនោះជានិច្ច។

បង់ស្រូបពន្លឺរបស់ម៉ូណូមែរក្នុងទឹកដែលមានកំហាប់រាវ

ក្នុងសូលុយស្យុងទឹកដែលមានកំហាប់រាវ បង់ស្រូបពន្លឺលេចធ្លោរបស់កាត្យុងមេទីឡែនប្លូស្ថិតនៅជិត 664 ដល់ 665 nm ហើយជាទូទៅត្រូវបានរាយការណ៍ក្នុងចន្លោះ 664 ដល់ 668 nm អាស្រ័យលើឧបករណ៍ និងជម្រើសនៃការក្រិតតម្រូវ។ បង់នោះជាជម្រើសត្រឹមត្រូវសម្រាប់ការកំណត់បរិមាណ នៅពេលសូលុយស្យុងមានកំហាប់រាវគ្រប់គ្រាន់ ដែលសារធាតុពណ៌ភាគច្រើនស្ថិតក្នុងទម្រង់ម៉ូណូមែរ។

តម្លៃបីពីឯកសារស្រាវជ្រាវបង្ហាញថា ហេតុអ្វីលក្ខខណ្ឌសំខាន់ជាងតម្លៃដែលត្រូវបានលើកឡើងជាចម្បង។ អ្នកស្រាវជ្រាវដីឥដ្ឋដែលរក្សាសំណាកទឹកឱ្យមានកំហាប់ក្រោមប្រហែល 7 micromolar ក្នុងកោសិកាវាស់ 1 cm បានរាយការណ៍ epsilon ប្រហែល 82,000 M-1 cm-1 នៅ 665 nm។ តម្លៃនោះមានឯកសារបញ្ជាក់ច្បាស់លាស់ខ្លាំង ជាជម្រាលក្រិតតម្រូវដែលបានពីការពិសោធន៍សម្រាប់សំណាកទឹកដែលមានកំហាប់រាវខ្លាំង។ ក្រោយមក ការក្រិតតម្រូវក្នុងការសិក្សាបឋមដោយប្រើទឹកដកអ៊ីយ៉ុង ដែលប្រើកំហាប់ 2.34 ដល់ 37.52 micromolar និងប្រវែងផ្លូវពន្លឺ 1 cm បានផ្តល់តម្លៃប្រហែល 67,100 M-1 cm-1 នៅ 665 nm សម្រាប់សារធាតុពណ៌សរុប។ លទ្ធផលទាបជាងនេះជាអ្វីដែលអាចរំពឹងទុក មិនមែនជាភាពផ្ទុយគ្នាទេ ព្រោះពាក់កណ្តាលខាងលើនៃជួរក្រិតតម្រូវនោះមានឌីមែរក្នុងបរិមាណគួរឱ្យកត់សម្គាល់រួចហើយ។ តម្លៃទីបី ប្រហែល 73,460 M-1 cm-1 នៅ 664 nm មកពីការសិក្សានៅ pH 6.86 និង 293 K ដែលបានបំបែកវិសាលគមដែលសង្កេតឃើញទៅជាផ្នែកម៉ូណូមែរ និងឌីមែរ ដូចដែលបានសង្ខេបក្នុង អត្ថបទពិនិត្យវាយតម្លៃថ្មីៗអំពីរូបវិទ្យាពន្លឺរបស់មេទីឡែនប្លូ។ តម្លៃនោះជាសមាសភាគម៉ូណូមែរដែលបានញែកចេញដោយការវិភាគ មិនមែនជាជម្រាលផ្ទាល់នៃកម្រិតស្រូបពន្លឺធៀបនឹងកំហាប់សារធាតុពណ៌សរុបទេ។

ចំណុចសំខាន់សម្រាប់ការអនុវត្ត៖ ជ្រើសរើសមេគុណដែលមានលក្ខខណ្ឌត្រូវនឹងសំណាករបស់អ្នក ឬធ្វើការក្រិតតម្រូវដោយខ្លួនឯង។ កុំយក 82,000 ទៅប្រើក្នុងការវិភាគសូលុយស្យុងប៊ូហ្វឺផូស្វាតដែលមានកំហាប់ 30 micromolar ហើយសន្មតថាទំនាក់ទំនងលីនេអ៊ែរនៅតែមានសុពលភាព។

ស្មានៃខ្សែកោងនៅប្រវែងរលកខ្លីគឺជាល្បាយ

នៅពេលកំហាប់កើនឡើង ស្មានៃខ្សែកោងនៅជិត 600 ដល់ 615 nm កើនឡើងធៀបនឹងកំពូល 664 nm។ ការសិក្សាសម័យថ្មីជាទូទៅកំណត់ការរួមចំណែករបស់ឌីមែរប្រភេទ H នៅជិត 605 ដល់ 610 nm។ ការវិភាគវិសាលគមរួមរបស់មេទីឡែនប្លូក្នុងទឹក បានញែកឃើញអតិបរមារបស់ឌីមែរនៅ 607 nm និងអតិបរមារបស់ក្រុមប្រមូលផ្តុំលំដាប់ខ្ពស់ជាងនៅ 600 nm ដោយមានសមាសភាគរេសូណង់របស់ម៉ូណូមែរនៅ 664 និង 650 nm។ អត្ថបទពេញអាចរកបានតាម កំណត់ត្រាបើកចំហសម្រាប់ PMID 33251415។

មិនគួរដាក់ស្លាកស្មានៃខ្សែកោងនោះថាជាកម្រិតស្រូបពន្លឺរបស់ឌីមែរសុទ្ធទេ។ រចនាសម្ព័ន្ធដែលកើតពីរំញ័រ និងអេឡិចត្រុងរបស់ម៉ូណូមែរក៏រួមចំណែកក្នុងតំបន់ដូចគ្នានេះដែរ ដូច្នេះកម្ពស់ដែលវាស់បានគឺជាលទ្ធផលនៃការត្រួតគ្នា។ ការផ្គូផ្គងម៉ូដែលរួមមួយបានរកឃើញថា ម៉ូដែលដែលមានម៉ូណូមែរបូកឌីមែរមិនអាចផ្គូផ្គងបានពេញជួរ 1.1 micromolar ដល់ 3.4 millimolar ទេ ខណៈការបន្ថែមតេត្រាមែរផ្តល់ការផ្គូផ្គងល្អបំផុត ហើយសញ្ញាតេត្រាមែរអាចរកឃើញរួចហើយនៅកំហាប់ក្រោម 34 micromolar។ កម្លាំងស្រូបពន្លឺរបស់សមាសភាគដែលបានពីការផ្គូផ្គងមានតម្លៃខ្ពស់៖ ប្រហែល 107,800 M-1 cm-1 នៅ 664 nm សម្រាប់សមាសភាគម៉ូណូមែរចម្បង ប្រហែល 101,400 សម្រាប់ឌីមែរនៅ 607 nm និងប្រហែល 138,500 សម្រាប់តេត្រាមែរនៅ 600 nm ក្នុងទឹកដកអ៊ីយ៉ុងដែលគ្មានប៊ូហ្វឺ ដោយមានសូដ្យូមក្លរួពី 0 ដល់ 0.15 M និងសីតុណ្ហភាពពី 282 ដល់ 333 K។ តម្លៃទាំងនេះជាផ្នែកដែលបានញែកដោយម៉ូដែល ដូច្នេះមិនត្រូវយកវាទៅជំនួសជម្រាល Beer Lambert ដែលបានពីការពិសោធន៍ទេ។

កម្រិតនៃការបង្កើតឌីមែរត្រូវបានកំណត់ជាបរិមាណដោយផ្ទាល់។ នៅ pH 6.86 និង 293 K ការសិក្សាមួយបានទទួលថេរនៃការបង្កើតឌីមែរនៅជិត 3,900 M-1។ ទំហំតម្លៃនោះពន្យល់ថា ហេតុអ្វីសូលុយស្យុងសម្រាប់ប្រើដែលមានកំហាប់ 5 micromolar មានឥរិយាបថជិតលីនេអ៊ែរ ខណៈសូលុយស្យុងមេដែលមានកំហាប់ 50 micromolar មិនមានឥរិយាបថបែបនោះ។ ការត្រួតពិនិត្យដែលមានប្រយោជន៍ក្នុងអំឡុងពេលអភិវឌ្ឍវិធីសាស្ត្រ គឺសមាមាត្រនៃកម្រិតស្រូបពន្លឺនៅជិត 610 nm ធៀបនឹងកម្រិតស្រូបពន្លឺនៅជិត 665 nm។ នៅពេលសមាមាត្រនោះកើនឡើងតាមកំហាប់ epsilon នៅ 664 nm លែងពិពណ៌នាអំពីប្រភេទម៉ូលេគុលតែមួយដែលមិនប្រែប្រួលទៀតហើយ។

ក្នុងចន្លោះកំហាប់ដែលគ្របដណ្តប់ដោយគូប្រភេទម៉ូលេគុលមួយដែលបម្លែងទៅវិញទៅមក វិសាលគមអាចមានចំណុចអ៊ីសូស្បេស្ទិករួមគ្នា ដែលតាមការពិសោធន៍ស្ថិតនៅជិត 625 nm ក្នុងស៊េរីសូលុយស្យុងទឹក។ ចំណុចថេរដែលច្បាស់លាស់ស្របនឹងវត្តមាននៃប្រភេទម៉ូលេគុលលេចធ្លោពីរ។ នៅពេលចំណុចនោះផ្លាស់ទី ឬបាត់ទៅនៅពេលកំហាប់កើនឡើង ចូរចាត់ទុកវាជាសញ្ញាព្រមានថាក្រុមប្រមូលផ្តុំលំដាប់ខ្ពស់ជាង ឬលំនឹងដែលកំពុងផ្លាស់ប្តូរបានចូលរួម មិនមែនជាកំហុសឧបករណ៍ទេ។

សារធាតុរំលាយ pH និងសីតុណ្ហភាពធ្វើឱ្យវិសាលគមផ្លាស់ទី

ទឹកជំរុញការភ្ជាប់គ្នា។ ការបន្ថែមឌីមេទីលស៊ុលហ្វុកស៊ីតកាត់បន្ថយការបង្កើតឌីមែរ ផ្លាស់ទីអតិបរមានៃការស្រូបពន្លឺ និងហ្វ្លុយអូរ៉េសង់ទៅប្រវែងរលកវែងជាង និងបង្កើនទិន្នផលកង់ទិចនៃហ្វ្លុយអូរ៉េសង់ប្រហែលបួនដង នេះបើយោងតាម ការសិក្សាសារធាតុរំលាយរបស់មេទីឡែនប្លូក្នុងល្បាយទឹក និង DMSO ដែលត្រូវបានដាក់ក្នុងលិបិក្រមជា PMID 30933781។ ការសិក្សានោះចាត់ទុកវិសាលគមក្នុងទឹកជាលំនឹងម៉ូណូមែរ–ឌីមែរ ដោយមានការស្រូបពន្លឺរបស់ម៉ូណូមែរនៅជិត 650 ដល់ 670 nm និងការស្រូបពន្លឺរបស់ឌីមែរនៅជិត 580 ដល់ 615 nm ហើយគណនាថេរនៃការបង្កើតឌីមែរពីវិសាលគមនៅ 293.15 K។

អាល់កុលផ្លាស់ប្តូរទាំងទីតាំង និងកម្លាំងស្រូបពន្លឺដែលសង្កេតបាន ប៉ុន្តែមិនបំបាត់ការប្រមូលផ្តុំគ្នាទេ។ ក្នុងការប្រៀបធៀបមួយនៃការសិក្សាបឋមនៅកំហាប់ 31.3 micromolar និងសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ ដែលបានរាយការណ៍ក្នុង ការសិក្សាសារធាតុរំលាយរបស់មេទីឡែនប្លូ អតិបរមានៅប្រវែងរលកវែងស្ថិតនៅ 665 nm ក្នុងទឹក ប៉ុន្តែនៅ 655 nm ក្នុងមេតាណុល ដោយមានតម្លៃដែលសង្កេតបានសម្រាប់សូលុយស្យុងសរុបនៅជិត 37,100 ក្នុងទឹក និង 60,800 ក្នុងមេតាណុល។ ការផ្ទៀងផ្ទាត់ដាច់ដោយឡែកក្នុងអេតាណុលគ្មានទឹកនៅ 298 K បានផ្តល់អតិបរមានៅ 655 nm ដោយមាន epsilon នៅជិត 68,000។

ការផ្លាស់ប្តូរ pH ធម្មតាធ្វើឱ្យវិសាលគមផ្លាស់ទីតិចជាងអ្វីដែលនីតិវិធីជាច្រើនសន្មត។ អត្ថបទពិនិត្យវាយតម្លៃដែលបានដកស្រង់ខាងលើរាយការណ៍ថា ចាប់ពីប្រហែល pH 2 ដល់ pH 12 អតិបរមានៅតែស្ថិតនៅជិត 665 nm ដោយមានការផ្លាស់ប្តូរកម្លាំងស្រូបពន្លឺតិចតួចប៉ុណ្ណោះរហូតដល់ pH 11។ ប្រភេទប៊ូហ្វឺ និងកម្លាំងអ៊ីយ៉ុងអាចធ្វើឱ្យលទ្ធផលផ្លាស់ប្តូរបានច្រើនដូច pH ដែលបានកំណត់ ដូច្នេះចូរកត់ត្រាប៊ូហ្វឺ និងអំបិលដែលប្រើជាក់ស្តែង មិនមែនត្រឹមតែតម្លៃដែលអានពីម៉ែត្រ pH ទេ។ អាស៊ីតខ្លាំង ឬអាល់កាឡាំងខ្លាំងជាករណីដាច់ដោយឡែក ព្រោះសារធាតុពណ៌អាចឆ្លងកាត់ការផ្លាស់ប្តូរគីមី ជំនួសឱ្យការភ្ជាប់គ្នាដែលអាចបញ្ច្រាសបាន។ សីតុណ្ហភាព និងអំបិលក៏ធ្វើឱ្យលំនឹងផ្លាស់ប្តូរដែរ ដែលជាមូលហេតុដែលការសិក្សាក្នុងទឹកឆ្នាំ 2020 បានផ្លាស់ប្តូរទាំងពីរនេះដោយចេតនា។

ការវាស់វែងដើម្បីឱ្យតម្លៃនៅតែមានសុពលភាព

ការងារកំណត់បរិមាណពឹងផ្អែកលើទំនាក់ទំនង Beer Lambert៖ កម្រិតស្រូបពន្លឺស្មើនឹង epsilon គុណនឹងកំហាប់ គុណនឹងប្រវែងផ្លូវពន្លឺ ព្រមទាំងភស្តុតាងថាចន្លោះលីនេអ៊ែរពិតជាមានសុពលភាពក្រោមលក្ខខណ្ឌរបស់អ្នក។

ប្រើកោសិកាវាស់ 1 cm សម្រាប់ការងារនៅកំហាប់ micromolar ទាប។ ជាមួយ epsilon នៅជិត 82,000 កំហាប់ 5 micromolar ផ្តល់កម្រិតស្រូបពន្លឺនៅជិត 0.41 ហើយ 10 micromolar ផ្តល់ប្រហែល 0.82។ សម្រាប់ការវាស់វែងដែលផ្តោតលើម៉ូណូមែរក្នុងទឹកធម្មតា ការរក្សាកំហាប់នៅជិត ឬក្រោមប្រហែល 5 ដល់ 7 micromolar មានសុវត្ថិភាពជាងការក្រិតតម្រូវចូលទៅក្នុងជួររាប់សិប micromolar។ សម្រាប់សូលុយស្យុងមេដែលមានកំហាប់ខ្ពស់ ចូរកាត់បន្ថយប្រវែងផ្លូវពន្លឺ ជំនួសឱ្យការទទួលយកកម្រិតស្រូបពន្លឺដែលខ្ពស់ជាង 1 ខ្លាំង។

ប្រើសំណាកទទេដែលមានម៉ាទ្រីសដូចគ្នាបេះបិទ៖ ទឹកដែលមានកម្រិតគុណភាពដូចគ្នា សមាមាត្រសារធាតុរំលាយរួមដូចគ្នា ប៊ូហ្វឺ និងអំបិលដូចគ្នា ប៉ុន្តែគ្មានសារធាតុពណ៌។ រៀបចំសូលុយស្យុងស្តង់ដារសម្រាប់ក្រិតតម្រូវក្នុងម៉ាទ្រីសដូចគ្នានោះ នៅសីតុណ្ហភាពដូចគ្នា។ ស្កេនជួរពន្លឺមើលឃើញទាំងមូលក្នុងអំឡុងពេលអភិវឌ្ឍវិធីសាស្ត្រ ដែលល្អបំផុតគឺប្រហែល 550 ដល់ 750 nm ជំនួសឱ្យការអានតែប្រវែងរលកមួយ។ តាមដានរូបរាង មិនមែនតែកម្ពស់ទេ។ ប្រសិនបើការពង្រាវជាស៊េរីធ្វើឱ្យរូបរាងដែលបានធ្វើន័រម៉ាល់ផ្លាស់ប្តូរ នោះប្រព័ន្ធនេះមានភាពពឹងផ្អែកលើកំហាប់តាមបែបគីមី។ អតិបរមាដែលថេរ និងសមាមាត្រ 610 ទៅ 665 nm ដែលថេរ ជាភស្តុតាងរឹងមាំជាងសម្រាប់ជួរដែលអាចទទួលយកបាន បើធៀបនឹងការមានតម្លៃ R ការេខ្ពស់តែមួយមុខ។

កត់ត្រាទម្រង់របស់សារធាតុប្រតិករ។ សារធាតុដែលលក់លើទីផ្សារអាចជាមេទីលទីយ៉ូនីញ៉ូមក្លរួគ្មានទឹក ឬជាទម្រង់អ៊ីដ្រាតដូចជាទ្រីអ៊ីដ្រាត ដូច្នេះម៉ាសម៉ូលដែលប្រើសម្រាប់គណនាសូលុយស្យុងមេត្រូវតែត្រូវនឹងសារធាតុក្នុងដបជាក់ស្តែង។ ជំហាននេះតែមួយអាចពន្យល់បានមួយផ្នែកនៃភាពខុសគ្នារវាងកំហាប់ម៉ូលដែលបានកំណត់នៅមន្ទីរពិសោធន៍នានា។ ភាពម៉ត់ចត់ដូចគ្នានេះក៏ត្រូវអនុវត្ត នៅពេលលទ្ធផលត្រូវបានប្រើក្នុងការគណនាវិភាគបរិមាណ នៅពេលវិសាលគមគាំទ្រការត្រួតពិនិត្យស្ថិរភាពរូបមន្ត និងនៅពេលទម្រង់សារធាតុមិនបរិសុទ្ធតម្រូវឱ្យពិនិត្យភាពបរិសុទ្ធ និងលក្ខណៈបច្ចេកទេស។

សេចក្តីសង្ខេបដែលមានបញ្ជាក់លក្ខខណ្ឌ

ប្រើតារាងនេះជាគំរូដំបូងសម្រាប់កំណត់ត្រាមន្ទីរពិសោធន៍ មិនមែនជាប្រភពនៃថេរដែលអាចប្រើជំនួសគ្នាបានទេ។

ដូច្នេះ ប្រវែងរលកស្រូបពន្លឺរបស់មេទីឡែនប្លូជាចម្លើយខ្លីមួយ ដែលត្រូវការកំណត់សម្គាល់វែង។ រាយការណ៍កំពូលដែលអ្នកបានវាស់ ក្នុងសូលុយស្យុងដែលអ្នកបានវាស់ នៅកំហាប់ដែលអ្នកបានវាស់។ ទម្លាប់នោះការពារមិនឱ្យតម្លៃមួយនៅជិត 664 nm សម្រាប់សូលុយស្យុងទឹកដែលមានកំហាប់រាវ ក្លាយទៅជាថេរសកលមិនត្រឹមត្រូវ។