EMB агары мен MacConkey агары: ортаны таңдау және нәтижелерді түсіндіру

Студент бір су үлгісін екі табақшаға штрихтап егеді. Біреуінде жасыл металдық жылтыры бар қара түсті колониялар пайда болады. Екіншісінде көмескі ореолмен қоршалған ашық қызғылт колониялар өседі. Екі табақша да бір түтіктен егілген, қатар инкубацияланған және бір уақытта оқылған. Студент қай табақша дұрыс екенін сұрайды.

Екі табақша да дұрыс. Олар әртүрлі сұрақтарға жауап береді. Шатасу осы екі ортаны ішек бактерияларын анықтауға арналған өзара алмастырылатын скринингтік орталар ретінде қабылдаудан туындайды. Олардың ортақ мақсаты бар: Gram-теріс ішектік организмдерді іріктеу және лактозаны ферменттейтіндерді ферменттемейтіндерден ажырату. Бірақ бұл мақсат әртүрлі химия және әртүрлі визуалды логика арқылы іске асырылады. Негізінде жатқан осы екі тұжырымдаманы түсінгеннен кейін ортаны таңдау мен колонияларды оқу қалыпты рәсімге айналады.

Қысқаша жауап

EMB агары екі бояғышты, eosin Y мен methylene blue-ды пайдаланады және олар екі қызметті қатар атқарады: Gram-оң организмдердің өсуін тежейді және қышқылды көп түзетін организмдердің айналасында тұнбаға түсіп, қара түсті колониялар түзеді; Escherichia coli үшін классикалық белгі — металдық жасыл жылтыр. MacConkey агары бұл қызметтерді бөледі: өт тұздары мен crystal violet Gram-оңдарды тежейді, lactose ферментацияға субстрат береді, ал neutral red қышқыл түзілгенін қызғылт немесе қызыл колониялар арқылы көрсетеді. Егер міндет E. coli-ді айқын болжамды түрде көрсету болса, EMB орынды таңдау болады. Егер міндет лактозаны ферменттейтіндерді ферменттемейтіндерден қызғылт және түссіз колониялар бойынша анық ажырату болса, әсіресе нәжіс немесе несеппен жұмыс процестерінде, MacConkey әдетте оқуға оңайырақ. Ешбір табақша организмді тек түсіне қарап анықтамайды.

EMB: бір мезетте іріктейтін және белгі беретін бояғыштар

EMB тұжырымдамасында селекция мен индикация бір молекулаларға біріктірілген. ASM eosin methylene blue agar protocol EMB-ді селективті әрі дифференциалды орта ретінде сипаттайды: бояғыштар жұбы көптеген Gram-оң организмдерді тежейді, ал lactose ферментациясы бояғыштардың сіңуін және тұнбаға түсуін күшейтеді. Стандартты Levine құрамында peptone, lactose, phosphate, eosin Y, methylene blue және agar бар, бұл FDA BAM method for Levine EMB agar құжатында көрсетілген. Ескі EMB рецептураларында lactose-пен бірге sucrose қосылған нұсқалар кездесетінін ескеріңіз, ал Levine EMB құрамында lactose бар, бірақ sucrose жоқ. Сондықтан зертханаңызда нақты қай рецептура қолданылатынын тіркеп отырыңыз.

EMB-ді оқу — бояғыштардың әрекетін оқу деген сөз. Lactose-тың қарқынды ферментациясы бояғыштардың айқын тұнбалануына жеткілікті мөлшерде қышқыл түзеді, соның нәтижесінде E. coli колонияларының ортасы қою көк-қара болып, классикалық жағдайда шағылған жарықта жасыл металдық жылтыр береді. Enterobacter және Klebsiella сияқты әлсіздеу ферменттеушілер әдетте мұндай жылтырсыз, қызғылттан күлгінге дейінгі шырышты колониялар түзеді. Salmonella, Shigella және Proteus сияқты ферменттемейтіндер, әдетте, бояғыштарды тұнбаға түсіретін күрт қышқылдануды тудырмайтындықтан, түссіз немесе мөлдір колониялар ретінде өседі. Gram-оңдар әдетте тежеледі, бірақ тежелу дәрежесі әртүрлі және штамм мен өнімге байланысты өзгереді. Бояғыштарды дайындаудың толық химиясы, соның ішінде methylene blue-дың бастапқыда неге катиондық бояғыш ретінде әрекет ететіні, бояғыш рецептуралары туралы бөлек талқылауға жатады, ал микроскопияның жалпы контексті бояу әдістері атласында берілген. Бұл мақала табақшаны таңдау мен нәтижені оқуға арналған.

Жоғарыдағы сурет иллюстрациялық сипатта. Ол күтілетін визуалды логиканы көрсетеді: EMB-де қара жылтыр колониялар, қызғылт шырышты түрлер және бозғылт түрлер; MacConkey-де қызғылт және бозғылт түрлердің қарама-қарсылығы. Мұны үлгіні үйрену үшін пайдаланыңыз, содан кейін әрбір қорытындыны фотосуретке түсірілген бақылау үлгілерімен және жұмыс үстеліңіздегі нақты ортаның өнім нұсқаулығымен растаңыз.

MacConkey: қызметтер бөлек, визуалды ереже қарапайым

MacConkey тұжырымдамасында әр қызмет жеке ингредиентке жүктелген. ASM MacConkey agar protocol дәл осы селективті және дифференциалды тәсілді сипаттайды, ал FDA BAM method for MacConkey agar жұмыс істейтін құрамдастарды тізімдейді: peptones, lactose, bile salts, salt, neutral red, crystal violet және agar. Bile salts пен crystal violet бірге Gram-оң организмдерді тежейді. Lactose ферментацияға субстрат береді. Neutral red pH индикаторы ретінде қызмет етеді: қышқыл түзілген аймақтарда колониялар қызғылттан қызылға дейін өзгереді, ал күшті ферменттеушілердің айналасында кейде bile тұнбасы пайда болады.

Оқу ережесі әдейі қарапайым: қызғылт түс — lactose ферменттеуші, түссіз немесе бозғылт түс — ферменттемейтін организм. E. coli қызғылттан қызылға дейін көрінеді, көбіне bile тұнбасының ореолымен бірге. Klebsiella мен Enterobacter қызғылт болып көрінеді және капсулаларына байланысты жиі шырышты болады. Salmonella, Shigella, Proteus және басқа да көптеген Gram-теріс таяқшалар түссіз көрінеді. Оқу зертханаларында тағы бір пайдалы қасиет бар: bile salts әдетте Proteus-тың жайылып өсуін азайтады, сондықтан MacConkey-де селективті емес орталарға қарағанда оқшауланған колонияларды алу оңайырақ. Дегенмен тежелу толық емес, ал жайылып өсуді бақылау негізгі мақсат болса, тұзсыз баламалар да бар.

Бояғыштардың неге дәл осылай әрекет ететіні молекулалық деңгейде заряд пен құрылымға байланысты. Methylene blue — катиондық phenothiazine бояғышы, оның құрылымы мен қасиеттері қышқыл бактериалдық беттерге жақындығын түсіндіреді; дәл осы қасиет EMB-дегі қышқыл аймақтарда оның тұнбаға түсуіне де қатысады.

Бір қарағанда салыстыру

Кестені шешім қабылдау рәсімі ретінде оқыңыз. Егер жаттығуда студенттерге ферментация күшінің градациясын және оның бір айқын шегін көрсету қажет болса, EMB соны көрсетеді. Егер жаттығуда биохимиялық растауға дейін жылдам екі топқа бөлу қажет болса, MacConkey соны көрсетеді.

Қай үлгіге қай орта

Нәжістік coliform немесе E. coli-ді болжамды тануға бағытталған су үлгілерімен жасалатын жаттығуларда EMB тартымды, себебі оның жылтыры визуалды түрде ерекше. MacConkey де ішектік Gram-теріс организмдерге жарайды және тарихи тұрғыда су зерттеулерінде қолданылған, бірақ екі табақшаның ешқайсысы нормативтік су әдісін алмастырмайды; нақты тестке байланысты мұндай әдістер modified mTEC немесе MI сияқты орталарды талап етуі мүмкін. Зертханаңыз орындауға міндетті әдісті тексеріңіз.

Нәжіс үлгілерінде ферменттеушілерді ферменттемейтіндерден ажырату үшін осы екеуінің ішінде MacConkey әдетте пайдалырақ. Salmonella немесе Shigella-ны анықтауға арналған практикалық нәжіс зерттеулерінде тек MacConkey-ге сүйенудің орнына, әдетте XLD немесе Hektoen enteric сияқты селективтілігі жоғары ішектік орталар қосылады.

Клиникалық жұмыс процесін имитациялайтын несеппен оқыту жаттығуларында MacConkey-ді blood agar-мен жұптастырыңыз. MacConkey Gram-теріс организмдерді бастапқы кезеңде ажыратуға мүмкіндік береді, ал blood agar MacConkey тежейтін организмдерді өсіреді. Бұл жұп клиникалық несеп дақылын қою сипаттамаларында стандартты тәсіл болып саналады.

Таза тұжырымдамалық оқыту үшін екеуін де қолданыңыз. EMB ферментация күшінің маңызды екенін және бір молекуланың екі қызмет атқара алатынын үйретеді. MacConkey модульдік құрылымды үйретеді: селектор, субстрат және индикатор бөлек сақталады. Белгілі E. coli, белгілі Klebsiella aerogenes және белгілі Salmonella дақылдарын екі ортаға да қатар штрихтап еккен студенттер бұл екі логиканы кейін сирек шатастырады.

Әр оқу кезеңінде қайталанатын оқу қателері

Ең жиі кездесетін қате — организмді тек түсіне қарап анықтау. MacConkey-дегі қызғылт колония E. coli, Klebsiella, Enterobacter немесе басқа ферменттеуші болуы мүмкін. Түссіз колония Salmonella, Shigella, Proteus, Pseudomonas немесе басқа ферменттемейтін организм болуы мүмкін. Түс — Gram бояуы, oxidase сынағы, биохимиялық панельдер немесе аспаптық идентификация сияқты растаушы зерттеулерге бағыт беретін скринингтік фенотип, ол түр атауы емес.

Екінші қате — жылтырдың болмауына шамадан тыс мән беру. Кейбір нақты E. coli колониялары, әсіресе оқшауланғандары, EMB-де металдық жылтырды аз береді немесе мүлде бермейді. Жылтырдың болмауы E. coli-ді жоққа шығармайды, ал жылтырдың болуы оны дәлелдемейді. Жылтырды болжамды белгі ретінде қарастырыңыз.

Үшінші қате — жасы әртүрлі табақшаларды салыстыру. Lactose-ты кеш ферменттейтін организмдер ұзақ инкубациядан кейін MacConkey-де қызғылт түске айналуы мүмкін, бұл ферменттеушілер мен ферменттемейтіндер арасындағы айқын шекараны бұлдыратады. Зертхана белгілеген уақытта оқыңыз және инкубация уақытын нәтижемен бірге тіркеңіз.

Төртінші қате — аралас өсуді бір организм ретінде оқу. Қызғылт колонияның жанындағы түссіз колония аралық күйді емес, екі фенотипті білдіреді. Жақсы оқшауланған колонияларды таңдап, әр морфотиппен бөлек жұмыс істеңіз. Шырышты құрылым да осындай қате тудыруы мүмкін: Klebsiella да, Enterobacter де шырышты көрінуі мүмкін, сондықтан тек капсулаға қарап атауды анықтауға болмайды. Бұрын Enterobacter aerogenes деп оқытылған организм қазір Klebsiella aerogenes ретінде жіктеледі, сондықтан ескі кестелер мен жаңа белгілердің неге сәйкес келмейтіні осымен түсіндіріледі.

Бақылаулар және қорытынды ереже

Әр сессияда фотосуретке түсірілген немесе жаңа бақылау дақылдарын пайдаланыңыз: күшті ферменттеу реакциясы үшін E. coli, классикалық жылтырсыз шырышты ферментация үшін Klebsiella aerogenes, түссіз ферменттемейтін реакция үшін Salmonella штаммы және нақты өніміңізде Gram-оңдардың тежелуін растау үшін Staphylococcus aureus. Штамм нөмірлері мен қабылдау критерийлерін өндірушінің нұсқаулығымен сәйкестендіріңіз, себебі селективтілік bile, crystal violet және бояғыш мөлшеріне байланысты өзгереді.

Жұмыс үстелінде бір сөйлемді есте сақтаңыз. EMB бір мезетте әрі іріктейтін, әрі белгі беретін бояғыштарды пайдаланады: бұл E. coli үшін айқын сигнал береді, бірақ нәтижені оқу нәзіктеу. MacConkey іріктеу мен белгі беруді бөледі: бұл қызғылт және бозғылт колонияларды оңай ажыратуға мүмкіндік береді, бірақ ферментация туралы егжей-тегжей аз береді. Қойылған сұрақтың тұжырымдамасына сәйкес ортаны таңдаңыз, түске негізделген қорытындыны тиісті сынақтармен растаңыз, сонда екі табақша бір-бірімен бәсекелеспей, бірін-бірі толықтырады.