Edemede
Methylene blue ọhụrụ na itinye agba na reticulocyte: agba dị iche na usoro maka mkpụrụ ndụ dị ndụ
Otu nwa akwụkwọ na-akwadebe ịgụ reticulocyte, nye iwu ka e wetara ya methylene blue, gwakọta ya na ọbara, ma ọ fọrọ nke nta ka ọ ghara ịhụ ihe ọ bụla. Onye ya na ya nọ na klas ji karama e dere methylene blue ọhụrụ na ya wee hụ eriri na-acha anụnụ anụnụ nke ọma n'ime ụfọdụ mkpụrụ ndụ ọbara uhie. Nwa akwụkwọ mbụ chere na agba dị na karama nke abụọ ka dị ọhụrụ ma ọ bụ na ọ ka gbakọrọ agbakọ. Ọ dịghị nke ahụ bụ eziokwu. Ọ nwere molekul dị iche.
Nke a bụ nghọtahie na-akpata ọtụtụ mgbagwoju anya n'akụkụ a. Aha ahụ na-eme ka o yie na methylene blue ọhụrụ bụ methylene blue e mepụtara nke ọma karịa nke mbụ. Ma kemịstrị na-egosi ihe ọzọ. Methylene blue ọhụrụ N bụ agba phenothiazine dị iche, nwere nọmba Colour Index nke ya, usoro nhazi otu nọchiri anya n'ime molekul nke ya, na ọrụ nke ya e mere ka ọ bụrụ ọkọlọtọ n'ọmụmụ ọbara. Mgbe a ghọtara ọdịiche a, akụkụ ndị ọzọ nke usoro ahụ—ihe mere mkpụrụ ndụ ga-eji dị ndụ mgbe a na-etinye agba, ihe a na-agụ dịka reticulocyte, ebe ahụ Heinz dabara, na mgbe brilliant cresyl blue bara uru—na-adị mfe nghọta.
Azịza dị mkpirikpi
A na-amata methylene blue ọhụrụ N, nke bụ reagent a na-eji n'ọmụmụ ọbara, dịka Basic Blue 24 na ndekọ PubChem maka methylene blue ọhụrụ, C.I. 52030, CAS 1934-16-3, nwere usoro kemịkalụ C18H22ClN3S. Methylene blue nkịtị bụ methylthioninium chloride, Basic Blue 9, na ndekọ PubChem ya, C.I. 52015, CAS 61-73-4, nwere usoro kemịkalụ C16H18ClN3S. N'ihe gbasara nhazi molekul, methylene blue ọhụrụ nwere otu methyl abụọ n'oruka ya na agbụ ethylamino n'akụkụ ya, ebe methylene blue nwere otu dimethylamino. Ọdịiche a na-agbanwe otú ha si etinye agba. Akwụkwọ ọmụmụ ọbara na-akọwa methylene blue nkịtị dịka agba na-adịghị arụ ọrụ nke ọma na reticulocyte, ebe methylene blue ọhụrụ na-enye agba ka miri emi ma na-adị otu n'ebe niile; a chịkọtara ntụnyere a na isiokwu ScienceDirect gbasara methylene blue ọhụrụ.
Ee, methylene blue ọhụrụ bụ agba supravital. Itinye agba supravital pụtara itinye agba na mkpụrụ ndụ dị ndụ mgbe e wepụchara ha n'ahụ, tupu e jiri usoro fixation mee ka ha kwụsie ike, dịka akọwara na nyocha NCBI gbasara ụkpụrụ itinye agba supravital. Methylene blue ọhụrụ na brilliant cresyl blue abụọ so n'ụdị a, ọkọlọtọ CLSI maka reticulocyte na-akpọkwa methylene blue ọhụrụ kpọmkwem dịka agba supravital. Mgbe ụfọdụ, ụmụ akwụkwọ na-ewere nke a dịka itinye agba Romanowsky n'oyi akwa mkpụrụ ndụ e mere fixation. Nghọta ahụ anaghị arụ ọrụ ebe a. Ọ bụrụ na e buru ụzọ mee fixation, usoro ahụ agaghịzi arụ ọrụ.
Maka ndị na-agụ akwụkwọ na-enyocha aha agba ndị yiri ibe ha, methyl blue megide methylene blue na-akọwa mgbagwoju anya ọzọ ka ukwuu n'etiti agba triarylmethane nwere ụgwọ eletrik na-adịghị mma na ezinụlọ phenothiazine nwere ụgwọ eletrik dị mma. Nchịkọta itinye agba n'ụlọ nyocha na-egosi ebe ọrụ supravital dị n'etiti usoro a na-eji oyi akwa e mere fixation, akwụkwọ ndu gbasara ọdịdị mkpụrụ ndụ ọbara na-egosikwa ebe nyocha reticulocyte dabara n'ime nyocha sara mbara nke ụdị mkpụrụ ndụ ọbara dị iche iche.
| Reagent | Ihe ọ bụ | C.I. / CAS | Ọrụ ya n'ọrụ reticulocyte |
|---|---|---|---|
| Methylene blue ọhụrụ N | Phenothiazine nwere ethylamino na otu methyl abụọ n'oruka ya | C.I. 52030 (Basic Blue 24); CAS 1934-16-3 maka chloride | Agba supravital eji aka arụ ọrụ e mere ka ọ bụrụ ọkọlọtọ, nke a na-ahọrọ maka ntụnyere |
| Methylene blue nkịtị | Bis(dimethylamino) phenothiazine (methylthioninium chloride) | C.I. 52015 (Basic Blue 9); CAS 61-73-4 | Agba na-adịghị arụ ọrụ nke ọma na reticulocyte, ọ bụghị ihe e ji anọchi nke ọzọ |
| Brilliant cresyl blue | Agba oxazine; ngwakọta ya na-adị iche dabere n'onye na-eweta ya | C.I. 51010; CAS 81029-05-2 ma ọ bụ 10127-36-3 dabere n'ụdị nnu ya | Agba supravital a na-anabata, anaghị enye agba otu nke ọma, ọ bụghị ihe ntụnyere nke usoro kwekọrọ ekwekọ |
Otu ịdọ aka ná ntị gbasara katalọgụ: e nwere ụdị methylene blue ọhụrụ ọzọ bụ nnu okpukpu abụọ zinc chloride, n'okpuru CAS 6586-05-6. Ya mere, akụkụ na-akọwa usoro kwesịrị ịkpọ ụdị nnu ahụ na onye wetara ya, ọ bụghị naanị aha a na-akpọkarị ya.
Ihe itinye agba supravital na-eme n'ezie
Reticulocyte bụ mkpụrụ ndụ ọbara uhie na-eto eto nke tufuru nucleus ya ma ka nwere RNA ribosome fọdụrụnụ. N'ihe nlele dị mmiri nke a na-etinyebeghị agba, a naghị ahụ RNA ahụ. Agba supravital na-abanye n'ime mkpụrụ ndụ dị ndụ wee mee ka RNA ahụ daa dịka ihe siri ike ma ọ bụ gbakọta n'ụdị obere ntụpọ na eriri na-acha anụnụ anụnụ, ihe yiri ụgbụ eriri a na-ahụ mgbe a na-eji mmanụ immersion enyocha ya. Ya mere, ụgbụ ahụ bụ ihe itinye agba mepụtara, ọ bụghị ọkpụkpụ dịbu adị na-eche agba. Nke a bụ ihe mere ihe ndị na-agbanwe n'usoro ahụ—njupụta agba, buffer, oke ọbara tụnyere agba, okpomọkụ na oge—ji dị mkpa dịka aha agba ahụ.
Ihe nke a pụtara n'omume bụ na a ga-agbaso usoro n'usoro siri ike: buru ụzọ gwakọta ọbara e gbochiri ịkpụkọ na agba, hapụ ya n'ọnọdụ a kara aka ruo oge kwesịrị ekwesị, wee mee oyi akwa ma nyochaa ha na-enweghị fixation na-enweghịkwa agba mgbakwunye. Ime fixation tupu itinye agba, ma ọ bụ iji agba mgbakwunye na-ekpuchi eriri na-adịghị apụta ìhè nke ọma, na-emebi ozi a chọrọ maka ịgụ ahụ.
Usoro a pụrụ iji gụọ reticulocyte site na methylene blue ọhụrụ
Ọ dịghị otu ngwakọta a na-eji n'ebe niile, ya mere kọwaa nke e ji mee ọrụ ahụ. Ụdị atọ e dekọrọ na-egosi etu usoro ndị ahụ si dịgasị iche.
Usoro Brecher ọdịnala na-eji ihe dị ka 0.5 percent methylene blue ọhụrụ na potassium oxalate, nke a na-agwakọta n'oke olu nha anya na ọbara EDTA a gwakọtara nke ọma, ma hapụ ya ihe dị ka nkeji 10 ruo 15 n'okpomọkụ ụlọ. Mgbe e jiri nwayọọ gwakọta ya ọzọ, a na-eme oyi akwa dị gịrịgịrị yiri wedge, hapụ ha ka ikuku kpoo ha, wee nyochaa ha na-enweghị fixation site na oghere objective 100x eji mmanụ. Usoro NCBI maka ịgụ reticulocyte na-akọwa usoro ọrụ a na etiti ịgụ e ji ya arụ ọrụ.
Ụdị Dacie na Lewis na-eji 1.0 percent methylene blue ọhụrụ na saline nwere citrate, gwakọta ya na ọbara nwere olu okpukpu 2 ruo 4 nke agba ahụ, ma debe ya na 37 C ruo nkeji 15 ruo 20 tupu e mee oyi akwa. N'otu mmejuputa na-adịbeghị anya iji mee ka usoro CLSI H44 kwekọọ, e jiri ngwọta dị fechaa nke 0.1 percent na saline nwere phosphate buffer na pH 7.4, hapụ ya na 20 C ruo nkeji 10, na-enweghị fixation, dịka akọwara na ọmụmụ 2026 gbasara ime ka usoro NMB kwekọọ.
Iwu ịgụ bụ otu n'ụdị usoro ndị a niile. Gụọ mkpụrụ ndụ dịka reticulocyte ma ọ bụrụ na o nwere ma ọ dịkarịa ala obere ntụpọ abụọ dị iche iche ma ọ bụ akụkụ eriri na-acha anụnụ anụnụ; nke a na-ewepụ otu ntụpọ agba tọgbọrọ naanị ya. Gụọ ma ọ dịkarịa ala mkpụrụ ndụ ọbara uhie 1,000 n'ọrụ a na-eme mgbe niile ma kwupụta reticulocyte dịka pasent. Mgbe pasent dị ala, ọnụ ọgụgụ na-achọ ka a gụọ mkpụrụ ndụ ndị ọzọ. Nyocha usoro CLSI H44 kwuru na mgbe reticulocyte dị ihe dị ka 1 percent, a chọrọ ihe dị ka mkpụrụ ndụ 4,400 iji belata mgbanwe ịgụ ruo 5 percent, dịka akọwara na nyocha CLSI H44 na De Gruyter. Diski Miller nke a na-etinye n'oghere anya microscope na-eme ka ịgụ ọnụ ọgụgụ buru ibu dị mfe. Yọchaa agba ahụ ma ọ bụ kwadebe nke ọhụrụ, n'ihi na ihe agba dara dịka ihe siri ike na-adị ka obere ntụpọ dị n'ime mkpụrụ ndụ.
Ahụ Heinz n'otu ihe nlele ahụ
Otu oyi akwa supravital ahụ nwekwara ike igosi ahụ Heinz, nke bụ nchịkọta hemoglobin e mere oxidation ma mebie nhazi ya, kama RNA fọdụrụnụ. N'ihe nlele methylene blue ọhụrụ, ha na-apụta dịka ahụ dị okirikiri, na-abụkarị otu ma dị nso na akpụkpọ mkpụrụ ndụ, ma na-acha anụnụ anụnụ dị fechaa karịa ihe yiri ụgbụ eriri. Ha anaghị adịgide nke ọma mgbe e mere fixation na itinye agba mgbakwunye, ya mere nyochaa oyi akwa a na-emeghị fixation. Otu usoro na-adịbeghị anya ji microliters 20 nke ọbara EDTA na microliters 20 nke 1 percent methylene blue ọhụrụ, hapụ ya nkeji 15, wee gụọ mkpụrụ ndụ nwere ahụ Heinz n'etiti erythrocytes 250, dịka akọwara na ọmụmụ PMC nke kọrọ usoro ahụ.
Ọdịiche abụọ na-egbochi ịkọwa ihe a hụrụ n'ụzọ na-ezighị ezi. Nke mbụ, methyl violet na crystal violet na-etinye agba na ahụ Heinz nke siri ike karịa methylene blue ọhụrụ, dịka e kwuru na isiokwu ScienceDirect gbasara ahụ Heinz. Methylene blue ọhụrụ bụ nhọrọ dị mma mgbe a na-enyocha reticulocyte na ahụ Heinz ọnụ, ọ bụghị agba kachasị ike e mere kpọmkwem maka ahụ Heinz. Nke abụọ, ihe HbH dị n'ime mkpụrụ ndụ n'ọnọdụ ibu àgwà alpha thalassemia na-emepụta ọtụtụ obere ntụpọ n'akụkụ niile nke mkpụrụ ndụ mgbe e tinyere agba supravital, ebe ahụ Heinz ọdịnala pere mpe n'ọnụ ọgụgụ, buru ibu, ma na-ejikọkarị na akpụkpọ mkpụrụ ndụ. Ntụpọ agba tọgbọrọ bụ ihe nke atọ na-adị ka ha: ọ dị n'èzí larịị a na-elekwasị anya na mkpụrụ ndụ ma na-adị iche site n'otu mpaghara a na-enyocha gaa n'ọzọ.
Brilliant cresyl blue megide methylene blue ọhụrụ
Agba abụọ ahụ bụ agba supravital maka reticulocyte, ma ime ka usoro bụrụ ọkọlọtọ na-akwado otu n'ime ha. Usoro reticulocyte CLSI H44-A2, nke e mepụtara ọnụ na International Council for Standardization in Haematology ma depụta na ibe ọkọlọtọ CLSI H44, na-ahọpụta itinye methylene blue ọhụrụ n'ọbara EDTA dịka usoro ntụnyere eji aka eme. Nkuzi ọdịnala n'ọmụmụ ọbara kwekọrịtara n'ihe gbasara ọdịdị: methylene blue ọhụrụ na-etinye agba n'eriri nke ka miri emi ma na-adị otu nke ọma, ebe brilliant cresyl blue na-adịgasị iche karịa n'etiti ogbe agba na ihe nlele dị iche iche.
Ọkwa ahụ chọrọ nkọwa na-amachi ya. Ntuziaka ICSH maka nyocha igwe nyocha na-anabata iji methylene blue ọhụrụ enyocha n'okpuru microscope site n'aka dịka usoro ntụnyere ntụaka, ma na-ekwu na ọ dabere n'echiche onye na-enyocha ya ma nwee nkenke pere mpe ma e jiri ya tụnyere usoro ndị ọzọ; a na-ahọrọ usoro ntụaka flow cytometry ebe ha dị. Ntụnyere ihe nlele 100 e mere na 2022 chọpụtara na brilliant cresyl blue nwere njehie e nwere usoro na-aga n'otu ụzọ dị ala karịa methylene blue ọhụrụ mgbe e jiri ha tụnyere igwe nyocha ahụ, dịka akọwara na ntụnyere PMC nke usoro itinye agba. Nchịkọta a pụrụ ịkwado maka ụmụ akwụkwọ bụ nke a: jiri methylene blue ọhụrụ dịka ihe ntụnyere eji aka eme e mere ka ọ bụrụ ọkọlọtọ, nyochaa usoro brilliant cresyl blue ọ bụla a na-eji n'ebe unu site n'iji ya tụnyere nke ahụ ma ọ bụ usoro akpaka, ma tụọ anya na nsonaazụ nyocha microscope eji aka eme ga-agbasasị karịa n'ụzọ ọ bụla. Akwụkwọ ochie gbasara ime ka usoro bụrụ ọkọlọtọ kwadokwara Azure B e mere ka ọ dị ọcha dịka nhọrọ nwere ịdị ọcha kemịkalụ karịa, n'ihi na ogbe agba a na-ere ahịa na-adịgasị iche, dịka akọwara na ọmụmụ Marshall gbasara Azure B; nke a na-akọwa ihe mere a ka ji ekwu banyere ọkwa ịdị ọcha reagent n'mkparịta ụka gbasara usoro.
Izere njehie ndị a na-emekarị
Njehie anọ na-akpata ọtụtụ ihe nlele anaghị arụ ọrụ nke ọma. Ịtụ methylene blue nkịtị kama methylene blue ọhụrụ N na-emepụta agba na-adịghị ike n'ihi kemịstrị ya, ọ bụghị n'ihi usoro eji ya. Ime fixation ma ọ bụ itinye agba mgbakwunye tupu ilele ya na-ewepụ ihe supravital na-egosi. Ịgụ ihe agba dara dịka obere ntụpọ na-eme ka nsonaazụ karịa eziokwu; iwu obere ntụpọ abụọ na agba a yọchara na-egbochi nke a. Ịgụ mkpụrụ ndụ pere mpe mgbe pasent reticulocyte dị ala na-enye ọnụ ọgụgụ yiri nke ziri ezi nke ukwuu ma nwere oke ntụkwasị obi sara mbara. Njehie nke ọ bụla nwere otu akara: onye na-enyocha n'okpuru microscope na-ata microscope ụta maka ihe nzọụkwụ reagent kpebiri.