EMB ագարն ընդդեմ MacConkey ագարի. միջավայրի ընտրություն և մեկնաբանում

Ուսանողը նույն ջրի նմուշը շտրիխային եղանակով ցանում է երկու թիթեղի վրա։ Մեկի վրա առաջանում են մուգ գաղութներ՝ կանաչ մետաղական փայլով։ Մյուսի վրա երևում են վառ վարդագույն գաղութներ՝ մշուշոտ լուսապսակով։ Երկու թիթեղներն էլ ցանվել են նույն փորձանոթից, ինկուբացվել են կողք կողքի և գնահատվել նույն ժամին։ Ուսանողը հարցնում է՝ ո՞ր թիթեղի արդյունքն է ճիշտ։

Երկուսն էլ ճիշտ են։ Դրանք պատասխանում են տարբեր հարցերի։ Շփոթությունն առաջանում է, երբ այս երկու միջավայրերը դիտարկվում են որպես աղիքային բակտերիաների փոխարինելի սքրինինգային միջոցներ։ Դրանց նպատակը ընդհանուր է՝ ընտրել գրամ-բացասական աղիքային օրգանիզմները և տարբերակել լակտոզա խմորողներին չխմորողներից, սակայն այդ նպատակը նրանք իրականացնում են տարբեր քիմիայով և տարբեր տեսողական տրամաբանությամբ։ Երբ հասկանաք հիմքում ընկած այս երկու գաղափարները, թիթեղի ընտրությունն ու գաղութների ընթերցումը դառնում են սովորական գործընթաց։

Կարճ պատասխանը

EMB ագարը օգտագործում է երկու ներկանյութ՝ eosin Y և methylene blue, որոնք միաժամանակ կատարում են երկու գործառույթ. ճնշում են գրամ-դրականների աճը և նստվածք են առաջացնում ուժեղ թթու արտադրողների շուրջ՝ ձևավորելով մուգ գաղութներ, իսկ Escherichia coli-ի դեպքում դասականորեն՝ մետաղական կանաչ փայլ։ MacConkey ագարում այդ գործառույթները բաժանված են. լեղու աղերը և crystal violet-ը ճնշում են գրամ-դրականներին, լակտոզան ծառայում է որպես խմորման սուբստրատ, իսկ neutral red-ը թթվագոյացումը ցույց է տալիս վարդագույն կամ կարմիր գաղութներով։ Եթե խնդիրը E. coli-ի վառ արտահայտված նախնական ցուցադրումն է, EMB-ն իր տեղն ունի։ Եթե խնդիրը լակտոզա խմորողներին չխմորողներից պարզ՝ վարդագույն և անգույն տարբերակմամբ բաժանելն է, հատկապես կղանքի կամ մեզի աշխատանքային գործընթացներում, MacConkey-ն սովորաբար ավելի հեշտ է ընթերցել։ Ոչ մի թիթեղ օրգանիզմը չի նույնականացնում միայն գույնով։

EMB. ներկանյութեր, որոնք միաժամանակ ընտրում և ազդանշան են տալիս

EMB-ի գաղափարում ընտրողականությունն ու ցուցումը համատեղված են նույն մոլեկուլներում։ ASM-ի eosin methylene blue ագարի արձանագրությունը EMB-ն նկարագրում է որպես և՛ ընտրողական, և՛ տարբերակիչ միջավայր, որտեղ ներկանյութերի զույգը ճնշում է բազմաթիվ գրամ-դրական օրգանիզմների, իսկ լակտոզայի խմորումը նպաստում է ներկանյութերի կլանմանն ու նստեցմանը։ Levine-ի ստանդարտ բաղադրությունը պարունակում է պեպտոն, լակտոզա, ֆոսֆատ, eosin Y, methylene blue և ագար, ինչպես նշված է Levine EMB ագարի FDA BAM մեթոդում։ Նկատի ունեցեք, որ EMB-ի որոշ հին բաղադրատոմսերում լակտոզայի հետ ավելացվում էր նաև սախարոզա, մինչդեռ Levine EMB-ն պարունակում է լակտոզա առանց սախարոզայի, ուստի գրանցեք, թե ձեր լաբորատորիան որ բաղադրությունն է օգտագործում։

EMB-ի ընթերցումը նշանակում է գնահատել ներկանյութերի վարքը։ Լակտոզայի ինտենսիվ խմորումը առաջացնում է այնքան թթու, որ տեղի է ունենում ներկանյութերի առատ նստեցում՝ E. coli-ին տալով մուգ կապտասև կենտրոններ և, դասական դեպքում, անդրադարձած լույսի տակ կանաչ մետաղական փայլ։ Ավելի թույլ խմորողները, օրինակ՝ Enterobacter-ը և Klebsiella-ն, սովորաբար աճում են որպես վարդագույնից մանուշակագույն լորձանման գաղութներ՝ առանց այդ փայլի։ Չխմորողները, օրինակ՝ Salmonella-ն, Shigella-ն և Proteus-ը, սովորաբար աճում են որպես անգույն կամ կիսաթափանցիկ գաղութներ, քանի որ չեն առաջացնում ներկանյութերը նստեցնող թթվային կտրուկ փոփոխություն։ Գրամ-դրականները սովորաբար ճնշվում են, թեև ճնշման աստիճանը տարբեր է և կախված է շտամից ու արտադրանքից։ Ներկանյութերի պատրաստման ամբողջական քիմիան, ներառյալ այն, թե ինչու է methylene blue-ն սկզբունքորեն գործում որպես կատիոնային ներկանյութ, առանձին քննարկման թեմա է, իսկ ընդհանուր մանրադիտակային համատեքստը ներկայացված է ներկման մեթոդների ատլասում։ Այս հոդվածը կենտրոնանում է թիթեղի ընտրության և արդյունքների ընթերցման վրա։

Վերևի պատկերը պատկերազարդ է։ Այն ցույց է տալիս սպասվող տեսողական տրամաբանությունը. EMB-ի վրա՝ մուգ, փայլուն գաղութներ, վարդագույն լորձանման տեսակներ և բաց գույնի տեսակներ, իսկ MacConkey-ի վրա՝ վարդագույն և բաց գույնի տեսակների տարբերակում։ Օգտագործեք այն պատկերը սովորելու համար, ապա յուրաքանչյուր գնահատում հաստատեք լուսանկարված վերահսկիչ նմուշներով և ձեր աշխատասեղանին եղած կոնկրետ միջավայրի արտադրողի ներդիրով։

MacConkey. տարանջատված գործառույթներ, ավելի պարզ տեսողական կանոն

MacConkey-ի գաղափարում յուրաքանչյուր գործառույթ վերապահված է առանձին բաղադրիչի։ ASM-ի MacConkey ագարի արձանագրությունը ներկայացնում է նույն ընտրողական և տարբերակիչ մոտեցումը, իսկ MacConkey ագարի FDA BAM մեթոդը թվարկում է գործառնական բաղադրիչները՝ պեպտոններ, լակտոզա, լեղու աղեր, աղ, neutral red, crystal violet և ագար։ Լեղու աղերը crystal violet-ի հետ միասին ընտրողականորեն ճնշում են գրամ-դրականներին։ Լակտոզան խմորման սուբստրատն է։ Neutral red-ը գործում է որպես pH-ի ցուցիչ՝ թթվի առաջացման վայրերում դառնալով վարդագույնից կարմիր, իսկ ուժեղ խմորողների շուրջ երբեմն առաջանում է նաև լեղու նստվածք։

Ընթերցման կանոնը միտումնավոր պարզ է. վարդագույնը նշանակում է լակտոզա խմորող, իսկ անգույնը կամ բաց գույնը՝ չխմորող։ E. coli-ն երևում է վարդագույնից կարմիր, հաճախ՝ լեղու նստվածքային լուսապսակով։ Klebsiella-ն և Enterobacter-ը երևում են վարդագույն և հաճախ լորձանման՝ իրենց պատիճների պատճառով։ Salmonella-ն, Shigella-ն, Proteus-ը և բազմաթիվ այլ գրամ-բացասական ցուպիկներ երևում են անգույն։ Ուսումնական լաբորատորիաներում կարևոր է նաև մեկ լրացուցիչ առավելություն. լեղու աղերը սովորաբար նվազեցնում են Proteus-ի սողացող աճը, ուստի MacConkey-ի վրա մեկուսացված գաղութներ ստանալն ավելի հեշտ է, քան ոչ ընտրողական միջավայրերում, թեև ճնշումը բացարձակ չէ, և սողացող աճի վերահսկման առաջնահերթության դեպքում կան նաև առանց աղի այլընտրանքներ։

Ներկանյութերի այսպիսի վարքի մոլեկուլային պատճառը կապված է լիցքի և կառուցվածքի հետ։ Methylene blue-ն կատիոնային phenothiazine ներկանյութ է, որի կառուցվածքն ու հատկությունները բացատրում են թթվային բակտերիալ մակերեսների նկատմամբ դրա հակումը. նույն հակումն է գործում նաև EMB-ի թթվային գոտիներում դրա նստեցման ժամանակ։

Համեմատություն՝ մեկ հայացքով

Աղյուսակը դիտարկեք որպես որոշման ընթացակարգ։ Երբ վարժության նպատակը խմորման ուժգնության աստիճանական տարբերությունը մեկ արտահայտիչ վերջնակետով ցույց տալն է, EMB-ն դա տեսանելի է դարձնում։ Երբ անհրաժեշտ է կենսաքիմիական հաստատումից առաջ արագ երկբևեռ տարբերակում, MacConkey-ն այն ապահովում է։

Որ նմուշի համար որ միջավայրը

Ջրի վարժությունների դեպքում, երբ նպատակը ենթադրյալ կղանքային կոլիֆորմների կամ E. coli-ի ճանաչումն է, EMB-ն գրավիչ է, քանի որ փայլը տեսողականորեն առանձնահատուկ է։ MacConkey-ն նույնպես հարմար է աղիքային գրամ-բացասականների համար և պատմականորեն կիրառվել է ջրի հետազոտություններում, սակայն ոչ մի թիթեղ չի փոխարինում կարգավորող պահանջներով սահմանված ջրի հետազոտության մեթոդին, որը փորձարկումից կախված կարող է պահանջել modified mTEC կամ MI նման միջավայրեր։ Ստուգեք այն մեթոդը, որին ձեր լաբորատորիան պարտավոր է հետևել։

Կղանքի նման նմուշներում խմորողներին չխմորողներից տարանջատելու համար MacConkey-ն սովորաբար այս երկուսից ավելի օգտակարն է։ Salmonella-ի կամ Shigella-ի գործնական հետազոտության ժամանակ սովորաբար ավելացվում են ավելի ընտրողական աղիքային միջավայրեր, օրինակ՝ XLD կամ Hektoen enteric, այլ ոչ թե օգտագործվում է միայն MacConkey-ը։

Մեզի հետ կապված ուսուցման համար, որը նմանակում է կլինիկական աշխատանքային գործընթացը, MacConkey-ն զուգակցեք արյունային ագարի հետ։ MacConkey-ն ապահովում է գրամ-բացասականների նախնական տարբերակումը, իսկ արյունային ագարը վերականգնում է այն օրգանիզմները, որոնք MacConkey-ն ճնշում է։ Այս զուգակցումը մեզի մշակույթի կազմակերպման կլինիկական նկարագրություններում ստանդարտ մոտեցում է։

Գաղափարը մաքուր ձևով ուսուցանելու համար օգտագործեք երկուսն էլ։ EMB-ն ցույց է տալիս, որ խմորման ուժգնությունը կարևոր է և որ մեկ մոլեկուլ կարող է երկու դեր կատարել։ MacConkey-ն սովորեցնում է մոդուլային կառուցվածք՝ ընտրիչը, սուբստրատը և ցուցիչը պահելով առանձին։ Ուսանողները, որոնք հայտնի E. coli, հայտնի Klebsiella aerogenes և հայտնի Salmonella կողք կողքի ցանում են երկու միջավայրերի վրա, հետագայում հազվադեպ են շփոթում դրանց տրամաբանությունները։

Ընթերցման սխալներ, որոնք կրկնվում են ամեն կիսամյակ

Ամենատարածված սխալը միայն գույնով նույնականացումն է։ MacConkey-ի վրա վարդագույն գաղութը կարող է լինել E. coli, Klebsiella, Enterobacter կամ մեկ այլ խմորող։ Անգույն գաղութը կարող է լինել Salmonella, Shigella, Proteus, Pseudomonas կամ մեկ այլ չխմորող։ Գույնը սքրինինգային ֆենոտիպ է, որն ուղղորդում է հաստատող հետազոտությունները, օրինակ՝ Gram ներկումը, oxidase թեստը, կենսաքիմիական պանելները կամ գործիքային նույնականացումը, այլ ոչ թե տեսակային անվանում։

Երկրորդ սխալը փայլի բացակայությունը չափազանց կարևոր համարելն է։ Որոշ իրական E. coli գաղութներ, հատկապես մեկուսացվածները, EMB-ի վրա քիչ կամ ընդհանրապես մետաղական փայլ չեն առաջացնում։ Փայլի բացակայությունը չի բացառում E. coli-ն, իսկ փայլի առկայությունն այն չի ապացուցում։ Փայլը դիտարկեք որպես նախնական հուշում։

Երրորդ սխալը տարբեր տարիք ունեցող թիթեղների համեմատությունն է։ Ուշացած լակտոզա խմորողները երկարատև ինկուբացումից հետո MacConkey-ի վրա կարող են վարդագույն դառնալ, ինչն աղավաղում է խմորողների և չխմորողների հստակ բաժանումը։ Ընթերցեք լաբորատորիայի սահմանած ժամին և արդյունքի հետ գրանցեք ինկուբացման տևողությունը։

Չորրորդ սխալը խառը աճը որպես մեկ օրգանիզմ մեկնաբանելն է։ Անգույն գաղութի կողքին գտնվող վարդագույն գաղութը ցույց է տալիս երկու ֆենոտիպ, ոչ թե միջանկյալ վիճակ։ Ընտրեք լավ մեկուսացված գաղութներ և յուրաքանչյուր մորֆոտիպի հետ աշխատեք առանձին։ Լորձանման հյուսվածքը նմանատիպ թակարդ է ստեղծում. և՛ Klebsiella-ն, և՛ Enterobacter-ը կարող են լորձանման տեսք ունենալ, ուստի միայն պատիճը երբեք բավարար չէ անվանումը որոշելու համար։ Այն օրգանիզմը, որը նախկինում ուսուցանվում էր որպես Enterobacter aerogenes, այժմ դասակարգվում է որպես Klebsiella aerogenes, ինչը բացատրում է, թե ինչու են հին աղյուսակներն ու նոր պիտակները երբեմն հակասական թվում։

Վերահսկիչներ և եզրափակիչ կանոն

Յուրաքանչյուր աշխատաշրջանում օգտագործեք լուսանկարված կամ թարմ վերահսկիչներ՝ E. coli ուժեղ խմորման ռեակցիայի համար, Klebsiella aerogenes՝ առանց դասական փայլի լորձանման խմորման համար, Salmonella-ի շտամ՝ անգույն չխմորողի ռեակցիայի համար, և Staphylococcus aureus՝ ձեր կոնկրետ արտադրանքի վրա գրամ-դրականների ճնշումը հաստատելու համար։ Շտամների համարներն ու ընդունման չափանիշները համապատասխանեցրեք արտադրողի ներդիրին, քանի որ ընտրողականությունը փոխվում է լեղու, crystal violet-ի և ներկանյութերի պարունակությունից կախված։

Աշխատասեղանի մոտ հիշեք մեկ նախադասություն։ EMB-ն օգտագործում է ներկանյութեր, որոնք և՛ ընտրում են, և՛ ազդանշան են տալիս, ինչի շնորհիվ ստացվում է E. coli-ի արտահայտիչ ազդանշան, սակայն ընթերցումը դառնում է ավելի նուրբ։ MacConkey-ն ընտրողական գործառույթը տարանջատում է ցուցիչ գործառույթից, ինչի շնորհիվ ստացվում է պարզ վարդագույն և բաց գույնի տարբերակում՝ խմորման մանրամասների մի մասի հաշվին։ Ընտրեք այն միջավայրը, որի գաղափարը համապատասխանում է հարցին, գույնը հաստատեք համապատասխան թեստերով, և երկու թիթեղներն այլևս չեն մրցակցի, այլ կլրացնեն միմյանց։