Espèk absòpsyon ak absòptivite molè ble metilèn: yon referans ki presize kondisyon yo

Yon espèk ble metilèn sanble senp jiskaske ou eseye sèvi ankò ak yon chif ou jwenn ladan l. Yon laboratwa rapòte yon koyefisyan ekstinksyon molè toupre 82,000. Yon lòt rapòte 67,000. Yon twazyèm rapòte plis pase 100,000. Toule twa ka dekri mezi pa yo kòrèkteman, men okenn ladan yo pa yon konstan inivèsèl pou koloran an.

Konfizyon an soti nan melanje de konsèp diferan. Absorbans se yon mezi yo fè sou yon solisyon espesifik nan yon kivèt espesifik. Absòptivite molè, yo souvan ekri kòm epsilon, se yon paramèt nan yon modèl solisyon sa a. Lè ble metilèn chanje eta asosiyasyon li, modèl la chanje, kidonk paramèt la chanje tou. Bon abitid la se trete chak koyefisyan kòm yon valè ki gen kondisyon li make: longèdonn, sòlvan, pH oswa tanpon, tanperati, entèval konsantrasyon ak longè chemen optik dwe akonpaye chif la.

Bann monomè a nan solisyon dilye nan dlo

Nan yon solisyon akeuz dilye, bann prensipal katyon ble metilèn nan chita toupre 664 a 665 nm; yo souvan site li ant 664 ak 668 nm selon aparèy yo ak chwa kalibrasyon yo. Bann sa a se bon chwa pou kantifikasyon lè solisyon an ase dilye pou pifò koloran an nan fòm monomè.

Twa valè nan literati a montre poukisa kondisyon yo pi enpòtan pase chif yo mete an premye a. Chèchè ki etidye ajil epi ki te kenbe echantiyon akeuz yo anba anviwon 7 micromolar nan kivèt 1 cm te rapòte yon epsilon anviwon 82,000 M-1 cm-1 nan 665 nm. Valè sa a patikilyèman byen dokimante kòm yon pant kalibrasyon anpirik pou echantiyon ki trè dilye nan dlo. Yon kalibrasyon prensipal ki fèt pita nan dlo deyonize, ki te sèvi ak 2.34 a 37.52 micromolar ak yon chemen optik 1 cm, te bay anviwon 67,100 M-1 cm-1 nan 665 nm pou koloran total la. Rezilta ki pi ba a nòmal, li pa yon kontradiksyon, paske mwatye siperyè entèval kalibrasyon sa a deja gen yon kantite dimè ki pa neglijab. Yon twazyèm valè, anviwon 73,460 M-1 cm-1 nan 664 nm, soti nan yon travay nan pH 6.86 ak 293 K ki te separe espèk yo te obsève a an pati monomè ak pati dimè, jan sa rezime nan yon revizyon kritik resan sou fotofizik ble metilèn. Chif sa a se yon konpozan monomè yo jwenn atravè dekonvolisyon, se pa yon pant dirèk absorbans parapò ak koloran total.

Leson pratik la: chwazi koyefisyan ki gen kondisyon ki koresponn ak echantiyon ou yo, oswa fè pwòp kalibrasyon ou. Pa pran 82,000 pou mete nan yon tès nan tanpon fosfat 30 micromolar epi sipoze relasyon an toujou lineyè.

Zepòl nan longèdonn ki pi kout la se yon melanj

Pandan konsantrasyon an ap monte, yon zepòl toupre 600 a 615 nm grandi parapò ak pik 664 nm nan. Travay modèn yo anjeneral mete kontribisyon dimè tip H la toupre 605 a 610 nm. Analiz espèk global ble metilèn nan dlo distenge yon maksimòm dimè nan 607 nm ak yon maksimòm pou yon pi gwo agrega nan 600 nm, ansanm ak konpozan rezonans monomè nan 664 ak 650 nm. Tèks konplè li disponib atravè dosye aksè lib pou PMID 33251415.

Yo pa dwe idantifye zepòl sa a kòm absorbans dimè pi. Estrikti vibwonik monomè a kontribye tou nan menm rejyon an, kidonk wotè yo mezire a se yon sipèpozisyon. Yon ajisteman global te jwenn yon modèl monomè plis dimè pa t mache sou tout entèval 1.1 micromolar a 3.4 millimolar la, tandiske ajoute yon tetramè te bay pi bon ajisteman an, ak yon siyal tetramè ki te deja detektab anba 34 micromolar. Entansite konpozan yo te jwenn nan ajisteman an te wo: anviwon 107,800 M-1 cm-1 nan 664 nm pou konpozan monomè prensipal la, anviwon 101,400 pou dimè a nan 607 nm, ak anviwon 138,500 pou tetramè a nan 600 nm, nan dlo deyonize san tanpon ak klori sodyòm soti nan 0 a 0.15 M ak tanperati soti nan 282 a 333 K. Sa yo se pati modèl la separe, kidonk yo pa dwe ranplase yon pant anpirik Beer Lambert.

Yo te mezire fòs dimerizasyon an dirèkteman. Nan pH 6.86 ak 293 K, yon etid te jwenn yon konstan dimerizasyon toupre 3,900 M-1. Grandè sa a esplike poukisa yon solisyon travay 5 micromolar konpòte li prèske lineyèman, tandiske yon solisyon manman 50 micromolar pa fè sa. Yon verifikasyon itil pandan devlopman metòd la se rapò absorbans toupre 610 nm sou absorbans toupre 665 nm. Lè rapò sa a monte ak konsantrasyon an, epsilon nan 664 nm pa dekri yon sèl espès ki pa chanje ankò.

Sou yon entèval konsantrasyon kote yon sèl pè espès ki transfòme youn an lòt domine, espèk yo ka pataje yon pwen izosbestik, yo jwenn eksperimantalman toupre 625 nm nan seri akeuz. Yon pwen fiks ki byen defini ann akò ak prezans de espès dominan. Lè pwen an deplase oswa disparèt pandan konsantrasyon an monte, trete sa kòm yon avètisman ke pi gwo agrega oswa ekilib k ap chanje antre an jwèt, pa kòm yon erè aparèy.

Sòlvan, pH ak tanperati deplase espèk la

Dlo favorize asosiyasyon. Ajoute dimetil silfoksid diminye dimerizasyon, deplase maksimòm absòpsyon ak fliyoresans yo nan direksyon longèdonn ki pi long, epi ogmante randman kantik fliyoresans lan anviwon kat fwa, dapre etid sou sòlvan pou ble metilèn nan melanj dlo ak DMSO, ki endekse kòm PMID 30933781. Travay sa a trete espèk akeuz yo kòm yon ekilib monomè-dimè, ak absorbans monomè toupre 650 a 670 nm ak absorbans dimè toupre 580 a 615 nm, epi li sòti konstan dimerizasyon yo nan espèk yo nan 293.15 K.

Alkòl yo deplase ni pozisyon ni entansite aparan, men yo pa elimine agregasyon. Nan yon konparezon prensipal nan 31.3 micromolar ak tanperati chanm, ki rapòte nan yon etid sou sòlvan pou ble metilèn, maksimòm nan longèdonn ki pi long lan te 665 nm nan dlo men 655 nm nan metanòl, ak valè aparan pou solisyon total la toupre 37,100 nan dlo ak 60,800 nan metanòl. Yon validasyon apa nan etanòl absoli nan 298 K te bay yon maksimòm nan 655 nm ak epsilon toupre 68,000.

Chanjman pH òdinè deplase espèk la mwens pase anpil pwotokòl sipoze. Revizyon kritik yo site pi wo a rapòte ke soti nan anviwon pH 2 rive pH 12, maksimòm nan te rete toupre 665 nm, ak sèlman ti chanjman nan entansite jiska pH 11. Kalite tanpon an ak fòs iyonik la ka chanje rezilta yo otan ke pH nominal la, kidonk note tanpon ak sèl ou itilize toutbon yo, pa sèlman sa pH-mèt la li. Asid fò oswa baz fò se yon ka apa, paske koloran an ka sibi yon chanjman chimik olye de yon asosiyasyon revèsib. Tanperati ak sèl deplase ekilib la tou; se poutèt sa etid 2020 sou dlo a te varye toule de volontèman.

Fè mezi pou chif la rete valab

Travay kantitatif baze sou relasyon Beer Lambert la: absorbans egal epsilon miltipliye pa konsantrasyon miltipliye pa longè chemen optik la, ansanm ak prèv ke entèval lineyè a vrèman respekte nan kondisyon ou yo.

Sèvi ak yon kivèt 1 cm pou travay nan konsantrasyon ki ba sou echèl micromolar. Avèk epsilon toupre 82,000, 5 micromolar bay yon absorbans toupre 0.41 epi 10 micromolar bay anviwon 0.82. Pou mezi ki konsantre sou monomè nan dlo sèlman, rete toupre oswa anba anviwon 5 a 7 micromolar pi pridan pase kalibre byen fon nan plizyè dizèn micromolar. Pou solisyon manman konsantre, diminye longè chemen optik la olye ou aksepte yon absorbans ki byen pi wo pase 1.

Fè mezi blan an ak yon matris ki idantik: menm kalite dlo, menm fraksyon ko-sòlvan, menm tanpon ak menm sèl, san koloran. Prepare estanda kalibrasyon yo nan menm matris sa a ak nan menm tanperati a. Pandan devlopman an, eskane tout entèval vizib la, depreferans anviwon 550 a 750 nm, olye ou li yon sèl longèdonn. Swiv fòm nan, pa sèlman wotè a. Si dilisyon an seri chanje fòm nòmalize a, sistèm nan depann chimikman de konsantrasyon an. Yon maksimòm ki estab ak yon rapò 610 a 665 nm ki estab se prèv pi solid pou yon entèval akseptab pase yon R kare ki wo poukont li.

Dokimante fòm reyaktif la. Materyèl komèsyal la ka klori metiltioninyòm san dlo oswa yon idrat tankou triidrat la, kidonk mas molè ou itilize pou kalkile solisyon manman yo dwe koresponn ak sa ki nan boutèy la toutbon. Etap sa a poukont li esplike yon pati nan dezakò ant konsantrasyon molè nominal yo nan diferan laboratwa. Menm disiplin sa a nesesè lè rezilta yo sèvi nan kalkil tès kantitatif, lè espèk yo soutni verifikasyon estabilite fòmilasyon, ak lè pwofil enpite yo mande yon revizyon pite ak espesifikasyon.

Rezime ki presize kondisyon yo

Sèvi ak tablo sa a kòm yon modèl depa pou yon dosye laboratwa, pa kòm yon sous konstan ou ka itilize youn nan plas lòt.

Longèdonn absorbans ble metilèn nan se konsa yon repons kout ki bezwen yon nòt eksplikatif long. Rapòte pik ou mezire a, nan solisyon ou mezire a, nan konsantrasyon ou mezire a. Abitid sa a anpeche yon valè ki soti nan yon solisyon akeuz dilye toupre 664 nm tounen yon fo konstan inivèsèl.