EMB agar વિરુદ્ધ MacConkey agar: મીડિયા પસંદગી અને અર્થઘટન

એક વિદ્યાર્થી એક જ પાણીના નમૂનાને બે પ્લેટ પર સ્ટ્રીક કરે છે. એક પર લીલી ધાતુસમાન ચમકવાળી ઘેરી કોલોનીઓ દેખાય છે. બીજી પર ધૂંધળા હેલોવાળી તેજસ્વી ગુલાબી કોલોનીઓ દેખાય છે. બંને પ્લેટમાં એક જ ટ્યુબમાંથી ઇનોક્યુલેશન કરવામાં આવ્યું હતું, બાજુબાજુ ઇન્ક્યુબેટ કરવામાં આવી હતી અને એક જ સમયે વાંચવામાં આવી હતી. વિદ્યાર્થી પૂછે છે કે કઈ પ્લેટ સાચી છે.

બંને પ્લેટ સાચી છે. તેઓ અલગ પ્રશ્નોના જવાબ આપે છે. ગૂંચવણ ત્યારે થાય છે જ્યારે આ બંને મીડિયાને આંતરડાના બેક્ટેરિયા માટે પરસ્પર બદલાવી શકાય તેવી સ્ક્રીન તરીકે માનવામાં આવે છે. તેમનો હેતુ સમાન છે: Gram negative એન્ટેરિક સજીવોને પસંદ કરવો અને lactose fermenters ને nonfermenters થી અલગ પાડવા. પરંતુ આ હેતુ તેઓ અલગ રસાયણશાસ્ત્ર અને અલગ દૃશ્યાત્મક તર્કથી સિદ્ધ કરે છે. આ બે મૂળભૂત ખ્યાલ સમજાઈ જાય પછી, પ્લેટની પસંદગી અને કોલોનીનું વાંચન નિયમિત પ્રક્રિયા બની જાય છે.

ટૂંકો જવાબ

EMB agar બે ડાય, eosin Y અને methylene blue, નો ઉપયોગ કરે છે, જે બે કામ કરે છે: તેઓ Gram positive વૃદ્ધિને દબાવે છે અને મજબૂત એસિડ ઉત્પાદકોની આસપાસ અવક્ષેપિત થઈ ઘેરી કોલોનીઓ બનાવે છે, જેમાં Escherichia coli માટે પરંપરાગત રીતે ધાતુસમાન લીલી ચમક જોવા મળે છે. MacConkey agar કામોને અલગ કરે છે: bile salts સાથે crystal violet Gram positives ને દબાવે છે, lactose fermentation માટે સબસ્ટ્રેટ આપે છે અને neutral red એસિડને ગુલાબી અથવા લાલ કોલોની તરીકે દર્શાવે છે. જો કાર્ય E. coli નું સ્પષ્ટ અનુમાનાત્મક પ્રદર્શન કરવાનો હોય, તો EMB ઉપયોગી છે. જો કાર્ય lactose fermenters ને nonfermenters થી સ્વચ્છ રીતે ગુલાબી સામે રંગહીન તરીકે અલગ પાડવાનું હોય, ખાસ કરીને stool અથવા urine workflow માં, તો MacConkey સામાન્ય રીતે વાંચવામાં વધુ સરળ છે. માત્ર રંગના આધારે કોઈ પણ પ્લેટ સજીવની ઓળખ કરતી નથી.

EMB: એકસાથે પસંદગી અને સંકેત આપતા ડાય

EMB નો ખ્યાલ પસંદગી અને સંકેત બંનેને એ જ અણુઓમાં સમાવે છે. ASM eosin methylene blue agar પ્રોટોકોલ EMB ને પસંદગીયુક્ત અને ભેદદર્શક બંને તરીકે વર્ણવે છે, જેમાં ડાયની જોડી ઘણા Gram positive સજીવોને અવરોધે છે, જ્યારે lactose fermentation ડાયના શોષણ અને અવક્ષેપને પ્રેરિત કરે છે. પ્રમાણભૂત Levine formulation માં peptone, lactose, phosphate, eosin Y, methylene blue અને agar હોય છે, જેમ કે Levine EMB agar માટેની FDA BAM પદ્ધતિ માં સૂચિબદ્ધ છે. નોંધો કે જૂની EMB recipes માં ક્યારેક lactose સાથે sucrose ઉમેરવામાં આવતું હતું, જ્યારે Levine EMB માં lactose હોય છે પરંતુ sucrose નથી, તેથી તમારી પ્રયોગશાળામાં કયું formulation સ્ટોકમાં છે તે નોંધો.

EMB વાંચવાનો અર્થ ડાયના વર્તનને વાંચવો છે. તીવ્ર lactose fermentation એટલું એસિડ ઉત્પન્ન કરે છે કે ભારે ડાય અવક્ષેપ થાય, જેથી E. coli ને ઘેરા blue black કેન્દ્રો મળે છે અને પરંપરાગત સ્થિતિમાં પ્રતિબિંબિત પ્રકાશમાં લીલી ધાતુસમાન ચમક દેખાય છે. Enterobacter અને Klebsiella જેવા નબળા fermenters સામાન્ય રીતે આ ચમક વગર ગુલાબીથી જાંબલી, mucoid કોલોનીઓ તરીકે ઉગે છે. Salmonella, Shigella અને Proteus જેવા nonfermenters સામાન્ય રીતે રંગહીન અથવા અર્ધપારદર્શક કોલોનીઓ તરીકે ઉગે છે, કારણ કે તેઓ ડાયને અવક્ષેપિત કરવા જરૂરી તીવ્ર એસિડ ઉત્પન્ન કરતા નથી. Gram positives સામાન્ય રીતે દબાય છે, જોકે દમનનું પ્રમાણ strain અને product પ્રમાણે બદલાય છે. સંપૂર્ણ ડાય તૈયારીનું રસાયણશાસ્ત્ર, જેમાં methylene blue પ્રથમ સ્થાને cationic stain તરીકે કેમ વર્તે છે તે પણ સામેલ છે, ડાય formulations ની અલગ ચર્ચાનો વિષય છે, અને સામાન્ય microscopy સંદર્ભ staining methods atlas માં આપવામાં આવ્યો છે. આ લેખ પ્લેટની પસંદગી અને વાંચન સુધી મર્યાદિત છે.

ઉપરનું આકૃતિચિત્ર illustrative છે. તે અપેક્ષિત દૃશ્યાત્મક તર્ક દર્શાવે છે: EMB પર ઘેરી ચમકદાર કોલોનીઓ સાથે ગુલાબી mucoid પ્રકારો અને ફિક્કા પ્રકારો, જ્યારે MacConkey પર ગુલાબી સામે ફિક્કા પ્રકારો. પેટર્ન શીખવા માટે તેનો ઉપયોગ કરો, પછી દરેક નિષ્કર્ષને photographed controls અને તમારી bench પરના ચોક્કસ medium માટેના product insert સામે પુષ્ટિ કરો.

MacConkey: અલગ કરેલા કાર્યો, વધુ સરળ દૃશ્ય નિયમ

MacConkey નો ખ્યાલ દરેક કાર્યને અલગ ingredient આપે છે. ASM MacConkey agar પ્રોટોકોલ એ જ પસંદગીયુક્ત અને ભેદદર્શક માળખું રજૂ કરે છે, અને MacConkey agar માટેની FDA BAM પદ્ધતિ કાર્યરત ઘટકો સૂચવે છે: peptones, lactose, bile salts, salt, neutral red, crystal violet અને agar. Bile salts સાથે crystal violet Gram positives સામે પસંદગી કરે છે. Lactose fermentation માટેનું substrate પૂરું પાડે છે. Neutral red pH reporter તરીકે કાર્ય કરે છે અને જ્યાં એસિડ બને છે ત્યાં ગુલાબીથી લાલ બને છે; મજબૂત fermenters ની આસપાસ ક્યારેક અવક્ષેપિત bile પણ જોવા મળે છે.

વાંચવાનો નિયમ ઇરાદાપૂર્વક સરળ છે: ગુલાબી એટલે lactose fermenter, જ્યારે રંગહીન અથવા ફિક્કું એટલે nonfermenter. E. coli ગુલાબીથી લાલ દેખાય છે, ઘણીવાર bile precipitate halo સાથે. Klebsiella અને Enterobacter ગુલાબી દેખાય છે અને તેમની capsules ના કારણે ઘણીવાર mucoid હોય છે. Salmonella, Shigella, Proteus અને ઘણા અન્ય Gram negative rods રંગહીન દેખાય છે. શિક્ષણ પ્રયોગશાળામાં એક વધારાનો લાભ પણ મહત્વનો છે: bile salts સામાન્ય રીતે Proteus swarming ઘટાડે છે, તેથી nonselective media ની તુલનામાં MacConkey પર અલગ પડેલી કોલોનીઓ મેળવવી વધુ સરળ બને છે, જોકે દમન સંપૂર્ણ નથી અને જ્યાં swarming control મુખ્ય પ્રાથમિકતા હોય ત્યાં salt free alternatives ઉપલબ્ધ છે.

ડાય આ રીતે કેમ વર્તે છે તેનું molecular કારણ charge અને structure સાથે જોડાયેલું છે. Methylene blue એક cationic phenothiazine dye છે, જેના structure અને properties acidic bacterial surfaces માટે તેની affinity સમજાવે છે; EMB પર acid zones માં તે અવક્ષેપિત થાય ત્યારે પણ એ જ affinity કાર્ય કરે છે.

એક નજરમાં તુલના

ટેબલને નિર્ણય પ્રક્રિયા તરીકે વાંચો. જ્યારે અભ્યાસમાં વિદ્યાર્થીઓને fermentation strength નો gradient એક નાટકીય endpoint સાથે દેખાડવો હોય, ત્યારે EMB તે બતાવે છે. જ્યારે biochemical confirmation પહેલાં ઝડપી binary sort જરૂરી હોય, ત્યારે MacConkey તે બતાવે છે.

કયા નમૂના માટે કયું medium

presumptive fecal coliform અથવા E. coli recognition માટેના પાણીના અભ્યાસમાં EMB આકર્ષક છે કારણ કે તેની ચમક દૃશ્યાત્મક રીતે વિશિષ્ટ છે. MacConkey પણ enteric Gram negatives માટે ઉપયોગી છે અને પાણી પરીક્ષણમાં તેનો ઐતિહાસિક ઉપયોગ રહ્યો છે, પરંતુ કોઈ પણ પ્લેટ regulatory water method નું સ્થાન લેતી નથી; પરીક્ષણ પ્રમાણે તેમાં modified mTEC અથવા MI જેવા media નિર્ધારિત હોઈ શકે છે. તમારી પ્રયોગશાળાએ જે પદ્ધતિ અનુસરવી જરૂરી છે તે તપાસો.

fermenters ને nonfermenters થી અલગ પાડવા માટેના stool style separations માં, આ બંનેમાંથી MacConkey સામાન્ય રીતે વધુ ઉપયોગી છે. Salmonella અથવા Shigella માટેના પ્રાયોગિક stool work માં માત્ર MacConkey પર આધાર રાખવાને બદલે સામાન્ય રીતે XLD અથવા Hektoen enteric જેવા વધુ પસંદગીયુક્ત enteric media ઉમેરવામાં આવે છે.

clinical workflow નું અનુકરણ કરતા urine style teaching માટે MacConkey ને blood agar સાથે જોડો. MacConkey શરૂઆતનું Gram negative વિભાજન આપે છે, જ્યારે blood agar એવા સજીવોને પુનઃપ્રાપ્ત કરે છે જેને MacConkey દબાવે છે. urine culture setup ના clinical વર્ણનોમાં આ pairing પ્રમાણભૂત છે.

માત્ર ખ્યાલ શીખવવા માટે બંને ચલાવો. EMB શીખવે છે કે fermentation strength મહત્વપૂર્ણ છે અને એક જ molecule બે ભૂમિકાઓ ભજવી શકે છે. MacConkey modular design શીખવે છે: selector, substrate અને reporter ને અલગ રાખવામાં આવે છે. જે વિદ્યાર્થીઓ known E. coli, known Klebsiella aerogenes અને known Salmonella ને બંને media પર બાજુબાજુ streak કરે છે, તેઓ પછી આ બે તર્કને ભાગ્યે જ ગૂંચવે છે.

દરેક ટર્મમાં ફરી થતી વાંચનની ભૂલો

સૌથી સામાન્ય ભૂલ માત્ર રંગના આધારે ઓળખ કરવી છે. MacConkey પર ગુલાબી રંગ E. coli, Klebsiella, Enterobacter અથવા કોઈ અન્ય fermenter હોઈ શકે છે. રંગહીન કોલોની Salmonella, Shigella, Proteus, Pseudomonas અથવા કોઈ અન્ય nonfermenter હોઈ શકે છે. રંગ એક screening phenotype છે, જે Gram stain, oxidase, biochemical panels અથવા instrument identification જેવા confirmatory work તરફ દોરી જાય છે; તે species નું નામ નથી.

બીજી ભૂલ ગેરહાજર ચમકને વધારે અર્થ આપવાની છે. કેટલીક સાચી E. coli કોલોનીઓ, ખાસ કરીને isolated colonies, EMB પર ખૂબ ઓછી અથવા કોઈ metallic sheen ઉત્પન્ન કરતી નથી. sheen ન હોવું E. coli ને બહાર નથી કરતું, અને sheen હોવું તેને સાબિત પણ નથી કરતું. sheen ને presumptive clue તરીકે જ લો.

ત્રીજી ભૂલ અલગ ઉંમરની પ્લેટોની તુલના કરવાની છે. Delayed lactose fermenters લાંબી incubation પછી MacConkey પર ગુલાબી થઈ શકે છે, જેના કારણે fermenter સામે nonfermenter નું સ્પષ્ટ વિભાજન ધૂંધળું બને છે. પ્રયોગશાળાએ નિર્ધારિત કરેલા સમયે વાંચો અને પરિણામ સાથે incubation time નોંધો.

ચોથી ભૂલ mixed growth ને એક જ organism તરીકે વાંચવાની છે. રંગહીન કોલોનીની બાજુમાં આવેલી ગુલાબી કોલોની બે phenotypes દર્શાવે છે, કોઈ મધ્યવર્તી સ્વરૂપ નહીં. સારી રીતે isolated colonies પસંદ કરો અને દરેક morphotype પર અલગથી કામ કરો. Mucoid texture પણ આવું જ ફંદું ઊભું કરે છે: Klebsiella અને Enterobacter બંને mucoid દેખાઈ શકે છે, તેથી capsule એકલું નામ નક્કી કરી શકતું નથી. જે organism ને પહેલાં Enterobacter aerogenes તરીકે શીખવવામાં આવતો હતો તે હવે Klebsiella aerogenes તરીકે વર્ગીકૃત છે, જે સમજાવે છે કે જૂના charts અને નવા labels વચ્ચે અસંગતિ કેમ દેખાય છે.

Controls અને અંતિમ નિયમ

દરેક session માં photographed અથવા fresh controls ચલાવો: strong fermenter reaction માટે E. coli, classic sheen વગર mucoid fermentation માટે Klebsiella aerogenes, colorless nonfermenter reaction માટે Salmonella strain અને તમારા ચોક્કસ product પર Gram positive suppression ની પુષ્ટિ માટે Staphylococcus aureus. strain numbers અને acceptance criteria ને manufacturer insert સાથે મેળવો, કારણ કે bile, crystal violet અને dye content અનુસાર selectivity બદલાય છે.

bench પર એક વાક્ય યાદ રાખો. EMB એવા ડાયનો ઉપયોગ કરે છે જે પસંદગી પણ કરે છે અને સંકેત પણ આપે છે, જેના કારણે વધુ સૂક્ષ્મ વાંચનની કિંમતે નાટકીય E. coli signal મળે છે. MacConkey પસંદગી અને સંકેત આપવાની ભૂમિકાઓ અલગ કરે છે, જેના કારણે fermentation ની ઓછી વિગતની કિંમતે સરળ ગુલાબી સામે ફિક્કું વિભાજન મળે છે. જે પ્રશ્ન પૂછવામાં આવ્યો છે તેના ખ્યાલને અનુરૂપ medium પસંદ કરો, યોગ્ય tests દ્વારા રંગની પુષ્ટિ કરો, અને પછી બંને પ્લેટો એકબીજા સાથે સ્પર્ધા કરવાનું છોડીને પરસ્પર પૂરક બની જાય છે.