Gorm meitiléine nua agus dathú reiticulicítí: ruaim ar leith agus modh do chealla beo

Ullmhaíonn mac léinn comhaireamh reiticulicítí, ordaíonn sé gorm meitiléine, meascann sé le fuil é, agus ní fheiceann sé beagnach aon rud. Úsáideann comhscoláire buidéal ar a bhfuil an lipéad gorm meitiléine nua agus faigheann sé filiméid ghorma shoiléire laistigh de chuid de na fuilchealla dearga. Glacann an chéad mhac léinn leis go bhfuil an dara buidéal níos úire nó níos tiubhaithe. Ní hé ceachtar acu sin atá i gceist. Tá móilín difriúil ann.

Is í an earráid choincheapúil seo is cúis leis an gcuid is mó den mhearbhall sa réimse seo. Tugann an t-ainm le tuiscint gur baisc fheabhsaithe de ghorm meitiléine é gorm meitiléine nua. Deir an cheimic a mhalairt. Is ruaim feinitiaisín ar leith é gorm meitiléine nua N, a bhfuil a uimhir Colour Index féin, a phatrún ionadaíochta féin, agus a ról caighdeánaithe féin sa haemaiteolaíocht aige. Nuair a bhíonn an t-idirdhealú sin soiléir, bíonn an chuid eile den mhodh simplí: cén fáth ar gá do na cealla a bheith beo agus iad á ndathú, cad a áirítear mar reiticulicít, cén áit a mbaineann coirp Heinz leis, agus cathain a thagann gorm créisile lonrach i gceist.

An freagra gairid

Aithnítear gorm meitiléine nua N, an t-imoibrí haemaiteolaíochta, de ghnáth mar Basic Blue 24 i dtaifead PubChem do ghorm meitiléine nua, C.I. 52030, CAS 1934-16-3, foirmle C18H22ClN3S. Is é atá i ngnáthghorm meitiléine ná clóiríd meitiltionainiam, Basic Blue 9, ina thaifead PubChem, C.I. 52015, CAS 61-73-4, foirmle C16H18ClN3S. Ó thaobh struchtúir de, tá dhá ghrúpa meitile ar an bhfáinne agus taobhshlabhraí eitileaimíne ag gorm meitiléine nua, áit a bhfuil grúpaí démheitileaimíne ag gorm meitiléine. Athraíonn an difríocht sin an t-iompar dathúcháin. Déanann téacsanna haemaiteolaíochta cur síos ar ghnáthghorm meitiléine mar ruaim réasúnta lag do reiticulicítí agus ar ghorm meitiléine nua mar ruaim a thugann dath níos doimhne agus níos aonfhoirmí, comparáid a ndéantar achoimre uirthi in ábhar ScienceDirect ar ghorm meitiléine nua.

Is ruaim supravítéal é gorm meitiléine nua, go deimhin. Ciallaíonn dathú supravítéal cealla beo a dhathú tar éis iad a bhaint den chorp agus roimh fhosúchán, mar a shainmhínítear in athbhreithniú NCBI ar phrionsabail an dathúcháin supravítéil. Baineann gorm meitiléine nua agus gorm créisile lonrach araon leis an gcatagóir seo, agus clúdaíonn caighdeán reiticulicítí CLSI gorm meitiléine nua go sainráite mar ruaim supravítéal. Uaireanta cuireann mic léinn é seo sa chatagóir chéanna le dathú Romanowsky ar smearaí fosaithe. Ní oibríonn an tsamhail mheabhrach sin anseo. Má dhéantar fosúchán ar dtús, ní oibríonn an modh a thuilleadh.

Do léitheoirí atá ag fiosrú ainmneacha ruaimeanna gaolmhara, clúdaíonn gorm meitile i gcomparáid le gorm meitiléine mearbhall eile atá níos leithne, idir ruaim thrí-airilmheatáin anianach agus an teaghlach feinitiaisín caitianach. Cuireann an forbhreathnú ar dhathú sa tsaotharlann obair supravítéal i gcomhthéacs modhanna smearaí fosaithe, agus léiríonn an treoir ar mhoirfeolaíocht fuilcheall an áit a mbaineann measúnú reiticulicítí leis an gcomhaireamh difreálach níos leithne.

Rabhadh amháin maidir le catalóga: tá foirm ar leith de ghorm meitiléine nua ann mar shalann dúbailte le clóiríd since, faoi CAS 6586-05-6. Dá bhrí sin, ba cheart foirm an tsalainn agus an soláthraí a ainmniú sa rannán modhanna, seachas an t-ainm coitianta amháin.

Cad a dhéanann dathú supravítéal i ndáiríre

Is fuilcheall dearg óg é reiticulicít a bhfuil a núicléas caillte aige ach a choinníonn RNA ribeasómach iarmharach. In ullmhóid fhliuch neamhdhaite, ní bhíonn an RNA sin le feiceáil. Téann an ruaim supravítéal isteach sa chill bheo agus deascann sí an RNA sin nó comhiomlánaíonn sí é ina ghráinníní agus ina fhiliméid ghorma, an t-ábhar reiticileafhiliméadach a fheictear faoi thumadh in ola. Mar sin, is táirge den dathú é an líonra, ní creatlach réamhfhoirmithe atá ag fanacht le dath. Sin an fáth a bhfuil athróga an phrótacail — tiúchan na ruaime, maolán, cóimheas na fola leis an ruaim, teocht, am — chomh tábhachtach le hainm na ruaime.

Is é an toradh praiticiúil air seo ná ord docht oibríochtaí: measc fuil fhrith-théachta leis an ruaim ar dtús, gor í, ansin déan smearaí agus scrúdaigh iad gan fhosúchán ná frithdhathú. Scriosann fosúchán roimh dhathú, nó frithdhathú a cheileann filiméid laga, an fhaisnéis ar a mbraitheann an comhaireamh.

Prótacal oibre do reiticulicítí le gorm meitiléine nua

Níl aon fhoirmliú uilíoch amháin ann, mar sin tuairiscigh an ceann a úsáideadh. Léiríonn trí leagan doiciméadaithe an raon.

Úsáideann an nós imeachta clasaiceach den chineál Brecher thart ar 0.5 faoin gcéad de ghorm meitiléine nua le hocsaileáit photaisiam, measctha i dtoirteanna comhionanna le fuil EDTA atá measctha go maith, agus gortha ar feadh thart ar 10 go 15 nóiméad ag teocht an tseomra. Tar éis athmheascadh réidh, ullmhaítear smearaí tanaí ar chruth dinge, triomaítear san aer iad, agus scrúdaítear iad gan fhosúchán faoin oibiachtív ola 100x. Déanann nós imeachta NCBI do chomhaireamh reiticulicítí cur síos ar an sreabhadh oibre seo agus ar an bhfráma comhairimh a úsáidtear leis.

Úsáideann leagan Dacie agus Lewis 1.0 faoin gcéad de ghorm meitiléine nua i dtuaslagán salanda citráite, measctha le 2 go 4 oiread dá thoirt d'fhuil agus coinnithe ag 37 C ar feadh 15 go 20 nóiméad sula ndéantar smearaí. D'úsáid cur chun feidhme comhchuibhithe le déanaí do nós imeachta CLSI H44 tuaslagán níos caola, 0.1 faoin gcéad, i dtuaslagán salanda maolánaithe le fosfáit ag pH 7.4, le gor ag 20 C ar feadh 10 nóiméad agus gan fhosúchán, mar a tuairiscíodh i staidéar comhchuibhithe NMB 2026.

Tá na rialacha comhairimh mar an gcéanna sna leaganacha éagsúla. Áirigh cill mar reiticulicít nuair atá dhá ghráinnín ghorma dhaite ar leith nó dhá mhír filiméid ar leith inti ar a laghad; fágann sé sin taiscí ruaime aonair as an áireamh. Comhair 1,000 fuilcheall dearg ar a laghad i ngnáthobair agus tuairiscigh reiticulicítí mar chéatadán. Ag céatadáin ísle, teastaíonn níos mó ceall de réir na staitisticí. Tugann athbhreithniú ar mhodheolaíocht CLSI H44 faoi deara, nuair atá reiticulicítí gar do 1 faoin gcéad, go dteastaíonn thart ar 4,400 cill chun an t-athrú sa chomhaireamh a thabhairt go 5 faoin gcéad, in athbhreithniú CLSI H44 ag De Gruyter. Fágann diosca súilphíosa Miller go bhfuil comhairimh mhóra praiticiúil. Scag an ruaim nó ullmhaigh as an nua í, mar go ndéanann deascán aithris ar chuimsiúcháin ghráinneacha.

Coirp Heinz san ullmhóid chéanna

Is féidir leis an smearadh supravítéal céanna coirp Heinz a léiriú freisin. Is comhiomláin de haemaglóibin ocsaídithe agus dínádúraithe iad seo, seachas RNA iarmharach. In ullmhóidí le gorm meitiléine nua, feictear iad mar choirp chruinne, go minic ina n-aonar agus gar don scannán, agus iad daite gorm níos éadroime ná an t-ábhar reiticileafhiliméadach. Ní mhaireann siad go maith trí fhosúchán agus frithdhathú, mar sin scrúdaigh an smearadh neamhfhosaithe. Rinne prótacal le déanaí, a d'úsáid 20 micrilítear d'fhuil EDTA le 20 micrilítear de ghorm meitiléine nua 1 faoin gcéad agus gor ar feadh 15 nóiméad, cainníochtú ar chealla a raibh coirp Heinz iontu i measc 250 eiritricít, i staidéar PMC a thuairiscigh an nós imeachta sin.

Cuireann dhá idirdhealú cosc ar mhíléamh. Ar an gcéad dul síos, dathaíonn corcair meitile agus corcair criostail coirp Heinz níos déine ná gorm meitiléine nua, mar a thugtar faoi deara in ábhar ScienceDirect ar choirp Heinz. Is rogha áisiúil é gorm meitiléine nua nuair a mheasúnaítear reiticulicítí agus coirp Heinz le chéile, ach ní hé an ruaim thiomnaithe is láidre do choirp Heinz é. Ar an dara dul síos, cruthaíonn cuimsiúcháin HbH i dtréith na talaiséime alfa iliomad poncanna míne ar fud na cille tar éis dathú supravítéal, ach bíonn níos lú de na coirp Heinz chlasaiceacha ann, bíonn siad níos mó, agus is minic a bhíonn siad bainteach leis an scannán. Is é taisce ruaime an tríú rud a dhéanann aithris orthu: luíonn sé lasmuigh de phlána fócasach na gceall agus athraíonn sé ó réimse radhairc go réimse radhairc.

Gorm créisile lonrach i gcomparáid le gorm meitiléine nua

Is ruaimeanna supravítéala do reiticulicítí iad an dá ruaim, ach tugann an caighdeánú tús áite do cheann amháin acu. Ainmníonn modh reiticulicítí CLSI H44-A2, a forbraíodh i gcomhar leis an gComhairle Idirnáisiúnta um Chaighdeánú sa Haemaiteolaíocht agus atá liostaithe ar leathanach chaighdeán CLSI H44, dathú fola EDTA le gorm meitiléine nua mar an modh comparáideach láimhe. Tá an teagasc clasaiceach haemaiteolaíochta ar aon intinn maidir leis an gcuma: tugann gorm meitiléine nua dathú níos doimhne agus níos aonfhoirmí ar fhiliméid, agus athraíonn gorm créisile lonrach níos mó idir baisceanna agus samplaí.

Ní mór an stádas sin a cháiliú. Glacann treoirlíne ICSH um mheasúnú anailíseoirí le micreascópacht láimhe le gorm meitiléine nua mar chur chuige comparáide tagartha, ach deir sí go bhfuil sé suibiachtúil agus réasúnta neamhbheacht, agus gur fearr nósanna imeachta tagartha cíteaméadrachta sreafa nuair atá siad ar fáil. Fuair comparáid in 2022 ar 100 sampla claonadh níos ísle i gcoinne an anailíseora a úsáideadh le gorm créisile lonrach ná le gorm meitiléine nua, mar a tuairiscíodh i gcomparáid PMC ar mhodhanna dathúcháin. Seo achoimre inchosanta do mhic léinn: úsáid gorm meitiléine nua mar an comparadóir láimhe caighdeánaithe, fíoraigh aon mhodh áitiúil le gorm créisile lonrach ina choinne nó i gcoinne uathoibrithe, agus bí ag súil le scaipeadh níos leithne ó mhicreascópacht láimhe i gceachtar cás. Mhol litríocht chaighdeánaithe níos sine Azure B íonaithe freisin mar rogha mhalartach a bhí níos glaine ó thaobh ceimice de, toisc go raibh éagsúlacht idir baisceanna ruaime tráchtála, i staidéar Marshall ar Azure B. Míníonn sé sin cén fáth a dtagann grád an imoibrí chun cinn fós i bplé ar mhodhanna.

Na hearráidí coitianta a sheachaint

Is iad ceithre bhotún is cúis leis an gcuid is mó de na hullmhóidí a dteipeann orthu. Má ordaítear gnáthghorm meitiléine in ionad gorm meitiléine nua N, bíonn dathú lag ann de bharr na ceimice, ní de bharr na teicníce. Má dhéantar fosúchán nó frithdhathú sula léitear an smearadh, baintear an comhartha supravítéal. Má áirítear deascán ruaime mar ghráinníní, méadaítear an toradh go saorga; cuireann riail an dá ghráinnín agus ruaim scagtha cosc air sin. Má chomhairtear róbheagán ceall ag céatadáin ísle reiticulicítí, faightear uimhir a bhfuil cuma bheacht uirthi ach a bhfuil teorainneacha muiníne leathana aici. Tá an comhartha céanna ag gach earráid: cuireann an micreascópóir an milleán ar an micreascóp as rud a socraíodh ag céim an imoibrí.