Cén fáth a n-úsáidtear gorm meitiléine mar fhrithdhathán i ndathú aigéadseasmhach

Scrúdaíonn teicneoir smearadh spútam tar éis na sraithe iomláine dathúcháin. Seasann slata dearga amach i gcoinne réimse ghoirm, agus eisítear tuairisc ag rá gur breathnaíodh baicillí aigéadseasmhacha. An lá dár gcionn, taispeánann sleamhnán eile réimse gorm aonfhoirmeach gan aon slata dearga, agus tuairiscítear é mar thoradh diúltach don eitinn. Maíonn ceann de na tuairiscí sin níos mó ná mar a thacaíonn an sleamhnán leis, agus ní hé an chéad cheann é.

Baineann an mearbhall leis an gcoincheap. Chaith an teicneoir leis an dathán gorm mar chuid den cheimic bhratha, amhail is gur chuidigh gorm meitiléine leis na míceabaictéir a aimsiú. Níor chuidigh. Faoin am a dteagmhaíonn gorm meitiléine leis an sleamhnán, tá an tástáil thart cheana féin. Ní dhéanann an dathán ach an cúlra a dhathú ionas gur féidir an toradh a léamh. Míníonn an t-alt seo cuspóir ghorm meitiléine i ndathú aigéadseasmhach, cén fáth a bhfuil sé gorm seachas aon dath eile, agus cad iad na conclúidí is féidir a bhaint as dearg i gcoinne gorm.

An freagra gairid

Is tástáil dhifreálach é dathú aigéadseasmhach atá bunaithe ar thrí smaoineamh. Brúitear fúicsin charbólach, an príomhdhathán, isteach i ngach cill, míceabaictéir chéiriúla san áireamh. Baineann aigéad-alcól, an dí dhathaitheoir, an dathán dearg as gnáthchealla ach ní éiríonn leis é a bhaint as cealla aigéadseasmhacha. Ansin dathaíonn gorm meitiléine, an frithdhathán, gach rud ar bhain an dí dhathaitheoir an dathán as, ionas go mbíonn cealla neamh-aigéadseasmhacha, cealla an óstaigh agus smionagar gorm, agus go bhfanann baicillí aigéadseasmhacha dearg. Soláthraíonn an frithdhathán codarsnacht. Níl aon pháirt aige sa cheimic a fhágann go bhfuil cill aigéadseasmhach.

Cad a dhéanann gach céim

Taispeánann an léaráid thíos roinnt na hoibre. Léigh í ó chlé go deas mar nós imeachta, agus léigh an stiall íochtair mar mheabhrúchán go gcuireann gach teaghlach dathúcháin ceist dhifriúil.

Tagann an treá ar dtús. Seasann míceabaictéir in aghaidh gnáthdhathán uiscí mar go bhfuil a gclúdach thar a bheith hidreafóbach, agus mar sin cuireann an prótacal iallach ar an dathán dul isteach. Sa mhodh Ziehl-Neelsen, tiomáineann téamh go dtí go dtagann gal fúicsin charbólach ina bhfuil feanól tríd an mballa céiriúil. I modh fuar Kinyoun, úsáidtear foirmliú príomhdhatháin i bhfad níos láidre in áit teasa, agus cuirtear dromchlaghníomhaithe le roinnt leaganacha modhnaithe gan teas. Déanann prótacail dathaithe aigéadseasmhaigh Chumann Meiriceánach na Micribhitheolaíochta an dá fhoirmliú a dhoiciméadú taobh le taobh, agus tá an difríocht tiúchana suntasach: thart ar 0.3 g d'fhúicsin bhunata in aghaidh 100 mL don mhodh téite i gcomparáid le thart ar 4 g don mhodh fuar.

Tagann an difreáil sa dara háit. Níonn aigéad-alcól, ar meascán é de ghnáth de 3 mL d'aigéad hidreaclórach tiubhaithe i 97 mL d'eatánól 95 faoin gcéad, an dathán dearg amach as gach cill nach dtugann a balla aon fhriotaíocht ar leith. Coinníonn cealla a bhfuil an clúdach lipid míceabaictéarach slán acu an dathán. Seo í an chéim ar a mbraitheann an modh iomlán, agus an chéim is íogaire don teicníc, mar a phléitear thíos.

Tagann an chodarsnacht ar deireadh. Tá cealla dearga aigéadseasmhacha ar an sleamhnán anois, ar chúlra beagnach gan dath de chealla ar baineadh an dathán astu. Déanann gorm meitiléine ag 0.3 faoin gcéad w/v an cúlra sin infheicthe arís, i ndath atá chomh fada ó dhearg agus is féidir. Is gearr an frithdhathú, 20 go 30 soicind de ghnáth sa mhodh téite agus suas le cúpla nóiméad i roinnt leaganacha den mhodh fuar, agus braitheann an t-am ar an bprótacal seachas ar airí de chuid an datháin féin.

Cén fáth an dathán seo, agus cén fáth gorm

Is dathán bunata caitiúnach é gorm meitiléine, rud a chiallaíonn go bhfuil lucht deimhneach ar a ian daite agus go gceanglaíonn sé de dhromchlaí luchtaithe go diúltach na mbaictéar dí dhathaithe, chealla an óstaigh agus an smionagair. Déanann Micribhitheolaíocht OpenStax cur síos ar loighic seo an luchta mar phrionsabal ginearálta na ndathán bunata. Ach níl gorm meitiléine uathúil ó thaobh na ceimice de anseo. Is datháin bhunata iad vialaít chriostail agus safrainín freisin. Rogha optúil atá ann, ní rogha cheimiceach.

Teastaíonn cúlra i lí chodarsnach ó na slata dearga, agus is é gorm an dath is úsáidí i gcodarsnacht le dearg don mhicreascópacht réimse geal. Droch-fhrithdhathán a bheadh i safrainín mar go bhfuil a dath deiridh bándearg-dearg róchosúil leis an bhfúicsin charbólach a coinníodh, rud a scriosfadh an t-idirdhealú a chruthaigh an nós imeachta. Thabharfadh vialaít chriostail cúlra dorcha corcra a rachadh in iomaíocht leis na baicillí tanaí dearga ar son na hairde. Is é ionadú an fhianaise is láidre gur codarsnacht seachas ceimic atá i gceist: úsáidtear frithdhatháin ghlasa amhail glas malachíte agus glas briliante i roinnt prótacal tréidliachta agus modhnaithe, agus oibríonn an tástáil fós, mar go ndéanann aon lí atá soiléir difriúil an obair chéanna.

Leanann dhá impleacht phraiticiúla as sin. Ar dtús, ní shonraíonn an t-oideas caighdeánach aon choigeartú pH; ná cuir an tuaslagán simplí uiscí seo de 0.3 faoin gcéad amú le foirmlithe alcaileacha amhail gorm meitiléine Loeffler, a bhaineann le coincheap dathúcháin eile. Sa dara háit, déanann barraíocht dochar. Tugann litríocht na histeolaíochta rabhadh sonrach gur féidir le cúlra gorm ródhlúth líon beag baicillí a cheilt, agus mar sin má fhágtar an dathán ar an sleamhnán níos faide ná mar a cheadaíonn an prótacal, cailltear inléiteacht gan aon tairbhe.

Ceimic an bhalla a fhágann gur féidir an tástáil a dhéanamh

Is i gclúdach an mhíceabaictéir atá an chúis a ndéanann aigéad-alcól idirdhealú. Is é an coimpléasc mícóilil-arabinogalactán-peiptídeaglacán a chroílár struchtúrach: peiptídeaglacán nasctha le harabinogalactán a bhfuil aigéid mhícólacha le slabhraí an-fhada ar a fhoircinn sheachtracha, agus míceascannán seachtrach saibhir i lipidí á fhoirmiú acu, a bhfuil tréscaoilteacht an-íseal aige. Tugann an t-athbhreithniú ar scannán seachtrach na míceabaictéar mionsonraí faoin struchtúr seo. Oibríonn an bac sa dá threo. Cuireann sé in aghaidh iontráil an datháin, agus sin an fáth a dteastaíonn teas nó príomhdhathán níos láidre don treá, agus cuireann sé in aghaidh eastóscadh an datháin, agus sin an fáth nach n-éiríonn le haigéad-alcól fúicsin charbólach a bhaint amach nuair atá sí istigh. Níl an clúdach seo ag gnáthbhaictéir agus cailleann siad an dathán. Dá bhrí sin, is fearr aigéadseasmhacht a thuiscint mar fheiniméan bacainne lipidí, seachas mar cheangal ceimiceach idir fúicsin agus aigéad mícólach.

Míníonn an cheimic seo ceist choitianta freisin: glacann míceabaictéir dathú go lag agus go neamh-intuartha leis an modh Gram, agus uaireanta bíonn siad le feiceáil mar fhoirmeacha laga coirníneacha nó mar chruthanna taibhseacha gan dathú. Cuireann a mballa hidreafóbach srian le treá vialaíte criostail. Ní dathú Gram modhnaithe é dathú aigéadseasmhach. Is prionsabal difreálach eile é atá bunaithe ar airí eile den bhalla, mar a léiríonn an chomparáid idir dathú simplí agus dathú Gram don dá mhodh eile.

Trí mhodh, trí cheist

Maidir leis an teaghlach níos leithne de mhodhanna baictéaracha aon-datháin, féach atlas an dathaithe micreascópachta.

Cad nach féidir le dearg i gcoinne gorm a chruthú

Ciallaíonn slata dearga gur choinnigh na horgánaigh fúicsin charbólach tríd an gcéim aigéad-alcóil. Tá an toradh sin comhsheasmhach le Mycobacterium tuberculosis, ach tugann treoir dhiagnóiseach CDC don eitinn faoi deara go sainráite go bhfuil míceabaictéir eile aigéadseasmhach freisin, agus mar sin teastaíonn saothrú agus tástáil aigéad núicléasach chun an speiceas a shainaithint, ní dath.

Tagann formhór earráidí na teicníce chun cinn sa dá níochán. Fágann dí dhathú neamhleor ábhar an chúlra dearg agus méadaíonn sé an baol go léifear torthaí bréagdhearfacha. Baineann dí dhathú iomarcach príomhdhathán nach bhfuil á choinneáil go láidir agus cuireann sé le torthaí bréagdhiúltacha. Má chuirtear an iomarca frithdhatháin i bhfeidhm, ceiltear líon beag baicillí sa ghorm. Cruthaíonn smeartha tiubha, imoibrithe deasctha agus uisce sruthlaithe éillithe a n-artafactaí féin.

Tá an íogaireacht teoranta ag líon na n-orgánach, is cuma cé chomh cruinn agus atá an teicníc. Teastaíonn thart ar 5,000 go 10,000 baicill in aghaidh an mhillilítir spútam ón ngnáthmhicreascópacht smearaidh, agus chuir athbhreithnithe fianaise níos sine de chuid CDC íogaireacht an smearaidh ag thart ar 45 go 80 faoin gcéad i gcásanna scamhógacha a deimhníodh trí shaothrú. Dá bhrí sin, ní chuireann smearadh diúltach an eitinn as an áireamh riamh. Coinníonn treoir reatha CDC saothrú in éineacht le gach smearadh agus molann sí tástáil aimpliúcháin aigéad núicléasach ar eiseamal riospráide amháin ar a laghad nuair atá eitinn scamhógach á breithniú agus nuair a d'athródh an toradh bainistiú an cháis.

Baineann obair phraiticiúil le prótacail údaraithe

Ní thugann tuairiscí teagaisc, an t-alt seo san áireamh, údarú d'obair chliniciúil. Don obair ag binse na saotharlainne, lean nós imeachta oibriúcháin caighdeánach bailíochtaithe na saotharlainne atá ailínithe le doiciméid reatha CDC, APHL nó CLSI; taispeánann tagairt CDC do dhathú aigéadseasmhach atá ina chartlann Stacks an chaoi a sonraíonn nósanna imeachta den sórt sin imoibrithe agus léamha torthaí. Éilíonn obair le heiseamail eitinne srianadh: ullmhaítear smeartha i gcaibinéad sábháilteachta bitheolaíche mar go ngineann an t-ullmhúchán aerasóil agus splancadh, agus deir treoir CDC um shábháilteacht saotharlainne go bhféadfadh baicillí eitinne inmharthana a bheith fiú i smeartha atá fosaithe le teas agus nach mór iad a láimhseáil fós mar ábhar éillithe. Is meabhrúchán úsáideach é iontráil Leabharlann Íomhánna Sláinte Poiblí CDC ar smearadh fúicsine carbólaí agus gorm meitiléine a scrúdaíodh le haghaidh M. leprae ar raon an mhodha thar an eitinn: úsáidtear an chodarsnacht chéanna dearg ar ghorm cibé áit a bhfuil orgánaigh aigéadseasmhacha á lorg, agus is toradh ar fiú a thaifeadadh é léamh cúramach diúltach ann féin.

An sleamhnán críochnaithe a léamh

Léirítear fiúntas an fhrithdhatháin le linn scagtha. Úsáideann micreascópóir atá ag scanadh ar fhormhéadú íseal an cúlra gorm ar dtús chun cáilíocht an smearaidh a mheas: dáileadh cothrom ceall, cealla slána an óstaigh mar áis don fhócas, gan deascán trom. Tarraingíonn na struchtúir dhearga a d'fhéadfadh a bheith ina mbaicillí an tsúil ansin go díreach mar nach bhfuil aon rud eile ar an sleamhnán dearg. Déantar an deimhniú faoi thumoideachas ola, áit a léiríonn fíorbhaicillí na slata tanaí a mbeifí ag súil leo, atá beagán cuartha nó coirníneach uaireanta, seachas smionagar aonfhoirmeach datháin.

Socraíonn dathú an chúlra stór focal na tuairisce freisin. Tuairiscítear sleamhnán a bhfuil baicillí dearga air mar cheann ar ar breathnaíodh baicillí aigéadseasmhacha, agus is minic a thugtar grád leathchainníochtúil de réir scála na saotharlainne. Tuairiscítear sleamhnán nach bhfuil aon orgánaigh dhearga air mar cheann ar nár breathnaíodh aon bhaicillí aigéadseasmhacha, agus ní thuairiscítear riamh é mar thoradh diúltach don eitinn. Tá an t-idirdhealú tábhachtach mar go gcruthaíonn an réimse gorm gur oibrigh an dathú, gur ghlac cealla an frithdhathán agus go raibh an optaic leordhóthanach, ach ní deir sé aon rud faoi orgánaigh atá faoi bhun na teorann braite. Is toradh bailí faoin sleamhnán é réimse gorm folamh, ní breithiúnas faoin othar.

Cuimhnigh ar roinnt na hoibre agus beidh sé soiléir conas na tuairiscí a scríobh. Aimsíonn fúicsin charbólach orgánaigh a d'fhéadfadh a bheith aigéadseasmhach. Déanann aigéad-alcól an tástáil. Ní dhéanann gorm meitiléine ach an freagra a dhéanamh inléite: choinnigh dearg an dathán in aghaidh an aigéid, chaill gorm é. Tagann gach rud eile, an speiceas, líon na n-orgánach agus an bhrí chliniciúil, ó obair a théann níos faide ná an sleamhnán.