Agar eoisine agus goirm meitiléine: prionsabal, comhdhéanamh agus léirmhíniú

Tógann mac léinn pláta EMB as an ngoradán agus stopann sé. Tá roinnt coilíneachtaí beagnach dubh agus loinnir ghlas mhiotalach orthu. Tá dhá theoiric ag an mac léinn. Tá an saothrán éillithe, nó rinne na baictéir lí ghlas. Tá an dá theoiric mícheart, agus eascraíonn an dá cheann as an gcoincheap céanna nach bhfuil tuiscint aige air.

Is meán soladach saothraithe baictéar é pláta agair eoisine agus goirm meitiléine, a dtugtar agar EMB nó pláta emb air de ghnáth. Tá na ruaimeanna eoisin Y agus gorm meitiléine ann, chomh maith le cothaithigh agus agar. Ní buidéal ruaime é a caolaíodh isteach in agar. Is córas foirmlithe é ina gcuireann an dá ruaim chéanna bac ar orgánaigh nach dteastaíonn agus ina léiríonn siad coipeadh siúcra trí dhath na gcoilíneachtaí a athrú. Nuair atá an ról déach sin soiléir, ní fhéachtar ar na coilíneachtaí dorcha ná ar an loinnir ghlas a bhíonn ann ó am go chéile mar thimpistí a thuilleadh.

An freagra gairid

Tá agar EMB roghnaitheach in aghaidh go leor baictéar Gram-deimhneach agus idirdhealaitheach maidir le coipeadh láidir lachtóis. Cuireann eoisin Y agus gorm meitiléine bac ar bhaictéir Gram-deimhneacha, agus spreagann aigéad ó choipeadh lachtóis deascadh coimpléasc ruaime eoisine agus goirm meitiléine taobh istigh de na coilíneachtaí. Éiríonn táirgeoirí láidre aigéid, amhail go leor tréithchineálacha Escherichia coli, gorm-dhubh dorcha agus d'fhéadfadh loinnir ghlas mhiotalach a bheith orthu i solas frithchaite. Éiríonn coiptheoirí níos laige bándearg go corcra. Fanann neamhchoiptheoirí gan dath nó tréshoilseach. Is meán casta, neamhshainithe é EMB toisc go bhfuil peaptón ann, agus is é an peaptón a sholáthraíonn an chuid is mó den nítrigin. Níl sorbatól in EMB caighdeánach. Baineann sorbatól le tasc scagtha eile, agar MacConkey sorbatóil go príomha le haghaidh E. coli O157:H7.

Is meán é EMB, ní ruaim

Is é an t-ainm is cúis leis an gcéad mhearbhall. Tá cuma ainm tuaslagáin ruaimnithe ar eoisin agus gorm meitiléine, agus go deimhin is ruaim chaitiúnach é gorm meitiléine a úsáidtear sa mhicreascópacht agus chun baictéir a ruaimniú go simplí. Ach tá i bhfad níos mó ná ruaim thuaslagtha i bpláta EMB. Cuimsíonn an córas oibre bonn nítrigine agus cothaitheach, siúcra sonraithe coipthe, maolán fosfáite, oibreán soladaithe, agus an dá ruaim ag tiúchain ísle atá cothromaithe go cúramach.

Tá an chothromaíocht sin tábhachtach. Iompraíonn an gorm meitiléine céanna a dhathaíonn cealla ar shleamhnán ar bhealach difriúil nuair a chuirtear le heoisin Y é in agar ag pH atá beagnach neodrach agus nuair a nochtar é ansin d'aigéad áitiúil timpeall coilíneachta. Chun eolas a fháil ar an teaghlach ruaimeanna níos leithne agus ar an bhfáth a mbíonn ainmneacha catalóige míthreorach, féach gorm meitile i gcomparáid le gorm meitiléine. Chun a fheiceáil conas a chuirtear EMB i gcomparáid leis an bpríomh-mheán scagtha eintreach eile, féach agar EMB i gcomparáid le hagar MacConkey.

Dhá fheidhm in aon phéire ruaimeanna amháin

I dteagasc na micribhitheolaíochta, déantar idirdhealú idir dhá fheidhm atá ag meáin agus a chomhcheanglaíonn EMB. Cuireann meán roghnaitheach bac ar roinnt orgánach agus ligeann sé do spriocghrúpa fás. Ligeann meán idirdhealaitheach do na horgánaigh a fhásann frithghníomhartha a thaispeáint atá difriúil go sofheicthe, de ghnáth trí mheitibileacht aon tsubstráit amháin. Sainmhíníonn téacsanna caighdeánacha teagaisc, amhail caibidil mhicribhitheolaíochta OpenStax ar mheáin saothraithe, an dá théarma, agus is sampla caighdeánach é EMB de mheán a dhéanann an dá rud ag an am céanna.

Ar EMB, tagann an roghnú ó na ruaimeanna. Cuireann eoisin Y agus gorm meitiléine le chéile bac ar go leor orgánach Gram-deimhneach, agus mar sin bíonn orgánaigh eintreacha Gram-diúltacha chun tosaigh ar an bpláta. Déanann prótacal ASM maidir le hagar eoisine agus goirm meitiléine cur síos ar an meán mar mheán roghnaitheach agus idirdhealaitheach araon, agus leagann sé béim ar ghorm meitiléine mar an coscaire is láidre ar orgánaigh Gram-deimhneacha. Tá an cosc páirteach seachas iomlán, agus dá bhrí sin is féidir le coilíneachtaí beaga Gram-deimhneacha teacht tríd ó am go chéile.

Tagann an t-idirdhealú ón gcoipeadh agus ó na ruaimeanna céanna. Scaoileann coiptheoirí lachtóis aigéid timpeall na coilíneachta. De réir mar a thiteann an pH áitiúil, tagann eoisin agus gorm meitiléine le chéile i gcoimpléasc ruaime a dheascann sa choilíneacht. Tugann aigéad lag nó measartha fás bándearg, donn nó corcra. Tugann aigéad láidir fás gorm-dhubh dorcha agus, nuair atá an deascadh sách trom, an loinnir ghlas mhiotalach i solas frithchaite. Is éifeacht optúil ón ruaim dheasctha í an ghlas, ní lí a scaoileann E. coli. Seo slabhra úsáideach le cur de ghlanmheabhair: coipeadh siúcra, ansin aigéad, ansin pH níos ísle, ansin deascadh coimpléasc ruaime, ansin coilíneacht dhorcha, agus ansin loinnir fhéideartha.

Ná cuir an dá ról bunoscionn. Ní roghnaíonn EMB coiptheoirí lachtóis. Is é úsáid lachtóis an airí idirdhealaitheach. Is é cosc na ruaimeanna an airí roghnaitheach.

An meán sainithe nó neamhshainithe é agar EMB

Is minic a fhiafraíonn mic léinn an meán sainithe nó neamhshainithe é agar emb. Is é an freagra ná neamhshainithe, ar a dtugtar casta freisin.

Liostaíonn meán atá sainithe go ceimiceach gach speiceas ceimiceach ag tiúchan beacht. Tá ábhar bitheolaíoch díleáite nó eastóscán i meán casta nó neamhshainithe, agus athraíonn a chomhdhéanamh móilíneach ó bhaisc go baisc. Tá peaptón in EMB ag 10 g in aghaidh an lítir, agus is hidrealasáit phróitéine é peaptón ina bhfuil meascán de pheiptídí, aimínaigéid, mianraí agus tosca fáis. Ní fhágann sonrú mhéid an pheaptóin go bhfuil an meán sainithe, mar níl comhdhéanamh an pheaptóin féin sonraithe go hiomlán.

Tá an t-aicmiú seo neamhspleách ar an iompar roghnaitheach agus idirdhealaitheach. Tá EMB casta, roghnaitheach, idirdhealaitheach agus soladach ag an am céanna. Freagraíonn na ceithre lipéad sin ceithre cheist dhifriúla: cad atá ar eolas faoin gcomhdhéanamh, cé a ligtear dó fás, an bhfuil cuma dhifriúil ar na horgánaigh a fhásann, agus cén staid fhisiciúil atá ag an meán.

Foirmliú luaite: EMB Levine

Bíonn oidis éagsúil, mar sin taifead cén EMB atá i stoc ag an mbinse. Tá dhá fhoirmliú ceannasach sa teagasc agus i micribhitheolaíocht bia. Tá lachtós agus siúcrós araon sa leagan níos sine Holt-Harris-Teague. Tá lachtós gan siúcrós in EMB Levine, rud a fhágann go mbaineann a fhrithghníomh idirdhealaitheach go sonrach le lachtós. Liostaíonn modh FDA BAM le haghaidh agar EMB Levine comhdhéanamh Levine a úsáidtear i dtástáil bia.

Tugann prótacal ASM do mhic léinn oideas comhcheangailte de chineál Difco ina bhfuil 10 g peaptóin, 5 g lachtóis, 5 g siúcróis, 2 g fosfáite déphotáisiam, 13.5 g agair, 0.4 g eoisine Y, agus 0.065 g goirm meitiléine ag pH 7.2. Tugann ASM faoi deara go gcomhcheanglaíonn sé siúcraí Holt-Harris-Teague le peaptón agus fosfáit Levine. Tá tábhacht phraiticiúil leis an mionsonra sin. Ar EMB ina bhfuil dhá shiúcra, d'fhéadfadh coilíneacht dhorcha úsáid siúcróis, úsáid lachtóis, nó an dá cheann a léiriú. Ar EMB Levine, léiríonn coilíneacht dhorcha úsáid lachtóis. Léiríonn iompar Proteus an pointe: tugann ASM rabhadh gur féidir le Proteus loinnir a thaispeáint ar EMB ina bhfuil siúcrós nuair a chuirtear bac ar leathadh, ach ar EMB Levine fanann sé gan dath de ghnáth. Seiceáil an buidéal nó an bhileog treoracha sula ndéanann tú léirmhíniú.

Cé na comhábhair a sholáthraíonn nítrigin agus carbón

I gceist choitianta scrúdaithe, fiafraítear cé na comhábhair in agar emb a sholáthraíonn nítrigin. Is é peaptón an príomhfhreagra. Soláthraíonn peaptón peiptídí agus aimínaigéid, agus dá bhrí sin nítrigin orgánach, chomh maith le roinnt carbóin, mianraí agus tosca fáis. Is é bunús cothaitheach an phláta é.

Is é an carbaihiodráit a chuirtear leis d'aon ghnó an fhoinse carbóin agus fuinnimh don fhrithghníomh idirdhealaitheach: lachtós in EMB Levine, nó lachtós agus siúcrós in EMB ina bhfuil dhá shiúcra. Soláthraíonn fosfáit dhéphotáisiam fosfáit agus maolaíonn sí pH ionas nach n-íslíonn ach coipeadh suntasach an pH áitiúil sách mór chun an ruaim a dheascadh. Ní sholáthraíonn agar aon chothú chun na críche seo. Ní dhéanann sé ach an pláta a sholadú. Is iad eoisin Y agus gorm meitiléine an córas roghnaitheach agus léiritheach.

An pláta a léamh: cairt anótáilte

Léigh EMB faoi sholas frithchaite nó fiar, mar is é sin an bealach is fusa leis an loinnir a fheiceáil. Cuir gach sampla anaithnid i gcomparáid le rialuithe aitheanta ón mbaisc chéanna. Is athchruthú léiritheach í an chairt thíos chun an patrún a fhoghlaim, ní grianghraf de shaothráin bheo.

Úsáid an loighic léitheoireachta seo:

1. Coilíneachtaí gorm-dhubha dorcha, le loinnir ghlas mhiotalach sa phatrún clasaiceach: coipeadh láidir lachtóis, patrún toimhdeach E. coli. Deimhnigh é, mar ní chuireann easpa loinnire E. coli as an áireamh, agus is féidir le táirgeoirí láidre eile aigéid loinnir a thaispeáint ar roinnt foirmlithe.
2. Coilíneachtaí bándearga, donna, corcra, agus múcasacha go minic, gan an loinnir chlasaiceach: coipeadh níos moille nó níos laige, an gnáthphatrún Enterobacter agus Klebsiella.
3. Coilíneachtaí gan dath, tréshoilseacha, geala nó ómra: patrún neamhchoiptheora, an ghnáthchuma a bhíonn ar Salmonella, Shigella agus Proteus ar EMB Levine.
4. Gan aon fhás nó coilíneachtaí fíorbheaga amháin san áit ar stríocadh orgánaigh Gram-deimhneacha: an cosc roghnaitheach a mbeifí ag súil leis. Tarlaíonn fás a sháraíonn an cosc, agus níor cheart é a léamh mar thoradh idirdhealaitheach.

Is feinitíopa scagtha é dath. Treoraíonn sé ruaimniú Gram, tástáil ocsaíodáise, painéil bhithcheimiceacha nó sainaithint le hionstraim. Ní ainmníonn sé speiceas leis féin riamh. Cuidíonn comparáid dhíreach leis an meán scagtha eintreach eile anseo, agus is é sin an fáth a bpléann comparáid ar leith roghnú agus léamh EMB i gcomparáid le MacConkey go mion.

Forbhreathnú ar ullmhúchán

Maidir le EMB tráchtála díhiodráitithe, lean bileog treoracha an mhonaróra don táirge beacht, toisc go mbíonn cion na ruaimeanna agus na treoracha steirilithe éagsúil. Maidir leis an bhfoirmliú de chineál ASM, treoraíonn prótacal ASM maidir le hagar eoisine agus goirm meitiléine na comhábhair a thuaslagadh, pH a choigeartú, fiuchadh chun an t-agar a thuaslagadh, uathchlábháil ar feadh 15 nóiméad ag 121 céim Celsius, fuarú i dtreo 60 céim, guairneáil chun an deascán a chur ar fionraí arís, agus doirteadh. Sonraíonn modh Levine FDA steiriliú ag teocht nach mó ná 121 céim agus an raon pH deiridh céanna. Is gnách roinnt deascáin a bheith in EMB, agus cuirtear ar fionraí arís é trí ghuairneáil réidh seachas é a chaitheamh amach mar éilliú.

Gor go haeróbach, de ghnáth ar feadh 18 go 24 uair an chloig ag thart ar 35 go 37 céim, agus léigh ag an am a shonraíonn an tsaotharlann. Is gnách i rialú cáilíochta E. coli a úsáid don fhrithghníomh dorcha le loinnir, tréithchineál Salmonella agus Proteus mirabilis d'fhás gan dath, Enterobacter nó Klebsiella aerogenes do choipeadh múcasach, agus Staphylococcus aureus chomh maith le Enterococcus faecalis chun an cosc ar orgánaigh Gram-deimhneacha a sheiceáil. Meaitseáil uimhreacha na dtréithchineálacha agus na critéir ghlactha leis an mbileog treoracha.

Cad atá á fhiafraí i ndáiríre i gceisteanna faoi EMB sorbatóil

Deir ceist scrúdaithe eile a thagann chun cinn go minic go n-úsáidtear agar emb ina bhfuil sorbatól chun pataigin áirithe a bhrath, agus fiafraíonn sí cén ceann. Ní mór an réamhchoinníoll a cheartú sula bhfreagraítear í.

Níl sorbatól in EMB caighdeánach. Is é agar MacConkey sorbatóil an meán scagtha sorbatóil bunaithe le haghaidh E. coli O157:H7, go háirithe MacConkey sorbatóil le cefixime agus teilúirít. Is í an loighic ná go gcoipeann formhór ghnáth-E. coli sorbatól go tapa agus go n-éiríonn siad bándearg-dearg, agus go gcoipeann gnáth-thréithchineálacha O157:H7 sorbatól go mall nó nach gcoipeann siad é ar chor ar bith, agus go bhfanann siad gan dath nó liath, mar a thuairiscítear i modh FDA BAM le haghaidh agar MacConkey sorbatóil. Níl aon EMB sorbatóil caighdeánaithe comhionann i modhanna baictéareolaíocha ASM ná FDA. I sreafaí oibre FDA le haghaidh E. coli a chuireann buinneach faoi deara, úsáidtear EMB Levine in éineacht le meáin chrómaigineacha agus meáin deimhniúcháin eile, ach ní féidir le EMB leis féin STEC pataigineach a idirdhealú ó ghnáth-E. coli. Mar sin, nuair a luann ceist sorbatól agus E. coli O157:H7, is é MacConkey sorbatóil an meán atá i gceist, ní EMB. Tá comhthéacs ginearálta móilíneach maidir le gorm meitiléine féin le fáil in conas a oibríonn gorm meitiléine.

Gaistí a thagann chun cinn gach téarma

Ar an gcéad dul síos, an iomarca brí a bhaint as an loinnir. Déanann FDA cur síos ar ghnáth-E. coli ar EMB Levine mar choilíneachtaí a bhfuil lár dorcha acu, le loinnir nó gan í. Caith leis an loinnir mar leid láidir thoimhdeach, ní mar chruthúnas riamh.

Ar an dara dul síos, neamhaird a dhéanamh den fhoirmliú. Leathnaíonn pláta ina bhfuil siúcrós an bhrí atá le gach coilíneacht dhorcha. Cuireann pláta Levine srian leis an mbrí sin go lachtós amháin. Scríobh an foirmliú sa leabhar nótaí in éineacht leis an toradh.

Ar an tríú dul síos, fás measctha a léamh mar aon orgánach amháin. I meascáin, is féidir le horgánach amháin na haigéid a dhéanann orgánach eile a ídiú, rud a fhéadann an loinnir a mbeifí ag súil léi a bhaint. Déanann ASM doiciméadú ar éifeacht den chineál sin i meascán E. coli agus Salmonella. Roghnaigh coilíneachtaí leithlisithe agus oibrigh le gach moirfitíopa ar leithligh.

Ar an gceathrú dul síos, léamh rómhall. Ligeann gor fada do choiptheoirí laga agus d'orgánaigh Gram-deimhneacha a sháraíonn an cosc dath a charnadh, agus déanann sé an t-idirdhealú idir coiptheoirí agus neamhchoiptheoirí doiléir. Taifead an t-am goir in éineacht leis an gcur síos ar na coilíneachtaí.

Ar an gcúigiú dul síos, glacadh leis gurb ionann cosc agus steirilíocht. Laghdaíonn EMB líon na n-orgánach Gram-deimhneach. Ní ráthaíonn sé nach mbeidh siad ann. Is airí den táirge le taifeadadh í coilíneacht bheag i stríoc rialaithe Gram-deimhneach, ní fianaise de riachtanas gur theip ar an mac léinn.

Cuimhnigh ar abairt amháin ag an mbinse. Roghnaíonn ruaimeanna trí bhac a chur ar orgánaigh Gram-deimhneacha, cuirtear aigéad ó lachtós in iúl trí dheascadh ruaime, agus socraíonn an foirmliú cén siúcra ar féidir leis an dath a léiriú.