Hví metýlenblátt verður brúkt sum mótliting við sýrufastari liting

Ein starvsfólkur á starvsstovu kannar eitt útstrok av uppspýtti eftir alla litingarmannagongdina. Reyðir stavar síggjast týðiliga móti eini bláari bakgrund, og úrslitið verður fráboðað sum sýrufastir basillar sæddir. Dagin eftir vísir eitt annað objektglas eina javnt bláa bakgrund uttan reyðar stavar, og úrslitið verður fráboðað sum negativt fyri tuberklar. Onnur av hesum fráboðanum sigur meira, enn objektglasið gevur grundarlag fyri, og tað er ikki tann fyrra.

Misskiljingin snýr seg um grundhugtøkini. Starvsfólkið metti bláa litevnið sum ein part av evnafrøðini, ið ávísir bakteriurnar, sum um metýlenblátt hjálpti við at finna mykobakteriurnar. Tað gjørdi tað ikki. Tá ið metýlenblátt kemur á objektglasið, er sjálv royndin longu liðug. Litevnið litar bert bakgrundina, so úrslitið kann lesast. Henda greinin greiðir frá endamálinum við metýlenbláum í sýrufastari liting, hví liturin er bláur heldur enn ein annar litur, og hvørjar niðurstøður reyður litur móti bláum gevur grundarlag fyri.

Stutta svarið

Sýruføst liting er ein sundurgreinandi roynd, sum byggir á tríggjar meginreglur. Karbolfuksin, høvuðslitevnið, verður trýst inn í allar kyknur, eisini tær vaksríku mykobakteriurnar. Sýrualkohol, avlitingarevnið, tekur reyða litevnið úr vanligum kyknum, men megnar ikki at taka tað úr sýruføstum kyknum. Metýlenblátt, mótlitevnið, litar síðani alt, sum avlitingarevnið tók litin úr. Tí síggjast kyknur, ið ikki eru sýrufastar, vertskyknur og leivdir bláar, meðan sýrufastir basillar verða verandi reyðir. Mótlitingin skapar litandstøðu. Hon hevur ongan leiklut í evnafrøðini, sum ger eina kyknu sýrufasta.

Hvat hvørt stig ger

Myndin niðanfyri vísir arbeiðsbýtið. Les hana frá vinstru til høgru sum eina mannagongd, og les niðasta myndateigin sum eina áminning um, at hvør litingarbólkur svarar einum øðrum spurningi.

Fyrst skal litevnið treingja inn. Mykobakteriur standa ímóti vanligum litevnum í vatni, tí kyknuhylkið hjá teimum er óvanliga vatnskýggjandi, so mannagongdin noyðir litevnið inn. Í Ziehl-Neelsen-háttinum verður sýnið hitað, til tað guvar, og hitin rekur fenolinnihaldandi karbolfuksin gjøgnum vaksríka kyknuveggin. Í kalda Kinyoun-háttinum verður hitin skiftur út við eina nógv sterkari blanding av høvuðslitevni, og í summum tillagaðum útgávum uttan hita verða yvirflatuvirkin evni løgd afturat. Mannagongdirnar hjá American Society for Microbiology fyri sýrufasta liting lýsa báðar blandingarnar lið um lið, og munurin á styrki er stórur: umleið 0.3 g av basiskum fuksini fyri hvørjar 100 mL í hitaða háttinum samanborið við umleið 4 g í kalda háttinum.

Síðani kemur sundurgreiningin. Sýrualkohol, vanliga 3 mL av sterkari saltsýru í 97 mL av 95 prosent etanoli, skolar reyða litevnið úr hvørjari kyknu, hvørs veggur ikki hevur serligt mótstøðuføri. Kyknur við heilum mykobakteriellum lipidhylki halda fast í litevninum. Hetta er stigið, sum øll mannagongdin byggir á, og stigið, sum er mest viðkvæmt fyri arbeiðsháttinum, sum lýst niðanfyri.

At enda kemur litandstøðan. Á objektglasinum eru nú reyðar sýrufastar kyknur á eini næstan litloysari bakgrund av kyknum, sum litevnið er tikið úr. Metýlenblátt við styrkini 0.3 prosent w/v ger hesa bakgrund sjónliga aftur við einum liti, sum er so ólíkur reyðum sum gjørligt. Mótlitingin er stutt, vanliga 20 til 30 sekund í hitaða háttinum og upp í nakrar minuttir í summum útgávum av kalda háttinum. Tíðin er ásett í mannagongdini og er ikki ein eginleiki hjá sjálvum litevninum.

Hví hetta litevnið, og hví blátt

Metýlenblátt er eitt kationiskt basiskt litevni. Tað merkir, at litaða jónin hevur positiva løðing og bindur seg at negativt løddum yvirflatum á avlitaðum bakterium, vertskyknum og leivdum. OpenStax Microbiology lýsir hetta samspælið millum løðingar sum almennu meginregluna aftan fyri basisk litevni. Men metýlenblátt er ikki evnafrøðiliga serstakt í hesum sambandi. Krystalviolett og safranin eru eisini basisk litevni. Valið er optiskt, ikki evnafrøðiligt.

Reyðir stavar hava tørv á eini bakgrund við øðrum liti, og blátt gevur ta mest gagnligu andstøðuna til reytt í ljósfeltmikroskopi. Safranin hevði verið eitt vánaligt mótlitevni, tí endaligi ljósareyði til reyði liturin líkist ov nógv karbolfuksininum, sum er varðveitt í kyknum. Tá hvørvur júst tann munurin, sum mannagongdin skapti. Krystalviolett hevði givið eina myrkt violetta bakgrund, sum kappaðist við teir klønu reyðu basillarnar um uppmerksemið. Sterkasta prógvið fyri, at endamálið er litandstøða heldur enn evnafrøði, er, at litevnið kann skiftast út: grøn mótlitevni sum malakitgrønt og brilliantgrønt verða brúkt í summum djóralæknaligum og tillagaðum mannagongdum, og royndin virkar framvegis, tí hvør litur, sum er týðiliga øðrvísi, ger sama arbeiði.

Tvær verkligar niðurstøður fylgja av hesum. Í fyrsta lagi ásetur vanliga uppskriftin onga tillaging av pH. Blandið ikki hesa vanligu 0.3 prosent vatnloysn saman við alkaliskar blandingar sum metýlenblátt hjá Loeffler, sum hoyra til eitt annað litingarhugtøk. Í øðrum lagi ger ov nógv liting skaða. Fagbókmentir um vevnaðarlæru ávara beinleiðis um, at ein ov sterk blá bakgrund kann fjala fáar basillar. At lata litevnið liggja á objektglasinum longur, enn mannagongdin loyvir, ger tí úrslitið verri at lesa uttan nakran fyrimun.

Evnafrøðin í kyknuvegginum, sum ger royndina møguliga

Orsøkin til, at sýrualkohol sundurgreinir kyknurnar, liggur í hylkinum hjá mykobakterium. Bygnaðargrundarlagið er mykolyl-arabinogalaktan-peptidoglykan-kompleksið: peptidoglykan bundið at arabinogalaktani, við sera langketjaðum mykolsýrum á ytru endunum. Hetta myndar eina lipidríka ytru mykomembran við óvanliga lítlum gjøgnumtreingiligleika. Yvirlitsgreinin um ytru membranina hjá mykobakterium lýsir henda bygnaðin í smálutum. Forðingin virkar báðar vegir. Hon forðar litevninum í at treingja inn, og tí krevur inntrongdin hita ella eitt sterkari høvuðslitevni. Hon forðar eisini litevninum í at verða tikið úr aftur, og tí megnar sýrualkohol ikki at taka karbolfuksin burtur, tá ið tað fyrst er komið inn. Vanligar bakteriur hava ikki hetta hylkið og missa litevnið. Sýrufastleiki verður tí best skiltur sum ein eginleiki, ið stavar frá eini lipidforðing, heldur enn sum evnafrøðilig binding millum fuksin og mykolsýru.

Henda evnafrøðin greiðir eisini frá einum vanligum undranarevni: mykobakteriur litast illa og óregluliga við Gram-háttinum og síggjast stundum sum veikt litað perluskapað form ella ólitaðar kyknuleivdir. Vatnskýggjandi veggurin avmarkar inntrongdina hjá krystalviolett. Sýruføst liting er ikki ein tillagað Gram-liting. Hon byggir á eina aðra sundurgreinandi meginreglu og ein annan eginleika hjá kyknuvegginum, sum samanberingin av einfaldari liting og Gram-liting vísir fyri hinar báðar hættirnar.

Tríggir hættir, tríggir spurningar

Um størra bólkin av bakteriu­litingum við einum litevni, sí atlasið yvir liting til mikroskopi.

Hvat reytt móti bláum ikki kann prógva

Reyðir stavar merkja, at verurnar varðveittu karbolfuksin gjøgnum viðgerðina við sýrualkoholi. Hetta samsvarar við Mycobacterium tuberculosis, men leiðbeiningar hjá CDC um sjúkuavgerð fyri tuberklar staðfesta beinleiðis, at aðrar mykobakteriur eisini eru sýrufastar. Tí krevur staðfesting av slagnum dyrking og kjarnasýrutesting, ikki lit.

Feilir í arbeiðsháttinum savna seg serliga um tær báðar skolingarnar. Ov lítil avliting letur bakgrundartilfar verða verandi reytt og økir um vandan fyri falskt positivari tulking. Ov nógv avliting tekur veikt varðveitt høvuðslitevni úr og kann elva til falskt negativ úrslit. Ov sterk mótliting fjalir fáar basillar í bláum liti. Tjúkk útstrok, utfeld hvarvevni og dálkað skolivatn geva eisini sínar egnu misvísandi myndir.

Næmið er avmarkað av nøgdini av verum, sama hvussu væl arbeiðið verður gjørt. Vanlig mikroskopi av útstroki krevur umleið 5,000 til 10,000 basillar fyri hvønn millilitur av uppspýtti. Eldri próvtilfarsyvirlit hjá CDC settu næmið hjá útstroki til umleið 45 til 80 prosent í lungnatilburðum, sum vóru váttaðir við dyrking. Eitt negativt útstrok útilokar tí ongantíð tuberklar. Núverandi leiðbeiningar hjá CDC krevja dyrking saman við hvørjum útstroki og mæla til kjarnasýrumargfaldingartesting á í minsta lagi einum sýni úr andaleiðunum, tá ið illgruni er um lungnatuberklar og úrslitið hevði broytt viðgerðina.

Verkligt arbeiði skal fylgja góðkendum mannagongdum

Undirvísandi lýsingar, eisini henda greinin, geva ikki heimild til kliniskt arbeiði. Í verkligum starvsstovuarbeiði skal góðkenda standardmannagongdin hjá starvsstovuni fylgjast, og hon skal samsvara við galdandi skjøl frá CDC, APHL ella CLSI. Tilvísingarskjalið hjá CDC um sýrufasta liting í Stacks-skjalasavninum vísir, hvussu slíkar mannagongdir áseta hvarvevni og úrslit, sum skulu skrásetast. Arbeiði við tuberklasýnum krevur avbyrging: útstrok verða gjørd í einum lívfrøðiligum trygdarskápi, tí fyrireikingin myndar aerosolar og slettur. Trygdarleiðbeiningar hjá CDC fyri starvsstovur siga, at eisini hitafest útstrok kunnu innihalda livandi tuberklabasillar og framvegis skulu handfarast sum dálkað. Skrásetingin í CDC Public Health Image Library av einum útstroki litaðum við karbolfuksini og metýlenbláum og kannaðum fyri M. leprae er ein gagnlig áminning um, at hátturin verður brúktur til annað enn tuberklar: sama reyða móti bláa litandstøðan verður brúkt, har leitað verður eftir sýruføstum verum, og ein neyvt gjørd negativ tulking er í sjálvum sær eitt úrslit, sum eigur at verða skrásett.

At lesa lidna objektglasið

Mótlitingin vísir sítt virði í fyrstu gjøgnumgongdini. Ein mikroskopari, sum fyrst kannar við lítlari støkking, brúkar bláu bakgrundina til at meta um góðskuna á útstrokinum: javna dreifing av kyknum, heilar vertskyknur til at stilla skerpleikan og onga stóra nøgd av botnfalli. Reyðar kyknur, sum kunnu vera basillar, draga síðani eygað at sær, júst tí einki annað á objektglasinum er reytt. Váttanin verður gjørd við oljuimmersjón, har veruligir basillar vísa væntaðu klønu stavarnar, stundum eitt sindur bognaðar ella perluskapaðar, heldur enn einsleitt litevnisavfall.

Bakgrundarlitingin ásetur eisini orðalagið í fráboðanini. Eitt objektglas við reyðum basillum verður fráboðað sum sýrufastir basillar sæddir, ofta við eini hálvkvantitativari meting eftir skalanum hjá starvsstovuni. Eitt objektglas uttan reyðar verur verður fráboðað sum eingir sýrufastir basillar sæddir, ongantíð sum negativt fyri tuberklar. Munurin hevur týdning, tí bláa bakgrundin prógvar, at litingin virkaði, kyknurnar tóku mótlitevnið upp og optisku viðurskiftini vóru nøktandi. Hon sigur samstundis einki um verur undir ávísingarmarkinum. Ein blá bakgrund uttan reyðar stavar er eitt gildugt úrslit um objektglasið, ikki ein niðurstøða um sjúklingin.

Tá ið arbeiðsbýtið er greitt, er eisini greitt, hvussu úrslitini skulu orðast. Karbolfuksin ávísir møguligar basillar. Sýrualkohol fremur royndina. Metýlenblátt ger bert svarið læsiligt: reytt varðveitti litevnið hóast sýru, blátt misti tað. Alt annað, slag, nøgd og kliniskur týdningur, verður staðfest við arbeiði út um objektglasið.