Loefflers alkaliska og polykroma metylenbláa litarevni greidd frá

Tríggjar fløskur kunnu standa lið um lið á einum litingarborði, hvør við einum merki, sum nevnir eitt frábrigdi av metylenbláum. Á einari stendur metylenblátt í vatni 1%. Á aðrari stendur Loefflers alkaliska metylenblátt. Á triðju stendur polykromt metylenblátt. Ein starvsfólkur, sum hevur nógv um at vera, tekur ta fløskuna, sum stendur næst. Útstrokið verður síðan litað ov veikt, ov einsháttað blátt ella í óvæntaðum purpurlitum tónum, og sýnið fær skyldina fyri úrslitið.

Hetta er ein trupulleiki við samansetingini, ikki við sýninum. Tær tríggjar loysnirnar innihalda skyld litarevni, men byggja á ymiskar meginreglur fyri liting. Ein er eitt vanligt katjóniskt litarevni við nærum neutralum pH. Ein er sama litarevni, sum er gjørt meira virkið við alkali. Ein er ikki longur eitt einstakt litarevni, men ein tilætlað oksiderað blanding. Brúkar tú ta skeivu, broytist meginreglan fyri litingini, meðan tú arbeiðir.

Stutta svarið

Vanligt metylenblátt í vatni er útgangsstøðið: umleið 1% litarevni í vatni, eitt einfalt katjóniskt litarevni til bakteriufrøðiliga skapfrøði og vanliga mikroskopi. Í Loefflers alkaliska metylenbláum verður ein lítil, avmáld nøgd av tyntum alkali sett til eina alkoholiska stamloysn, sum er tynt við vatni. Hetta hækkar pH og fær tað katjóniska litarevnið at bindast sterkari at súrum bygnaðum í bakterium. Polykromt metylenblátt er metylenblátt, sum tilætlað er búnað við oksidatión í alkali. Fløskan inniheldur tí eina blanding av demetyleraðum homologum (azure A, azure B, azure C), thionin og metylenviolettum saman við eftirverandi metylenbláum, og henda blandingin litar ymiskar bygnaðir í ymiskum litbrigðum.

Um tú bert minnist ein setning: alkalisering broytir styrkina á litingini, meðan polykromering broytir litirnar.

Vanligt metylenblátt í vatni: samanberingargrundarlagið

Einfaldasta samansetingin er metylenblátt loyst í vatni, vanliga 1% w/v, uttan alkali og uttan oksidatión. Litaða evnið er metylthioniniumkatjónin við einari kloridmótjón, eitt lítið, flatt fenothiazinlitarevni, sum í skrásetingini av metylenbláum hjá PubChem verður lýst sum metylthioniniumklorid. Sum katjón bindur tað seg at fosfatryggjum í kjarnasýrum og súrum bólkum á bakteriukykjuveggjum og litar kyknurnar bláar móti einum ljósum bakstøði.

Fyrimunurin er, at úrslitið er fyrisigilig. Kjarnar og bakteriur síggjast blá. Andstøðan er hóvlig. Verur, sum eru torførar at síggja, kunnu litast veikt, og tað er júst henda avmarkingin, sum Loeffler royndi at loysa. Fyri at fáa innlit í breiðara bólkin av einføldum bakteriulitarevnum, sum henda loysnin hoyrir til, sí eitt yvirlit yvir einfalda liting av bakterium. Eisini her er neyðugt at halda neyvt skil á evniseyðkenninum: metylblátt er eitt heilt annað mýl, sum greitt verður frá í metylblátt samanborið við metylenblátt. Ein leiting í vøruskránni eftir litnavninum einsamøllum kann tí geva skeivan flok av litarevnum.

Loefflers alkaliska metylenblátt: sama litarevni við sterkari virknaði

Klassiska uppskriftin hjá Loeffler sameinir eina alkoholiska stamloysn av metylenbláum við tynt alkali í vatni. Útgávur í lærubókum áseta 0.3 g av litarevni í 30 mL av 95% etanoli umframt 100 mL av 0.01% kaliumhydroksidi í vatni (ella samsvarandi 30 mL av mettaðari alkoholiskari metylenbláloysn, 100 mL av destilleraðum vatni og 1 mL av 1% KOH). Hetta gevur eina nýtsluloysn við nærum 0.3% litarevni og greitt alkaliskum pH. Handilsligar útgávur fylgja somu meginreglu, og vøruskráin hjá Thermo Fisher fyri mikrobiologisk litarevni listar Loefflers alkaliska metylenblátt saman við polykromum frábrigdum og frábrigdum í vatni sum sjálvstøðugar vørur við hvør sínum ætlaða nýtsluøki.

Alkalið er tað avgerandi. Tá ið pH hækkar, missa karboksyl- og fosfatbólkar á sýninum protonir, so tettleikin av negativt løddum bindingsstøðum økist. Samstundis heldur alkoholstamloysnin litarevninum heilt upploystum, so tað kemur fram til hesi støð sum monomerir. Úrslitið er skjótari og sterkari liting av bakterium enn við neutralum litarevni í vatni, við teimum eyðkendu djúpbláu stavunum og kokkunum í einum vanligum bakteriologiskum útstroki. Litingartíðin er vanliga ein til tríggjar minuttir, og síðan verður skolað við vatni.

Klassiska nýtslan er Corynebacterium diphtheriae, sum er dyrkað á Loefflers serummiðli: klænir, ofta kylvuskapaðir stavar við sterkt litaðum metakromatiskum Babes-Ernst-kornum av goymdum polyfosfati. Samansetingin av dyrkingarmiðli og litarevni hevur søguligan uppruna, og bæði verða ognað sama bakteriufrøðingi. Andstøðan, sum ger kornini sjónlig, er diagnostiski fyrimunurin. Umframt arbeiði við difteri verður litarevnið brúkt sum vanligt bakteriologiskt litarevni til útstrok úr dyrkingum, til at kanna skap hjá Neisseria í kliniskum útstrokum og har, ið Gram-liting er óneyðug, men vanligt metylenblátt í vatni gevur ov veika liting. Tað er eitt einlitt litarevni. Alt súrt fær eitt blátt litbrigdi. Tá ið ein mannagongd krevur litir, sum skilja bygnaðir frá hvørjum øðrum, kann alkali einsamalt ikki geva teir.

Eitt praktiskt fyrivarni: alkaliskar litarevnisloysnir versna og fella út við goymslu og upptøku av koltvíiltu. Starvsstovur gera tí antin hóvligar nøgdir ella keypa loysnina úr vøruskránni og halda seg til haldførið, heldur enn at halda fram við einari gamlari fløsku, sum nú leggur botnfall á hvørt objektglas.

Polykromt metylenblátt: eitt navn, fleiri litarevni

Polykromt metylenblátt byrjar við sama litarevni, men verður viðgjørt við stýrdari oksidatión í alkali, søguliga nevnt búning ella polykromering. Alkalisk búning, upphiting við karbonati ella oksidatión við evnum sum dikromati tekur metylbólkar burtur úr dimetylaminosubstituentunum stigvíst. Úrdrátturin er ein blanding: eftirverandi metylenblátt umframt azure B (ein metylbólkur mistur), azure A og azure C (víðari demetylering), thionin (fullkomiliga demetylerað) og oksidativar hjáúrdráttir úr metylenviolettfamiljuni. Hvør partur hevur sítt egna litbrigdi og sítt egna bindisevni til vevnað. Blandingin litar tí metakromatiskt: kjarnar, korn, mucin og brósk fáa hvør sínar serstøku tónar frá bláum til reyðpurpurlitum.

Henda evnafrøðin er tann sama sum liggur aftan fyri tey kendu blóðlitarevnini. Fyrstu granskararnir funnu út av, at alkaliserað metylenblátt litaði kjarnar hjá malariaparasittum í purpurlitum tónum. Men búnaðu loysnir teirra í vatni vóru óstøðugar og feldu út innan fáar dagar. Yvirlitið um hvussu purpurlitaða blóðlitarevnið varð uppfunnið lýsir, hvussu Malachowski og Romanowsky hvør sær gagnnýttu henda virknað í 1891, hvussu metanol varð tikið í nýtslu til at støðga litarevnisbotnfallinum og fiksera útstrok uttan hita, og hvussu Giemsa seinni staðlaði blandingina við avmáldum azure B og eosini og støðging við glyceroli. Nútímans litarevni av Giemsa-slagi stava beinleiðis frá polykromum metylenbláum saman við eosini, samansetingini, sum gevur Romanowsky-virknaðin. Fyri nærri upplýsingar um samansetingina við eosini og azure B-partin, sí litarevni av Romanowsky-slagi og samvirknið millum azure B og eosin.

Av tí at tað er ein blanding, er polykromt metylenblátt av náttúru minst staðlað av teimum trimum. Neyva javnvágin millum litbrigdi veldst um oksidatiónsháttin og hvussu langt oksidatiónin er komin. Tí selja vevnaðarfrøðiligir veitarar tað sum eina serstaka vøru við egnum royndum av litingareginleikunum, heldur enn sum gamalt Loefflers litarevni. Vanlig nýtsla fevnir um metakromatiska ávísing av kornum í mastkyknum, mucini og bróski, smálutir í plasmakyknum og Helicobacter pylori í vevnaðarskurðum við polykromum háttum av Goodpasture-slagi. Tað er rætta valið, tá ið endamálið er at skilja bygnaðir frá hvørjum øðrum við liti, og skeiva valið, tá ið mannagongdin krevur ein greiðan, einlittan bakteriuumriss.

Samanbering av samanseting og endamáli

Les talvuna sum eina mannagongd til at velja. Um sýnið litast ov veikt, broyt pH-tilgongdina og vel Loefflers. Um alt litast, men einki skilir seg út, broyt litarevnistilgongdina og vel polykromt metylenblátt. Um eitt útstrok litað við Loefflers vísir kornini sera væl, men leiðarin spyr, hví kjarnar og cytoplasma hava sama bláa lit, er svarið, at einki alkaliskt, einlitt litarevni kann loysa ta uppgávuna. Tann spurningurin hoyrir til polykroma litarevnisfamiljuna og hennara avleiddu blóðlitarevni.

At sleppa undan teimum vanligu samanblandingunum

Tvær villur eru orsøk til meginpartin av ørkymlanini. Tann fyrra er at viðgera Loefflers og vanligt metylenblátt sum sínámillum útskiftilig, tí bæði síggja blá út í fløskuni. Tey eru ymisk í pH og litingarstyrki. Verður neutralt litarevni brúkt í staðin fyri Loefflers, har tað er ásett, hvørvur júst tann andstøðan í kornunum, sum mannagongdin er bygd upp um. Tann seinna er at rokna eina gamla ella av tilvild búnaða alkaliska bláloysn sum polykroma. Óstýrd búning gevur eina ókenda blanding við ókendari styrki, meðan veruligar polykromar loysnir verða gjørdar við ásettum oksidatiónsháttum og, í blóðlitarevnisrøðini, blandaðar við avmáldum eosini. Søgan er lærurík her: tær óstøðugu, búnaðu loysnirnar í vatni frá 1890-árunum vórðu avloystar av støðgaðum samansetingum í metanoli, júst tí at óstýrdar blandingar ikki kundu endurskapast. Tað er ein lærdómur, sum er verdur at minnast, áðrenn eitt diagnostiskt objektglas verður litað úr einari fløsku við óvissum aldri.

Neyv nýtsla av heitum bindur tað heila saman. Kanna vøruna í vøruskránni (í vatni, Loefflers ella polykrom), innihaldið av litarevni og ætlaða nýtslu á merkinum, heldur enn at meta út frá litinum. Tær tríggjar samansetingarnar hava sama kromofora uppruna. Tær hava ikki sama endamál.