Glas methylen a Bartonella: canfyddiadau labordy a chyfyngiadau’r dystiolaeth glinigol

Mae dysgl feithrin a chlaf yn rhannu gair, haint, ond nid cysyniad. Yn y ddysgl, cyfrif cytrefi ar agar yw haint. Yn y claf, mae’n golygu bacteria y tu mewn i gelloedd a phibellau gwaed, cyffuriau’n symud drwy waed a meinwe, a system imiwnedd yn gwneud rhan o’r gwaith. Os cymysgir y ddau, mae rhif trawiadol o’r labordy’n dechrau edrych fel triniaeth. Os cânt eu cadw ar wahân, mae’r un rhif yn cael ei weld am yr hyn ydyw: rheswm dros wneud yr arbrawf nesaf.

Gwneud y gwahaniaeth hwnnw yw holl ddiben yr adolygiad hwn o las methylen a Bartonella. Profodd dwy astudiaeth labordy gan un grŵp ymchwil las methylen yn erbyn Bartonella henselae mewn cyflyrau lle nad oedd yn tyfu. Nododd y ddwy weithgarwch cryf mewn gwydr a phlastig. Ni phrofodd y naill na’r llall ef mewn person.

Pam mae ymchwilwyr yn profi’r cyfnod llonydd

Mae’r rhan fwyaf o brofion gwrthfiotigau’n defnyddio celloedd sy’n tyfu. Mae’r model hwnnw’n methu ag ymdrin ag achos anos: celloedd sydd wedi rhoi’r gorau i rannu ac sy’n goddef cyffuriau sy’n lladd eu cymheiriaid sy’n tyfu.

Gall Bartonella barhau yn y corff, gan gynnwys y tu mewn i erythrocytau a chelloedd endothelaidd. Felly gofynnodd y grŵp pa gyffuriau cymeradwy all ladd B. henselae ar ôl iddo gyrraedd y cyfnod llonydd. Nid oedd MIC isel yn erbyn celloedd sy’n tyfu’n rhagfynegi lladd yn y cyfnod llonydd. Roedd gan rifampin MIC isel iawn ond roedd yn lladd celloedd llonydd yn wael, tra oedd cyfansoddion â gwerthoedd MIC uwch yn eu lladd yn dda. Bydd darllenwyr sydd am gael dull cyffredinol o ddarllen papur o’r math hwn yn ei gael yn y canllaw i ddarllen ymchwil ar las methylen.

Y sgrinio cyntaf: Li a chydweithwyr, 2019

Defnyddiodd sgrinio’r cyfnod llonydd yn 2019 yn Antibiotics un straen, B. henselae JK53, a dyfwyd mewn cyfrwng Schneider â 10 y cant o serwm ffetws buchol ar 37 C â 5 y cant CO2. Roedd meithriniadau un diwrnod oed yn cynnwys celloedd gwasgaredig oedd yn rhannu yn bennaf. Cymerwyd bod meithriniadau pum diwrnod oed, ar tua 10 i bŵer 8 o unedau ffurfio cytrefi fesul mL, yn y cyfnod llonydd, ac roeddent yn cynnwys agregau gweladwy.

Yr assay oedd SYBR Green I gydag ïodid propidiwm, wedi’i galibro yn erbyn cymysgeddau o gelloedd byw a chelloedd a laddwyd ag isopropanol. Gan fod gan las methylen liw cryf, cadarnhawyd canlyniadau cadarnhaol drwy ficrosgopeg ac yna drwy gyfrif cytrefi ar agar gwaed, y mesur terfynol mwy caeth.

O blith 1,581 o gyffuriau cymeradwy ar 50 micromolar, gadawodd glas methylen 16 y cant o hyfywedd yn ôl y darllenydd platiau a 25 y cant yn ôl microsgopeg. Sgoriodd daptomycin 21 y cant, sawl azol 22 i 27 y cant, gentamicin 32 y cant, erythromycin 66 y cant, a ciprofloxacin 74 y cant. Roedd pyrvinium pamoate yn edrych yn gryfach ar y darllenydd ond ni ellid ei sgorio drwy ficrosgopeg oherwydd ei fflworoleuedd ei hun.

Yn erbyn B. henselae oedd yn tyfu, MIC glas methylen oedd 0.08 i 0.16 micrograms per mL. Yn erbyn celloedd pum diwrnod oed yn y cyfnod llonydd ar 5 micrograms per mL, gostyngodd y cyfrif cytrefi i ddim cytrefi canfyddadwy ar ôl un diwrnod o amlygiad, gan gyfateb i daptomycin a pyrvinium pamoate ar y crynodiadau a brofwyd ar eu cyfer. Defnyddiodd prawf lladd dros amser ar wahân 10 micrograms per mL. Lefelau amlygiad yn y labordy yw’r rhain, nid dosau, ac mae’r papur yn eu nodi felly. Mae gwerth brig plasma dynol a ddyfynnir, ger 3.9 micrograms per mL, yn ymddangos yn y papur fel cyd-destun cefndir yn unig. Mae’r trosolwg o ffarmacocineteg glas methylen yn esbonio pam na ellir darllen rhif plasma fel rhif meinwe.

Mae dau gyfyngiad yn cael eu nodi’n benodol yn y papur. Nid oedd model bioffilm ac ni phrofwyd cyfuniadau â glas methylen. Clystyrau mewn meithriniad hylifol llonydd oedd yr agregau pum diwrnod oed, nid arbrawf bioffilm wedi’i ddilysu. Galwodd yr awduron am waith mewn anifeiliaid, gwaith ar gyfuniadau, gwaith ar fioffilmiau, a phrofion mewn rhywogaethau Bartonella eraill.

Cyfuniadau a chelloedd o fioffilmiau: Zheng a chydweithwyr, 2020

Cadwodd yr astudiaeth ddilynol yn 2020 yn BMC Microbiology yr un straen a chyfrwng ond symudodd i feithriniadau chwe diwrnod oed yn y cyfnod llonydd ac ychwanegu dau beth nad oedd yn y papur cyntaf: cyfuniadau dau gyffur a model o gelloedd a gafwyd o fioffilm.

Ar gyfer cyffuriau unigol ar lefel unffurf o 5 micrograms per mL am 24 awr, gadawodd glas methylen 3.2 gwaith 10 i bŵer 4 o unedau ffurfio cytrefi fesul mL, o gymharu â rheolydd ger 2.8 gwaith 10 i bŵer 10. Gadawodd ciprofloxacin, gentamicin, a nitrofurantoin lai o gytrefi ar yr un adeg. Mae hynny’n wahanol i ganlyniad 2019, pan roddodd yr un lefel enwol ddim cytrefi canfyddadwy ar ôl un diwrnod. Roedd oedran, dwysedd a thriniaeth y meithriniadau’n wahanol, felly roedd modd atgynhyrchu cyfeiriad yr effaith ladd ond nid ei maint yn union. Mae’r newid hwn rhwng rhediadau yn un rheswm pam mae gwiriadau safonol o ddiogelwch a rhyngweithiadau’n trin cryfder gweithgarwch yn y labordy fel rhywbeth ar wahân i effaith glinigol.

Y sgrinio cyfuniadau yw’r rhan sy’n cael ei dyfynnu amlaf. Gosodwyd pob cydran ar 5 micrograms per mL. Rhoddodd azithromycin gyda glas methylen a rifampin gyda glas methylen ddim cytrefi canfyddadwy o’r cyfnod llonydd ar ôl 24 awr, fel y gwnaeth y ddau bâr â ciprofloxacin, a dim ond y pedwar hynny o blith 25 o barau a brofwyd. Ni chynhaliwyd dadansoddiad ffurfiol o synergedd, felly’r term cywir yw cyfuniad gweithredol o dan yr amodau hyn, nid synergedd wedi’i brofi.

Profodd yr arbrawf bioffilm gelloedd a gafwyd o fioffilm ifanc a chwalwyd, nid treiddiad i fioffilm aeddfed gyfan. Tyfwyd meithriniadau am bum diwrnod, eu gwanhau mewn platiau â ffynhonnau am bum diwrnod arall, eu cadarnhau drwy staenio â fioled grisial, ac yna eu crafu cyn eu hamlygu i gyffuriau. Ar 5 micrograms per mL, gostyngodd y cyfrif gyda glas methylen yn unig i 2.3 gwaith 10 i bŵer 2 erbyn diwrnod 6, ymhlith y canlyniadau gorau ar gyfer cyffuriau unigol, ond nid sero. Cyrhaeddodd y ddau gyfuniad â glas methylen sero erbyn diwrnod 6, fel y gwnaeth y ddau gyfuniad â ciprofloxacin.

Tynnodd yr awduron sylw at yr un cyfyngiadau ag y byddai darllenydd gofalus yn eu nodi: bioffilm ifanc wedi’i chrafu yn hytrach na bioffilm hŷn gyfan, un crynodiad cyfleus ar gyfer pob cyffur yn hytrach na phob cyffur ar ei lefel brig realistig ei hun, dim ond parau dethol yn canolbwyntio ar azithromycin neu rifampin, un straen, dim anifeiliaid, dim cleifion. Cynigiwyd gwaith tri chyffur yn ddiweddarach; ni adroddwyd arno.

Cymharu dyluniadau’r astudiaethau

Mae’r tabl yn crynhoi pwynt yr erthygl hon. Gwaith meithrin yw popeth i’r chwith o’r golofn olaf. Nid oes dim yn y naill bapur na’r llall sy’n perthyn i’r golofn olaf.

Nid Borrelia yw Bartonella

Mae’r ddau bapur yn sôn am Borrelia burgdorferi, y sbirocet sy’n achosi clefyd Lyme, oherwydd bod yr assay llifyn yn deillio o waith cynharach ar gyfnod llonydd Borrelia yn yr un labordy, lle roedd glas methylen a daptomycin hefyd wedi rhoi canlyniadau cadarnhaol. Mae’r hanes hwnnw’n gyd-destun defnyddiol ac yn ffynhonnell gyffredin o gamgymeriadau.

Nid oes unrhyw arbrawf yn y naill bapur Bartonella na’r llall yn profi Borrelia ochr yn ochr â Bartonella. Mae’r organebau’n wahanol, mae’r cyfryngau’n wahanol, mae’r crynodiadau’n wahanol, a nodwyd mai dyfalu oedd yr effaith ar bilenni a ragdybiwyd ar gyfer glas methylen mewn Bartonella, a bod angen mwy o astudiaeth. Ni ddylid trosglwyddo canlyniadau rhwng rhywogaethau, ac nid yw’r naill bapur na’r llall yn cefnogi honiadau eang am barasitiaid. Am y rheswm hwn, mae’r gymhariaeth o gelloedd dyfalbarhaus Borrelia a Bartonella yn cadw’r ddwy gorff o lenyddiaeth ar wahân.

Pam nad yw meithriniadau’n troi’n brotocol

Mae diddordeb chwilio mewn protocol glas methylen ar gyfer bartonella yn ddealladwy. Y papurau hyn yw’r rheswm pam y dylid trin yr ymadrodd hwnnw fel arwydd rhybudd yn hytrach na rhestr siopa.

Yn gyntaf, nid presgripsiwn yw 5 micrograms per mL mewn ffynnon. Nid oes unrhyw wybodaeth gysylltiedig am amsugno, dosbarthiad, rhwymo i broteinau, treiddiad i mewn i gelloedd, na goddefadwyedd. Dewisodd yr awduron y lefel fel cyfartaledd bras o lefelau brig gwrthfiotigau a dywedasant y dylai gwaith yn y dyfodol ddefnyddio pob cyffur ar ei lefel realistig ei hun.

Yn ail, mae sero cytrefi’n golygu dim cytrefi o dan yr amodau platio hynny, nid meinwe ddi-haint. Mae celloedd dyfalbarhaus, bacteria o fewn celloedd, a chyfyngiadau samplu i gyd y tu allan i’r plât agar.

Yn drydydd, gall cyfuniadau sy’n sterileiddio ffynnon fethu neu achosi niwed mewn corff. Parau labordy ar lefelau amlygiad labordy yw azithromycin gyda glas methylen a rifampin gyda glas methylen. Heb ffarmacocineteg mewn anifeiliaid a data dynol rheoledig, nid oes dos, hyd triniaeth, na chymhareb budd i risg. Dylai unrhyw un sy’n pwyso a mesur opsiynau eu trafod â chlinigydd ac adolygu pryd mae angen goruchwyliaeth feddygol wrth ddefnyddio glas methylen cyn dod i unrhyw gasgliad o ddata dysglau meithrin.

Dyma’r casgliad cyfyngedig y mae’r papurau hyn yn ei gefnogi: mae gan las methylen weithgarwch y gellir ei atgynhyrchu yn erbyn B. henselae JK53 nad yw’n tyfu in vitro, gan gynnwys mewn cyfuniadau dau gyffur yn y labordy, gyda’r canlyniadau cryfaf ar gyfer cyfuniadau a chelloedd o fioffilmiau’n dod o astudiaeth 2020. Mae popeth arall, gan gynnwys a yw’r gweithgarwch hwnnw o bwys i bartonellosis mewn pobl, yn dal heb ei brofi.