Agar EMB yn erbyn agar MacConkey: dewis a dehongli cyfryngau

Mae myfyriwr yn rhesogi'r un sampl dŵr ar ddau blât. Ar un, mae cytrefi tywyll â disgleirdeb metelaidd gwyrdd yn ymddangos. Ar y llall, mae cytrefi pinc llachar â halo niwlog yn ymddangos. Cafodd y ddau blât eu brechu o'r un tiwb, eu deori ochr yn ochr, a'u darllen ar yr un awr. Mae'r myfyriwr yn gofyn pa blât sy'n gywir.

Mae'r ddau blât yn gywir. Maent yn ateb cwestiynau gwahanol. Daw'r dryswch o drin y ddau gyfrwng fel sgriniau cyfnewidiol ar gyfer bacteria'r perfedd. Maent yn rhannu diben, sef dethol organebau enterig Gram-negatif a gwahanu epleswyr lactos oddi wrth rai nad ydynt yn eplesu, ond maent yn cyflawni'r diben hwnnw drwy gemeg wahanol a rhesymeg weledol wahanol. Unwaith y byddwch yn gweld y ddau gysyniad sylfaenol, daw dewis plât a darllen cytrefi yn arferol.

Yr ateb byr

Mae agar EMB yn defnyddio dau lifyn, eosin Y a glas methylen, sy'n cyflawni dwy swyddogaeth: maent yn atal twf Gram-bositif ac yn gwaddodi o amgylch cynhyrchwyr asid cryf i greu cytrefi tywyll, yn glasurol gyda sglein metelaidd gwyrdd ar gyfer Escherichia coli. Mae agar MacConkey yn gwahanu'r swyddogaethau: mae halwynau bustl ynghyd â fioled grisial yn atal Gram-bositifau, mae lactos yn cynnal eplesiad, ac mae coch niwtral yn dangos asid fel cytrefi pinc neu goch. Os mai'r dasg yw dangos E. coli yn dybiedig mewn ffordd drawiadol, mae gan EMB ei le. Os mai'r dasg yw didoli epleswyr lactos oddi wrth rai nad ydynt yn eplesu yn glir yn binc yn erbyn di-liw, yn enwedig mewn llifoedd gwaith carthion neu wrin, MacConkey yw'r darlleniad symlach fel arfer. Nid yw'r naill blât na'r llall yn adnabod organeb ar sail lliw yn unig.

EMB: llifynnau sy'n dethol ac yn dangos ar yr un pryd

Mae cysyniad EMB yn cyfuno dethol a dangos yn yr un moleciwlau. Mae protocol agar eosin methylene blue ASM yn disgrifio EMB fel cyfrwng detholus a gwahaniaethol, gyda'r pâr o lifynnau yn atal llawer o organebau Gram-bositif tra bod eplesu lactos yn sbarduno amsugno a gwaddodi'r llifynnau. Mae fformiwleiddiad Levine safonol yn cynnwys pepton, lactos, ffosffad, eosin Y, glas methylen, ac agar, fel y rhestrir yn null FDA BAM ar gyfer agar Levine EMB. Sylwch fod ryseitiau EMB hŷn weithiau'n ychwanegu swcros ochr yn ochr â lactos, tra bod Levine EMB yn cynnwys lactos heb swcros, felly cofnodwch pa fformiwleiddiad sydd mewn stoc yn eich labordy.

Mae darllen EMB yn golygu darllen ymddygiad y llifynnau. Mae eplesu lactos egnïol yn cynhyrchu digon o asid i achosi gwaddodiad trwm o'r llifynnau, gan roi canolau glas-du tywyll i E. coli ac, yn yr achos clasurol, sglein metelaidd gwyrdd mewn golau adlewyrchiedig. Mae epleswyr gwannach fel Enterobacter a Klebsiella fel arfer yn tyfu fel cytrefi mwcoid pinc i borffor heb y sglein hwnnw. Yn gyffredinol, mae rhai nad ydynt yn eplesu fel Salmonella, Shigella, a Proteus yn tyfu fel cytrefi di-liw neu dryloyw am nad ydynt yn cynhyrchu'r ymchwydd asid sy'n gwaddodi'r llifynnau. Fel arfer caiff Gram-bositifau eu hatal, er bod graddau'r ataliad yn amrywio yn ôl straen a chynnyrch. Mae cemeg lawn paratoi llifynnau, gan gynnwys pam mae glas methylen yn ymddwyn fel staen cationig yn y lle cyntaf, yn perthyn i drafodaeth ar wahân am fformiwleiddiadau llifynnau, ac mae'r cyd-destun microsgopeg cyffredinol i'w weld mewn atlas o ddulliau staenio. Mae'r erthygl hon yn canolbwyntio ar ddewis a darllen platiau.

Mae'r ffigur uchod yn ddarluniadol. Mae'n dangos y rhesymeg weledol i'w disgwyl: cytrefi tywyll â sglein ynghyd â mathau mwcoid pinc a mathau golau ar EMB, o'u cymharu â mathau pinc yn erbyn rhai golau ar MacConkey. Defnyddiwch ef i ddysgu'r patrwm, yna cadarnhewch bob dehongliad yn erbyn rheolyddion wedi'u ffotograffu a mewnosodiad y cynnyrch ar gyfer yr union gyfrwng sydd ar eich mainc.

MacConkey: swyddogaethau ar wahân, rheol weledol symlach

Mae cysyniad MacConkey yn neilltuo pob swyddogaeth i gynhwysyn ar wahân. Mae protocol agar MacConkey ASM yn cyflwyno'r un fframwaith detholus a gwahaniaethol, ac mae dull FDA BAM ar gyfer agar MacConkey yn rhestru'r cydrannau gweithredol: peptonau, lactos, halwynau bustl, halen, coch niwtral, fioled grisial, ac agar. Mae halwynau bustl ynghyd â fioled grisial yn dethol yn erbyn Gram-bositifau. Mae lactos yn darparu'r swbstrad eplesu. Mae coch niwtral yn gweithredu fel dangosydd pH, gan droi'n binc i goch lle mae asid yn ffurfio, weithiau gyda bustl wedi'i waddodi o amgylch epleswyr cryf.

Mae'r rheol ddarllen yn fwriadol syml: mae pinc yn golygu epleswr lactos, ac mae di-liw neu olau yn golygu un nad yw'n eplesu. Mae E. coli yn ymddangos yn binc i goch, yn aml gyda halo gwaddodiad bustl. Mae Klebsiella ac Enterobacter yn ymddangos yn binc ac yn aml yn fwcoid oherwydd eu capsiwlau. Mae Salmonella, Shigella, Proteus, a llawer o ffyn Gram-negatif eraill yn ymddangos yn ddi-liw. Mae mantais ychwanegol yn bwysig mewn labordai addysgu: mae halwynau bustl yn gyffredinol yn lleihau ymledu Proteus, felly mae'n haws cael cytrefi ynysig ar MacConkey nag ar gyfryngau nad ydynt yn ddetholus, er nad yw'r ataliad yn llwyr ac mae dewisiadau amgen heb halen ar gael pan mai rheoli ymledu yw'r flaenoriaeth.

Mae'r rheswm moleciwlaidd dros ymddygiad y llifynnau fel hyn yn deillio o wefr a strwythur. Mae glas methylen yn llifyn phenothiazin cationig y mae ei strwythur a'i briodweddau yn egluro ei affinedd at arwynebau bacteriol asidig, sef yr un affinedd sy'n gweithredu pan fydd yn gwaddodi mewn parthau asidig ar EMB.

Cymhariaeth ar gip

Darllenwch y tabl fel gweithdrefn benderfynu. Pan fo angen i fyfyrwyr weld graddiant o gryfder eplesu gydag un pwynt terfyn dramatig, mae EMB yn ei ddangos. Pan fo angen didoli deuaidd cyflym cyn cadarnhad biocemegol, mae MacConkey yn ei ddangos.

Pa gyfrwng ar gyfer pa sampl

Ar gyfer ymarferion dŵr sydd wedi'u hanelu at adnabod colifformau fecal neu E. coli yn dybiedig, mae EMB yn ddeniadol oherwydd bod y sglein yn nodwedd weledol nodedig. Mae MacConkey hefyd yn delio ag organebau enterig Gram-negatif ac mae ganddo hanes o ddefnydd gyda dŵr, ond nid yw'r naill blât na'r llall yn cymryd lle dull rheoleiddiol ar gyfer dŵr, a all bennu cyfryngau fel mTEC wedi'i addasu neu MI yn dibynnu ar y prawf. Gwiriwch y dull y mae'n ofynnol i'ch labordy ei ddilyn.

Ar gyfer gwahanu epleswyr oddi wrth rai nad ydynt yn eplesu mewn arddull samplau carthion, MacConkey yw'r mwyaf defnyddiol o'r ddau yn gyffredinol. Mae gwaith carthion ymarferol ar gyfer Salmonella neu Shigella fel arfer yn ychwanegu cyfryngau enterig mwy detholus fel XLD neu Hektoen enterig yn hytrach na dibynnu ar MacConkey yn unig.

Ar gyfer addysgu yn arddull samplau wrin sy'n efelychu llif gwaith clinigol, parwch MacConkey ag agar gwaed. Mae MacConkey yn darparu'r didoliad Gram-negatif cynnar tra bod agar gwaed yn adfer organebau y mae MacConkey yn eu hatal. Mae'r paru hwn yn safonol mewn disgrifiadau clinigol o sefydlu diwylliant wrin.

Ar gyfer addysgu'r cysyniad yn unig, defnyddiwch y ddau. Mae EMB yn dysgu bod cryfder eplesu yn bwysig ac y gall un moleciwl gyflawni dwy swyddogaeth. Mae MacConkey yn dysgu dyluniad modiwlaidd: y detholwr, y swbstrad, a'r dangosydd yn cael eu cadw ar wahân. Anaml y bydd myfyrwyr sy'n rhesogi E. coli hysbys, Klebsiella aerogenes hysbys, a Salmonella hysbys ochr yn ochr ar y ddau gyfrwng yn drysu rhwng y ddwy resymeg eto.

Peryglon darllen sy'n ailadrodd bob tymor

Y methiant mwyaf cyffredin yw adnabod ar sail lliw yn unig. Gall pinc ar MacConkey fod yn E. coli, Klebsiella, Enterobacter, neu epleswr arall. Gall di-liw fod yn Salmonella, Shigella, Proteus, Pseudomonas, neu un arall nad yw'n eplesu. Ffenoteip sgrinio yw lliw sy'n cyfeirio gwaith cadarnhau fel staen Gram, ocsidas, paneli biocemegol, neu adnabod offerynnol, nid enw rhywogaeth.

Yr ail fethiant yw gor-ddehongli diffyg sglein. Mae rhai cytrefi E. coli gwirioneddol, yn enwedig rhai ynysig, yn cynhyrchu ychydig neu ddim sglein metelaidd ar EMB. Nid yw diffyg sglein yn eithrio E. coli, ac nid yw presenoldeb sglein yn ei brofi. Triniwch y sglein fel cliw tybiedig.

Y trydydd methiant yw cymharu platiau o oedrannau gwahanol. Gall epleswyr lactos hwyr droi'n binc ar MacConkey ar ôl deori hir, sy'n pylu'r rhaniad clir rhwng epleswr ac un nad yw'n eplesu. Darllenwch ar yr awr a bennir gan y labordy a chofnodwch yr amser deori gyda'r canlyniad.

Y pedwerydd methiant yw darllen twf cymysg fel un organeb. Mae cytref binc wrth ymyl cytref ddi-liw yn cofnodi dau ffenoteip, nid un canolraddol. Dewiswch gytrefi sydd wedi'u hynysu'n dda a gweithiwch gyda phob morffoteip ar wahân. Mae gwead mwcoid yn creu trap tebyg: gall Klebsiella ac Enterobacter ill dau edrych yn fwcoid, felly nid yw capsiwl ar ei ben ei hun byth yn pennu'r enw. Mae'r organeb a ddysgid unwaith fel Enterobacter aerogenes bellach wedi'i dosbarthu fel Klebsiella aerogenes, sy'n egluro pam mae siartiau hŷn a labeli mwy newydd yn ymddangos fel pe baent yn anghytuno.

Rheolyddion a rheol gloi

Defnyddiwch reolyddion wedi'u ffotograffu neu reolyddion ffres bob sesiwn: E. coli ar gyfer yr adwaith epleswr cryf, Klebsiella aerogenes ar gyfer eplesu mwcoid heb y sglein clasurol, straen Salmonella ar gyfer yr adwaith di-liw nad yw'n eplesu, a Staphylococcus aureus i gadarnhau ataliad Gram-bositif ar eich union gynnyrch. Parwch rifau'r straenau a'r meini prawf derbyn â mewnosodiad y gwneuthurwr, oherwydd mae detholusrwydd yn newid yn ôl cynnwys bustl, fioled grisial, a llifynnau.

Cofiwch un frawddeg wrth y fainc. Mae EMB yn defnyddio llifynnau sy'n dethol ac yn dangos ar yr un pryd, sy'n rhoi arwydd E. coli dramatig ar draul darlleniad mwy cynnil. Mae MacConkey yn gwahanu dethol oddi wrth ddangos, sy'n rhoi didoliad syml rhwng pinc a golau ar draul llai o fanylion am eplesu. Dewiswch y cyfrwng y mae ei gysyniad yn cyfateb i'r cwestiwn, cadarnhewch y lliw gyda phrofion priodol, ac mae'r ddau blât yn peidio â chystadlu ac yn dechrau cydweithio.