EMB aqarı və MacConkey aqarı: mühitin seçilməsi və şərhi

Tələbə eyni su nümunəsini iki lövhəyə ştrix üsulu ilə əkir. Birində yaşıl metal parıltılı tünd koloniyalar görünür. Digərində isə bulanıq halolu parlaq çəhrayı koloniyalar yaranır. Hər iki lövhə eyni sınaq borusundan inokulyasiya edilib, yanaşı inkubasiya olunub və eyni saatda qiymətləndirilib. Tələbə hansı lövhənin düzgün olduğunu soruşur.

Hər iki lövhə düzgündür. Onlar fərqli suallara cavab verir. Qarışıqlıq bu iki mühitə bağırsaq bakteriyaları üçün bir-birini əvəz edən skrininq vasitələri kimi yanaşmaqdan yaranır. Onların ümumi məqsədi qram-mənfi enterik orqanizmləri seçmək və laktoza fermentatorlarını fermentasiya etməyənlərdən ayırmaqdır, lakin bu məqsədi fərqli kimya və fərqli vizual məntiqlə həyata keçirirlər. Bu iki əsas anlayışı başa düşdükdən sonra mühit seçimi və koloniyaların oxunması adi prosedura çevrilir.

Qısa cavab

EMB aqarında iki boya — eosin Y və methylene blue — iki işi eyni anda görür: onlar qram-müsbət inkişafı zəiflədir və güclü turşu istehsalçılarının ətrafında çökərək tünd koloniyalar yaradır; Escherichia coli üçün klassik görünüş metalvari yaşıl parıltıdır. MacConkey aqarı bu funksiyaları ayırır: öd duzları ilə crystal violet qram-müsbətləri zəiflədir, laktoza fermentasiya üçün substrat verir, neutral red isə turşu yaranmasını çəhrayı və ya qırmızı koloniyalarla göstərir. Məqsəd E. coli-nin vizual cəhətdən aydın ilkin nümayişidirsə, EMB uyğun seçimdir. Məqsəd, xüsusilə nəcis və ya sidik iş axınlarında, laktoza fermentatorlarını fermentasiya etməyənlərdən sadə şəkildə çəhrayı və rəngsiz görünüşə əsasən ayırmaqdırsa, MacConkey adətən daha asan oxunur. Heç bir lövhə yalnız rəngə əsasən orqanizmin identifikasiyasını təmin etmir.

EMB: eyni anda həm seçən, həm də siqnal verən boyalar

EMB konsepsiyasında seleksiya və indikator funksiyası eyni molekullarda birləşdirilir. ASM eosin methylene blue agar protokolu EMB-ni həm selektiv, həm də differensial mühit kimi təsvir edir: boya cütü bir çox qram-müsbət orqanizmi inhibə edir, laktoza fermentasiyası isə boyanın mənimsənilməsini və çökməsini gücləndirir. Standart Levine tərkibində pepton, laktoza, fosfat, eosin Y, methylene blue və aqar olur; bunlar Levine EMB aqarı üçün FDA BAM metodunda sadalanır. Nəzərə alın ki, daha köhnə EMB reseptlərində bəzən laktoza ilə yanaşı saxaroza da əlavə edilirdi, Levine EMB isə saxarozasız laktoza ehtiva edir; buna görə laboratoriyanızda hansı formulun istifadə edildiyini qeyd edin.

EMB-ni oxumaq boyaların davranışını oxumaq deməkdir. Güclü laktoza fermentasiyası intensiv boya çökməsini təmin edəcək qədər turşu əmələ gətirir və nəticədə E. coli üçün tünd göy-qara mərkəzlər, klassik halda isə əks olunan işıqda metalvari yaşıl parıltı yaranır. Enterobacter və Klebsiella kimi daha zəif fermentatorlar adətən bu parıltı olmadan çəhrayıdan bənövşəyiyədək mukoid koloniyalar şəklində inkişaf edir. Salmonella, Shigella və Proteus kimi fermentasiya etməyənlər, boyaların çökməsinə səbəb olan güclü turşu əmələ gətirmədikləri üçün, adətən rəngsiz və ya şəffaf koloniyalar yaradır. Qram-müsbətlər adətən zəiflədilir, lakin bu təsirin dərəcəsi ştama və məhsula görə dəyişir. Boyaların hazırlanmasının tam kimyası, o cümlədən methylene blue-nun ilk növbədə niyə kation boyası kimi davrandığı ayrıca boya formulaları müzakirəsinə aiddir; ümumi mikroskopiya konteksti isə boyama üsulları atlasında verilir. Bu məqalə lövhə seçimi və nəticələrin oxunmasına yönəlib.

Yuxarıdakı şəkil illüstrativdir. O, gözlənilən vizual məntiqi göstərir: EMB-də tünd parıltılı koloniyalar, çəhrayı mukoid tiplər və solğun tiplər; MacConkey-də isə çəhrayı və solğun tiplər. Nümunəni öyrənmək üçün bundan istifadə edin, sonra hər bir nəticəni fotoşəkilli nəzarət nümunələri və iş masanızdakı konkret mühitin məhsul təlimatı ilə təsdiqləyin.

MacConkey: ayrılmış funksiyalar, daha sadə vizual qayda

MacConkey konsepsiyasında hər funksiya ayrıca komponentə verilir. ASM MacConkey agar protokolu eyni selektiv və differensial yanaşmanı təqdim edir, MacConkey aqarı üçün FDA BAM metodu isə işlək komponentləri sadalayır: peptonlar, laktoza, öd duzları, duz, neutral red, crystal violet və aqar. Öd duzları ilə crystal violet qram-müsbətləri seçici şəkildə zəiflədir. Laktoza fermentasiya substratını təmin edir. Neutral red pH indikatoru kimi işləyir və turşunun yarandığı yerlərdə çəhrayıdan qırmızıyadək rəng əmələ gətirir; güclü fermentatorların ətrafında bəzən çökmüş öd də görünür.

Oxuma qaydası qəsdən sadədir: çəhrayı laktoza fermentatorunu, rəngsiz və ya solğun görünüş isə fermentasiya etməyəni göstərir. E. coli çəhrayıdan qırmızıyadək görünür və çox vaxt ətrafında öd çöküntüsü halosu olur. Klebsiella və Enterobacter kapsullarına görə çəhrayı və tez-tez mukoid görünür. Salmonella, Shigella, Proteus və bir çox digər qram-mənfi çöplər rəngsiz görünür. Tədris laboratoriyaları üçün əlavə bir üstünlük də var: öd duzları adətən Proteus-un yayılaraq böyüməsini azaldır, buna görə MacConkey-də təcrid olunmuş koloniyalar əldə etmək qeyri-selektiv mühitlərlə müqayisədə daha asandır; bununla belə, bu zəiflətmə mütləq deyil və əsas məqsəd yayılmanın idarə edilməsidirsə, duzsuz alternativlər də mövcuddur.

Boyaların belə davranmasının molekulyar səbəbi yük və quruluşla bağlıdır. Methylene blue kation fenotiazin boyasıdır və onun quruluşu və xüsusiyyətləri turş xarakterli bakterial səthlərə yaxınlığını izah edir; eyni yaxınlıq EMB-də turşu zonalarında çökmə zamanı da rol oynayır.

Bir baxışda müqayisə

Cədvəli qərarvermə proseduru kimi oxuyun. Tapşırıqda tələbələrin fermentasiya gücünün dərəcələrini və bir aydın son nöqtəni görməsi tələb olunursa, EMB bunu göstərir. Tapşırıqda biokimyəvi təsdiqdən əvvəl sürətli ikili bölgü tələb olunursa, bunu MacConkey göstərir.

Hansı nümunə üçün hansı mühit

İlkin nəcis mənşəli koliformların və ya E. coli-nin tanınmasına yönəlmiş su təcrübələrində EMB cəlbedici seçimdir, çünki parıltı vizual olaraq fərqlənir. MacConkey də enterik qram-mənfilər üçün uyğundur və tarixən su analizlərində istifadə olunub, lakin heç bir lövhə tənzimləyici su metodunu əvəz etmir; testdən asılı olaraq belə metodlarda modified mTEC və ya MI kimi mühitlər tələb oluna bilər. Laboratoriyanızın əməl etməli olduğu metodu yoxlayın.

Fermentatorların fermentasiya etməyənlərdən ayrıldığı nəcis tipli işlərdə MacConkey ümumiyyətlə bu iki mühitdən daha faydalıdır. Salmonella və ya Shigella üçün praktik nəcis analizlərində adətən yalnız MacConkey-ə güvənmək əvəzinə XLD və ya Hektoen enteric kimi daha selektiv enterik mühitlər də əlavə olunur.

Klinik iş axınını təqlid edən sidik tipli tədris üçün MacConkey-ni qan aqarı ilə birlikdə istifadə edin. MacConkey ilkin qram-mənfi bölgünü təmin edir, qan aqarı isə MacConkey-nin zəiflətdiyi orqanizmlərin inkişafına imkan verir. Bu cütlük sidik kulturasının qurulmasına dair klinik təsvirlərdə standart yanaşmadır.

Konsepsiyanın özünü öyrətmək üçün hər ikisini istifadə edin. EMB fermentasiya gücünün əhəmiyyətini və bir molekulun iki rol oynaya biləcəyini göstərir. MacConkey modul dizaynı öyrədir: selektor, substrat və indikator ayrı saxlanılır. Məlum E. coli, məlum Klebsiella aerogenes və məlum Salmonella nümunələrini hər iki mühitdə yanaşı əkən tələbələr adətən bu iki məntiqi yenidən qarışdırmırlar.

Hər dövrdə təkrarlanan oxuma səhvləri

Ən çox rast gəlinən səhv yalnız rəngə görə identifikasiya aparmaqdır. MacConkey-də çəhrayı rəng E. coli, Klebsiella, Enterobacter və ya başqa fermentatora aid ola bilər. Rəngsiz görünüş Salmonella, Shigella, Proteus, Pseudomonas və ya başqa fermentasiya etməyən orqanizmi göstərə bilər. Rəng növün adı deyil; Gram boyaması, oksidaza testi, biokimyəvi panellər və ya cihazla identifikasiya kimi təsdiqləyici işləri istiqamətləndirən skrininq fenotipidir.

İkinci səhv parıltının olmamasını həddindən artıq şərh etməkdir. Bəzi həqiqi E. coli koloniyaları, xüsusilə təcrid olunmuş koloniyalar, EMB-də az və ya heç metalvari parıltı yaratmır. Parıltının olmaması E. coli-ni istisna etmir, parıltının olması isə bunu sübut etmir. Parıltıya ilkin göstərici kimi yanaşın.

Üçüncü səhv müxtəlif yaşda olan lövhələri müqayisə etməkdir. Gecikmiş laktoza fermentatorları uzunmüddətli inkubasiyadan sonra MacConkey-də çəhrayı rəng ala bilər və bu, fermentatorla fermentasiya etməyən arasındakı aydın fərqi zəiflədir. Nəticəni laboratoriyanın müəyyən etdiyi saatda oxuyun və inkubasiya müddətini nəticə ilə birlikdə qeyd edin.

Dördüncü səhv qarışıq inkişafı bir orqanizm kimi oxumaqdır. Rəngsiz koloniyanın yanında yerləşən çəhrayı koloniya aralıq fenotipi deyil, iki fenotipi göstərir. Yaxşı təcrid olunmuş koloniyaları seçin və hər morfotiplə ayrıca işləyin. Mukoid tekstura da oxşar tələ yaradır: həm Klebsiella, həm də Enterobacter mukoid görünə bilər, buna görə yalnız kapsula əsasən ad təyin etmək olmaz. Əvvəllər Enterobacter aerogenes kimi tədris edilən orqanizm indi Klebsiella aerogenes kimi təsnif edilir; köhnə cədvəllərlə yeni etiketlərin niyə ziddiyyətli göründüyünü bu izah edir.

Nəzarətlər və yekun qayda

Hər sessiyada fotoşəkilli və ya təzə nəzarət nümunələri işlədin: güclü fermentator reaksiyası üçün E. coli, klassik parıltı olmadan mukoid fermentasiya üçün Klebsiella aerogenes, rəngsiz fermentasiya etməyən reaksiyası üçün Salmonella ştamı və konkret məhsulunuzda qram-müsbətlərin zəiflədilməsini təsdiqləmək üçün Staphylococcus aureus. Ştam nömrələrini və qəbul meyarlarını istehsalçının təlimatına uyğunlaşdırın, çünki selektivlik öd, crystal violet və boya miqdarına görə dəyişir.

İş masasında bir cümləni yadda saxlayın. EMB həm seçən, həm də siqnal verən boyalardan istifadə edir; bunun nəticəsində daha incə şərh tələb olunsa da, E. coli üçün nəzərəçarpan siqnal əldə edilir. MacConkey seçmə funksiyasını siqnalvermədən ayırır; bunun nəticəsində fermentasiya haqqında daha az detal versə də, sadə çəhrayı və solğun bölgü əldə edilir. Suala uyğun konsepsiyaya malik mühiti seçin, rəng nəticəsini düzgün testlərlə təsdiqləyin və bu iki lövhə bir-biri ilə rəqabət aparmaq əvəzinə bir-birini tamamlayacaq.