EMB agar বনাম MacConkey agar: মাধ্যম নিৰ্বাচন আৰু ব্যাখ্যা

এজন শিক্ষাৰ্থীয়ে একেটা পানীৰ নমুনা দুটা প্লেটত streak কৰে। এটাত সেউজীয়া ধাতৱীয় চকচকনি থকা গাঢ় কলনী দেখা যায়। আনটোত ধোঁৱাটে halo-সহ উজ্জ্বল গোলাপী কলনী দেখা যায়। দুয়োটা প্লেট একেটা টিউবৰ পৰা inoculate কৰা হৈছিল, কাষে কাষে incubate কৰা হৈছিল, আৰু একে সময়তে পঢ়া হৈছিল। শিক্ষাৰ্থীজনে সোধে কোনখন প্লেট সঠিক।

দুয়োখন প্লেটেই সঠিক। ইহঁতে ভিন্ন প্ৰশ্নৰ উত্তৰ দিয়ে। অন্ত্ৰীয় বেক্টেৰিয়াৰ বাবে এই দুটা মাধ্যমক পৰস্পৰ-বিনিময়যোগ্য screen বুলি ধৰি লোৱাৰ ফলতেই বিভ্ৰান্তি হয়। ইহঁতৰ উদ্দেশ্য একে—Gram negative অন্ত্ৰীয় জীৱাণু নিৰ্বাচন কৰা আৰু lactose fermenter-ক nonfermenter-ৰ পৰা পৃথক কৰা—কিন্তু সেই উদ্দেশ্য ইহঁতে ভিন্ন ৰসায়ন আৰু ভিন্ন দৃশ্যমান যুক্তিৰে কাৰ্যকৰী কৰে। এই দুটা অন্তৰ্নিহিত ধাৰণা বুজি পালে প্লেট নিৰ্বাচন আৰু কলনী পঢ়া নিয়মীয়া কাম হৈ পৰে।

সংক্ষিপ্ত উত্তৰ

EMB agar-এ eosin Y আৰু methylene blue নামৰ দুটা ৰঞ্জক ব্যৱহাৰ কৰে, যিবোৰে একেলগে দুটা কাম কৰে: ইহঁতে Gram positive বৃদ্ধিক দমন কৰে আৰু শক্তিশালী acid producer-ৰ চাৰিওফালে precipitate হৈ গাঢ় কলনী সৃষ্টি কৰে; Escherichia coli-ৰ ক্ষেত্ৰত সাধাৰণতে ধাতৱীয় সেউজীয়া চকচকনি দেখা যায়। MacConkey agar-এ কামবোৰ পৃথক কৰে: bile salts আৰু crystal violet-এ Gram positive দমন কৰে, lactose-এ fermentation-ৰ substrate যোগায়, আৰু neutral red-এ acid উৎপাদনক গোলাপী বা ৰঙা কলনী হিচাপে দেখুৱায়। যদি কামটো E. coli-ৰ স্পষ্ট presumptive demonstration হয়, EMB উপযোগী। যদি কামটো lactose fermenter-ক nonfermenter-ৰ পৰা সহজে গোলাপী বনাম বৰ্ণহীন ৰূপে পৃথক কৰা হয়, বিশেষকৈ stool বা urine workflow-ত, তেন্তে MacConkey সাধাৰণতে পঢ়িবলৈ অধিক সহজ। কেৱল ৰঙৰ ভিত্তিত কোনো প্লেটেই কোনো জীৱাণুৰ নিশ্চিত পৰিচয় নিদিয়ে।

EMB: একেলগে নিৰ্বাচন আৰু সংকেত দিয়া ৰঞ্জক

EMB-ৰ ধাৰণাত নিৰ্বাচন আৰু সূচনাৰ কাম একে অণুত সন্নিবিষ্ট। ASM eosin methylene blue agar protocol-এ EMB-ক নিৰ্বাচনী আৰু পাৰ্থক্যসূচক দুয়ো ধৰণৰ মাধ্যম হিচাপে বৰ্ণনা কৰে; ৰঞ্জকৰ জোৰাটোৱে বহু Gram positive জীৱাণুক দমন কৰে, আনহাতে lactose fermentation-এ ৰঞ্জক গ্ৰহণ আৰু precipitation বৃদ্ধি কৰে। FDA BAM method for Levine EMB agar-ত উল্লেখ কৰা এটা মানক Levine formulation-ত peptone, lactose, phosphate, eosin Y, methylene blue আৰু agar থাকে। মন কৰিব যে কিছুমান পুৰণি EMB recipe-ত lactose-ৰ সৈতে sucrose-ও যোগ কৰা হৈছিল, কিন্তু Levine EMB-ত sucrose নথকা lactose থাকে; সেয়ে আপোনাৰ পৰীক্ষাগাৰত কোনটো formulation stock কৰা আছে সেয়া লিখি ৰাখক।

EMB পঢ়া মানে ৰঞ্জকৰ আচৰণ পঢ়া। শক্তিশালী lactose fermentation-এ যথেষ্ট acid উৎপন্ন কৰে, যাৰ ফলত অধিক ৰঞ্জক precipitate হয় আৰু E. coli-ৰ কলনীৰ কেন্দ্ৰ গাঢ় নীলা-ক'লা হয়; সাধাৰণ ক্ষেত্ৰত reflected light-ত ধাতৱীয় সেউজীয়া চকচকনিও দেখা যায়। Enterobacter আৰু Klebsiella-ৰ দৰে দুৰ্বল fermenter সাধাৰণতে সেই চকচকনি নোহোৱাকৈ গোলাপীৰ পৰা বেঙুনীয়া, mucoid কলনী হিচাপে বৃদ্ধি পায়। Salmonella, Shigella আৰু Proteus-ৰ দৰে nonfermenter সাধাৰণতে বৰ্ণহীন বা স্বচ্ছ কলনী হিচাপে বৃদ্ধি পায়, কাৰণ ইহঁতে ৰঞ্জক precipitate কৰাব পৰা তীব্ৰ acid burst সৃষ্টি নকৰে। Gram positive সাধাৰণতে দমন হয়, যদিও এই দমন সম্পূৰ্ণ নহয় আৰু strain তথা product অনুসৰি ভিন্ন হয়। methylene blue প্ৰথমে কিয় cationic stain হিচাপে আচৰণ কৰে তাৰ ব্যাখ্যাসহ সম্পূৰ্ণ ৰঞ্জক প্ৰস্তুতিৰ ৰসায়ন dye formulation-ৰ পৃথক আলোচনাৰ বিষয়, আৰু সাধাৰণ microscopy প্ৰসংগ এটা staining methods atlas-ত আছে। এই প্ৰবন্ধ প্লেট নিৰ্বাচন আৰু পঢ়াত সীমাবদ্ধ।

ওপৰৰ চিত্ৰখন উদাহৰণমূলক। ইয়াত আশা কৰিবলগীয়া দৃশ্যমান যুক্তি দেখুওৱা হৈছে: EMB-ত গাঢ় চকচকনি থকা কলনী, গোলাপী mucoid ধৰণ আৰু পাতল ধৰণ; বিপৰীতে MacConkey-ত গোলাপী বনাম পাতল ধৰণ। pattern শিকিবলৈ ইয়াক ব্যৱহাৰ কৰক, তাৰ পাছত প্ৰতিটো সিদ্ধান্ত photographed control আৰু আপোনাৰ bench-ত থকা নিৰ্দিষ্ট মাধ্যমৰ product insert-ৰ সৈতে নিশ্চিত কৰক।

MacConkey: পৃথক কাম, অধিক সহজ দৃশ্যমান নিয়ম

MacConkey-ৰ ধাৰণাত প্ৰতিটো কাম পৃথক ingredient-ক দিয়া হয়। ASM MacConkey agar protocol-এ একে নিৰ্বাচনী আৰু পাৰ্থক্যসূচক কাঠামো বৰ্ণনা কৰে, আৰু FDA BAM method for MacConkey agar-এ কাৰ্যকৰী উপাদানসমূহ তালিকাভুক্ত কৰে: peptones, lactose, bile salts, salt, neutral red, crystal violet আৰু agar। Bile salts আৰু crystal violet-এ Gram positive-ৰ বিৰুদ্ধে নিৰ্বাচন কৰে। Lactose-এ fermentation substrate যোগায়। Neutral red-এ pH reporter হিচাপে কাম কৰে; acid সৃষ্টি হোৱা ঠাইত ই গোলাপীৰ পৰা ৰঙা হয়, আৰু শক্তিশালী fermenter-ৰ চাৰিওফালে কেতিয়াবা precipitated bile দেখা যায়।

পঢ়াৰ নিয়ম ইচ্ছাকৃতভাৱে সহজ: গোলাপী মানে lactose fermenter, বৰ্ণহীন বা পাতল মানে nonfermenter। E. coli গোলাপীৰ পৰা ৰঙা দেখা যায়, প্ৰায়ে bile precipitate halo-সহ। Klebsiella আৰু Enterobacter গোলাপী দেখা যায় আৰু capsule-ৰ বাবে প্ৰায়ে mucoid হয়। Salmonella, Shigella, Proteus আৰু বহু আন Gram negative rod বৰ্ণহীন দেখা যায়। Teaching lab-ত এটা অতিৰিক্ত সুবিধাও আছে: bile salts-এ সাধাৰণতে Proteus swarming কমায়, সেয়ে nonselective media-ৰ তুলনাত MacConkey-ত পৃথক কলনী লাভ কৰাটো সহজ; যদিও দমন সম্পূৰ্ণ নহয় আৰু swarming নিয়ন্ত্ৰণ মূল অগ্ৰাধিকাৰ হলে salt free বিকল্পো আছে।

ৰঞ্জকবোৰে এনেদৰে আচৰণ কৰাৰ আণৱিক কাৰণ charge আৰু structure-ৰ সৈতে জড়িত। Methylene blue এটা cationic phenothiazine dye, আৰু ইয়াৰ structure and properties-এ acidic bacterial surface-ৰ প্ৰতি ইয়াৰ affinity ব্যাখ্যা কৰে; EMB-ৰ acid zone-ত ই precipitate হোৱাৰ সময়তো একেটা affinity কাম কৰে।

এক নজৰত তুলনা

তালিকাখনক এটা সিদ্ধান্ত পদ্ধতি হিচাপে পঢ়ক। যেতিয়া exercise-ত শিক্ষাৰ্থীয়ে fermentation strength-ৰ gradient-ৰ সৈতে এটা নাটকীয় endpoint দেখিব লাগে, EMB-এ সেয়া দেখুৱায়। যেতিয়া exercise-ত biochemical confirmation-ৰ আগতে দ্ৰুত binary sort প্ৰয়োজন হয়, MacConkey-এ সেয়া দেখুৱায়।

কোন নমুনাৰ বাবে কোন মাধ্যম

Presumptive fecal coliform বা E. coli চিনাক্তকৰণ লক্ষ্য কৰা পানীসম্পৰ্কীয় exercise-ৰ বাবে EMB আকৰ্ষণীয়, কাৰণ ইয়াৰ চকচকনি দৃশ্যত স্পষ্ট। MacConkey-ও অন্ত্ৰীয় Gram negative সামৰি লয় আৰু পানী পৰীক্ষাত ইয়াৰ ঐতিহাসিক ব্যৱহাৰ আছে, কিন্তু কোনোখন প্লেটেই regulatory water method-ৰ বিকল্প নহয়; পৰীক্ষা অনুসৰি modified mTEC বা MI-ৰ দৰে নিৰ্দিষ্ট media লাগিব পাৰে। আপোনাৰ পৰীক্ষাগাৰে অনুসৰণ কৰিবলগীয়া method-টো পৰীক্ষা কৰক।

Fermenter-ক nonfermenter-ৰ পৰা পৃথক কৰাৰ stool style workflow-ত এই দুটাৰ ভিতৰত MacConkey সাধাৰণতে অধিক উপযোগী। Salmonella বা Shigella-ৰ practical stool work-ত সাধাৰণতে কেৱল MacConkey-ৰ ওপৰত নিৰ্ভৰ নকৰি XLD বা Hektoen enteric-ৰ দৰে অধিক নিৰ্বাচনী enteric media যোগ কৰা হয়।

Clinical workflow অনুকৰণ কৰা urine style teaching-ৰ বাবে MacConkey-ৰ সৈতে blood agar জোৰা দিয়ক। MacConkey-এ আৰম্ভণিৰ Gram negative sort দিয়ে, আনহাতে blood agar-এ MacConkey-এ দমন কৰা জীৱাণুবোৰ পুনৰুদ্ধাৰ কৰে। Urine culture setup-ৰ clinical বৰ্ণনাত এই pairing মানক।

বিশুদ্ধ ধাৰণামূলক শিক্ষণৰ বাবে দুয়োটা ব্যৱহাৰ কৰক। EMB-এ শিকায় যে fermentation strength গুৰুত্বপূৰ্ণ আৰু এটা molecule-এ দুটা ভূমিকা ল'ব পাৰে। MacConkey-এ modular design শিকায়: selector, substrate আৰু reporter পৃথক ৰখা। যিসকল শিক্ষাৰ্থীয়ে known E. coli, known Klebsiella aerogenes আৰু known Salmonella দুয়োটা media-ত কাষে কাষে streak কৰে, তেওঁলোকে সাধাৰণতে এই দুটা যুক্তি পুনৰ গুলাই নেপেলায়।

প্ৰতিটো term-ত পুনৰ দেখা দিয়া পঢ়াৰ ভুল

সৰ্বাধিক সাধাৰণ ভুল হৈছে কেৱল ৰঙৰ ভিত্তিত পৰিচয় নিৰ্ণয় কৰা। MacConkey-ত গোলাপী E. coli, Klebsiella, Enterobacter বা অন্য fermenter হ'ব পাৰে। বৰ্ণহীন কলনী Salmonella, Shigella, Proteus, Pseudomonas বা অন্য nonfermenter হ'ব পাৰে। ৰং হৈছে এটা screening phenotype, যিয়ে Gram stain, oxidase, biochemical panel বা instrument identification-ৰ দৰে confirmatory work-ৰ দিশ নিৰ্দেশ কৰে; ই কোনো species-ৰ নাম নহয়।

দ্বিতীয় ভুল হৈছে চকচকনি নথকাক অত্যধিক গুৰুত্ব দিয়া। কিছুমান প্ৰকৃত E. coli কলনীয়ে, বিশেষকৈ isolated কলনীয়ে, EMB-ত অতি কম বা একেবাৰে ধাতৱীয় চকচকনি নেদেখুৱাব পাৰে। চকচকনি নথকাই E. coli বাদ নিদিয়ে, আৰু চকচকনি থাকিলেই ইয়াক প্ৰমাণ নকৰে। চকচকনিক presumptive clue হিচাপে গণ্য কৰক।

তৃতীয় ভুল হৈছে ভিন্ন বয়সৰ প্লেট তুলনা কৰা। Delayed lactose fermenter-এ দীঘলীয়া incubation-ৰ পাছত MacConkey-ত গোলাপী হ'ব পাৰে, যাৰ ফলত fermenter বনাম nonfermenter-ৰ স্পষ্ট বিভাজন অস্পষ্ট হয়। পৰীক্ষাগাৰে নিৰ্ধাৰণ কৰা সময়তে পঢ়ক আৰু ফলৰ সৈতে incubation time লিখি ৰাখক।

চতুৰ্থ ভুল হৈছে mixed growth-ক এটা জীৱাণু বুলি পঢ়া। বৰ্ণহীন কলনীৰ কাষত থকা এটা গোলাপী কলনীয়ে দুটা phenotype সূচায়, কোনো intermediate নহয়। ভালদৰে পৃথক হোৱা কলনী বাছি লওক আৰু প্ৰতিটো morphotype পৃথকে কাম কৰক। Mucoid texture-এ একে ধৰণৰ ফাঁদ সৃষ্টি কৰে: Klebsiella আৰু Enterobacter দুয়োটাই mucoid দেখা যাব পাৰে, সেয়ে কেৱল capsule-এ নাম নিশ্চিত নকৰে। আগতে Enterobacter aerogenes হিচাপে পঢ়োৱা জীৱাণুটোক এতিয়া Klebsiella aerogenes হিচাপে শ্ৰেণীবদ্ধ কৰা হয়; এই কাৰণেই পুৰণি chart আৰু নতুন label-ৰ মাজত অমিল দেখা যায়।

Controls আৰু সমাপ্তিৰ নিয়ম

প্ৰতিটো session-ত photographed বা fresh control চলাওক: শক্তিশালী fermenter reaction-ৰ বাবে E. coli, classic sheen নোহোৱাকৈ mucoid fermentation-ৰ বাবে Klebsiella aerogenes, বৰ্ণহীন nonfermenter reaction-ৰ বাবে এটা Salmonella strain, আৰু আপোনাৰ নিৰ্দিষ্ট product-ত Gram positive suppression নিশ্চিত কৰিবলৈ Staphylococcus aureus। Strain number আৰু acceptance criteria manufacturer insert-ৰ সৈতে মিলাওক, কাৰণ bile, crystal violet আৰু dye content-ৰ সৈতে selectivity সলনি হয়।

Bench-ত এটা বাক্য মনত ৰাখক। EMB-এ এনে ৰঞ্জক ব্যৱহাৰ কৰে যিয়ে একেলগে নিৰ্বাচন আৰু সংকেত দিয়ে; ইয়াৰ ফলত E. coli-ৰ নাটকীয় সংকেত পোৱা যায়, কিন্তু পঢ়াটো কিছু সূক্ষ্ম হয়। MacConkey-এ নিৰ্বাচন আৰু সংকেত দিয়াৰ কাম পৃথক কৰে; ইয়াৰ ফলত সৰল গোলাপী বনাম পাতল sort পোৱা যায়, কিন্তু fermentation-ৰ সূক্ষ্ম তথ্য কম থাকে। যি প্ৰশ্নৰ সৈতে ধাৰণাটো মিল খায় সেই মাধ্যম বাছি লওক, সঠিক পৰীক্ষাৰে ৰং নিশ্চিত কৰক, তেতিয়া দুয়োখন প্লেট প্ৰতিদ্বন্দ্বী নহৈ পৰস্পৰৰ পৰিপূৰক হৈ পৰে।