مېتىلېن كۆكىنىڭ يۇتۇلۇش سپېكترى ۋە موليار يۇتۇش ئىقتىدارى: شارائىتى بەلگىلەنگەن پايدىلىنىش ماتېرىيالى

مېتىلېن كۆكىنىڭ سپېكترى، ئۇنىڭدىكى بىر ساننى قايتا ئىشلىتىشكە ئۇرۇنغۇچە، ئاددىيدەك كۆرۈنىدۇ. بىر تەجرىبىخانا موليار سۇسلاشتۇرۇش كوئېففىتسېنتىنى تەخمىنەن 82,000 دەپ دوكلات قىلىدۇ. يەنە بىرى 67,000 دەپ دوكلات قىلىدۇ. ئۈچىنچىسى 100,000 دىن يۇقىرى دەپ دوكلات قىلىدۇ. بۇ ئۈچىنىڭ ھەممىسى ئۆز ئۆلچەش نەتىجىسىنى توغرا تەسۋىرلىگەن بولۇشى مۇمكىن، ئەمما ھېچقايسىسى بۇ بوياقنىڭ ئومۇمىي تۇراقلىق سانى ئەمەس.

بۇ قالايمىقانچىلىق ئىككى پەرقلىق ئۇقۇمنى ئارىلاشتۇرۇۋېتىشتىن كېلىپ چىقىدۇ. يۇتۇلۇش دەرىجىسى — بەلگىلىك ئېرىتمىنى بەلگىلىك كىيۇۋېتتا ئۆلچەش نەتىجىسى. موليار يۇتۇش ئىقتىدارى، كۆپىنچە ئېپسىلون دەپ يېزىلىدۇ، شۇ ئېرىتمىنىڭ مودېلىدىكى بىر پارامېتىر. مېتىلېن كۆكىنىڭ ئۆزئارا بىرلىشىش ھالىتى ئۆزگەرگەندە، مودېلمۇ ئۆزگىرىدۇ، شۇڭا پارامېتىرمۇ ئۆزگىرىدۇ. پايدىلىق ئادەت شۇكى، ھەر بىر كوئېففىتسېنتنى شارائىتى بەلگىلەنگەن قىممەت دەپ قاراش كېرەك: دولقۇن ئۇزۇنلۇقى، ئېرىتكۈچى، pH ياكى بۇففېر، تېمپېراتۇرا، قويۇقلۇق دائىرىسى ۋە ئوپتىكىلىق يول ئۇزۇنلۇقى شۇ سان بىلەن بىللە خاتىرىلىنىدۇ.

سۇيۇق سۇ ئېرىتمىسىدىكى مونومېر بەلبېغى

سۇدىكى سۇيۇق ئېرىتمىدە، مېتىلېن كۆكى كاتىيونىنىڭ ئاساسلىق بەلبېغى 664 تىن 665 nm غىچە بولغان ئەتراپتا بولىدۇ؛ ئوخشىمىغان ئەسۋاب ۋە كالىبرلاش تاللاشلىرىغا ئاساسەن، ئادەتتە 664 تىن 668 nm غىچە دەپ كۆرسىتىلىدۇ. ئېرىتمە يېتەرلىك سۇيۇق بولۇپ، بوياقنىڭ كۆپ قىسمى مونومېر ھالىتىدە بولغاندا، مىقدارلىق ئۆلچەش ئۈچۈن مۇشۇ بەلباغنى تاللاش مۇۋاپىق.

ئەدەبىياتتىكى ئۈچ قىممەت نېمە ئۈچۈن شارائىتنىڭ كۆزگە چېلىقىدىغان ساننىڭ ئۆزىدىن مۇھىم ئىكەنلىكىنى كۆرسىتىدۇ. سۇ ئېرىتمىسى ئەۋرىشكىلىرىنى 1 cm كىيۇۋېتتا تەخمىنەن 7 micromolar دىن تۆۋەن ساقلىغان لاي تەتقىقاتچىلىرى 665 nm دا ئېپسىلوننى تەخمىنەن 82,000 M-1 cm-1 دەپ دوكلات قىلغان. بۇ قىممەت ئىنتايىن سۇيۇق سۇ ئەۋرىشكىلىرىنىڭ تەجرىبە ئاساسىدىكى كالىبرلاش يانتۇلۇقى سۈپىتىدە ئالاھىدە تەپسىلىي ھۆججەتلەشتۈرۈلگەن. كېيىنكى بىر ئىيونسىزلاندۇرۇلغان سۇدىكى دەسلەپكى كالىبرلاش تەتقىقاتى 2.34 تىن 37.52 micromolar غىچە ۋە 1 cm ئوپتىكىلىق يولنى ئىشلىتىپ، ئومۇمىي بوياق ئۈچۈن 665 nm دا تەخمىنەن 67,100 M-1 cm-1 قىممىتىنى بەرگەن. بۇ تۆۋەن نەتىجە زىددىيەتلىك ئەمەس، بەلكى كۈتۈلىدىغان نەتىجە؛ چۈنكى بۇ كالىبرلاش دائىرىسىنىڭ يۇقىرى يېرىمىدا ئاللىقاچان كۆرۈنەرلىك مىقداردا دىمېر بار. ئۈچىنچى قىممەت، يەنى 664 nm دا تەخمىنەن 73,460 M-1 cm-1، pH 6.86 ۋە 293 K دا ئېلىپ بېرىلغان، كۆزىتىلگەن سپېكترنى مونومېر ۋە دىمېر قىسمىغا ئايرىغان تەتقىقاتتىن كەلگەن؛ بۇ مېتىلېن كۆكىنىڭ فوتوفىزىكىسى توغرىسىدىكى يېقىنقى تەنقىدىي ئوبزوردا خۇلاسىلەنگەن. بۇ سان ئومۇمىي بوياققا نىسبەتەن يۇتۇلۇش دەرىجىسىنىڭ بىۋاسىتە يانتۇلۇقى ئەمەس، بەلكى سپېكترنى ئايرىپ ھېسابلاش ئارقىلىق ئېلىنغان مونومېر تەركىبىي قىسمىنىڭ قىممىتى.

ئەمەلىي نۇقتا شۇكى: شارائىتى ئەۋرىشكىلىرىڭىزگە ماس كېلىدىغان كوئېففىتسېنتنى تاللاڭ ياكى ئۆزىڭىز كالىبرلاڭ. 82,000 قىممىتىنى 30 micromolar فوسفات بۇففېرىدىكى تەھلىلگە كۆچۈرۈپ ئىشلىتىپ، سىزىقلىق مۇناسىۋەت يەنىلا ساقلىنىدۇ دەپ پەرەز قىلماڭ.

قىسقا دولقۇن ئۇزۇنلۇقىدىكى مۈرە شەكىللىك قىسمى بىر ئارىلاشما

قويۇقلۇق ئاشقانچە، 600 دىن 615 nm غىچە بولغان ئەتراپتىكى مۈرە شەكىللىك قىسمى 664 nm چوققىسىغا نىسبەتەن چوڭىيىدۇ. ھازىرقى تەتقىقاتلار ئادەتتە H تىپلىق دىمېرنىڭ تۆھپىسىنى 605 تىن 610 nm غىچە بولغان ئەتراپقا قويىدۇ. سۇدىكى مېتىلېن كۆكىنىڭ ئومۇمىي سپېكتر ئانالىزى دىمېرنىڭ ئەڭ يۇقىرى قىممىتىنى 607 nm دا، تېخىمۇ يۇقىرى دەرىجىلىك توپلامنىڭ ئەڭ يۇقىرى قىممىتىنى 600 nm دا، مونومېر رېزونانس تەركىبلىرىنى بولسا 664 ۋە 650 nm دا ئايرىپ چىققان. تولۇق تېكىستىنى PMID 33251415 نىڭ ئوچۇق زىيارەت خاتىرىسى ئارقىلىق ئوقۇغىلى بولىدۇ.

بۇ مۈرە شەكىللىك قىسمىنى ساپ دىمېرنىڭ يۇتۇلۇش دەرىجىسى دەپ بەلگىلەشكە بولمايدۇ. مونومېرنىڭ تەۋرىنىش-ئېلېكترون قۇرۇلمىسىمۇ ئوخشاش رايونغا تۆھپە قوشىدۇ، شۇڭا ئۆلچەنگەن ئېگىزلىك بىر نەچچە تەركىبنىڭ قوشۇلۇشىدىن ھاسىل بولىدۇ. بىر ئومۇمىي ماسلاشتۇرۇشتا، مونومېر بىلەن دىمېردىنلا تۈزۈلگەن مودېلنىڭ 1.1 micromolar دىن 3.4 millimolar غىچە بولغان پۈتكۈل دائىرىگە ماس كەلمەيدىغانلىقى، تېترامېر قوشۇلغاندا ئەڭ ياخشى ماسلىشىشقا ئېرىشىلگەنلىكى بايقالغان؛ تېترامېر سىگنالى 34 micromolar دىن تۆۋەندىمۇ بايقىغىلى بولغان. ماسلاشتۇرۇشتىن ئېلىنغان تەركىب كۈچلۈكلۈكلىرى چوڭ بولغان: بۇففېرسىز ئىيونسىزلاندۇرۇلغان سۇدا، ناترىي خىلورىد 0 دىن 0.15 M غىچە، تېمپېراتۇرا 282 دىن 333 K غىچە بولغاندا، ئاساسلىق مونومېر تەركىبى ئۈچۈن 664 nm دا تەخمىنەن 107,800 M-1 cm-1، دىمېر ئۈچۈن 607 nm دا تەخمىنەن 101,400، تېترامېر ئۈچۈن 600 nm دا تەخمىنەن 138,500 بولغان. بۇلار مودېل ئارقىلىق ئايرىپ چىقىلغان تەركىبلەر، شۇڭا ئۇلارنى تەجرىبە ئاساسىدىكى بېر–لامبېرت يانتۇلۇقىنىڭ ئورنىغا ئىشلىتىشكە بولمايدۇ.

دىمېرلىشىشنىڭ كۈچلۈكلۈكى بىۋاسىتە مىقدارلاشتۇرۇلغان. pH 6.86 ۋە 293 K دا، بىر تەتقىقات دىمېرلىشىش تۇراقلىق سانىنى تەخمىنەن 3,900 M-1 دەپ تاپقان. بۇ مىقدار نېمە ئۈچۈن 5 micromolar ئىشلىتىش ئېرىتمىسىنىڭ ئاساسەن سىزىقلىق ھەرىكەت قىلىدىغانلىقىنى، 50 micromolar زاپاس ئېرىتمىنىڭ بولسا ئۇنداق بولمايدىغانلىقىنى چۈشەندۈرىدۇ. ئۇسۇل تۈزۈش جەريانىدىكى پايدىلىق بىر تەكشۈرۈش — 610 nm ئەتراپىدىكى يۇتۇلۇش دەرىجىسىنىڭ 665 nm ئەتراپىدىكى يۇتۇلۇش دەرىجىسىگە بولغان نىسبىتى. بۇ نىسبەت قويۇقلۇق بىلەن بىللە ئۆرلىگەندە، 664 nm دىكى ئېپسىلون ئەمدى بىر ئۆزگەرمەس تۈرنى تەسۋىرلىمەيدۇ.

ئۆزئارا ئايلىنىدىغان بىر جۈپ تۈر ئۈستۈنلۈكنى ئىگىلىگەن قويۇقلۇق ئارىلىقىدا، سپېكترلار ئورتاق ئىزوسبېستىك نۇقتىغا ئىگە بولالايدۇ؛ سۇ ئېرىتمىسى يۈرۈشلۈكلىرىدە بۇ نۇقتا تەجرىبىدە 625 nm ئەتراپىدا كۆرۈلگەن. ئېنىق، ئورنى مۇقىم نۇقتا ئىككى ئاساسلىق تۈرنىڭ بارلىقىغا ماس كېلىدۇ. قويۇقلۇق ئاشقاندا بۇ نۇقتا يۆتكەلسە ياكى يوقاپ كەتسە، بۇنى ئەسۋاب خاتالىقى دەپ ئەمەس، تېخىمۇ يۇقىرى دەرىجىلىك توپلاملار ياكى ئۆزگىرىۋاتقان تەڭپۇڭلۇقلار پەيدا بولغانلىقىنىڭ ئاگاھلاندۇرۇشى دەپ قاراڭ.

ئېرىتكۈچى، pH ۋە تېمپېراتۇرا سپېكترنى يۆتكەيدۇ

سۇ ئۆزئارا بىرلىشىشكە پايدىلىق. مېتىلېن كۆكىنىڭ سۇ ۋە DMSO ئارىلاشمىلىرىدىكى ئېرىتكۈچى تەتقىقاتىغا ئاساسلانغاندا، دىمېتىل سۇلفوكسىد قوشۇش دىمېرلىشىشنى چەكلەيدۇ، يۇتۇلۇش ۋە فلۇئورېسسېنسىيەنىڭ ئەڭ يۇقىرى نۇقتىلىرىنى ئۇزۇنراق دولقۇن ئۇزۇنلۇقىغا يۆتكەيدۇ ھەمدە فلۇئورېسسېنسىيەنىڭ كىۋانت ھوسۇلىنى تەخمىنەن تۆت ھەسسە ئاشۇرىدۇ؛ بۇ تەتقىقات PMID 30933781 دەپ ئىندېكسلەنگەن. بۇ تەتقىقات سۇدىكى سپېكترلارنى مونومېر–دىمېر تەڭپۇڭلۇقى دەپ قارايدۇ: مونومېرنىڭ يۇتۇلۇشى 650 تىن 670 nm غىچە، دىمېرنىڭ يۇتۇلۇشى 580 تىن 615 nm غىچە بولغان ئەتراپتا بولىدۇ؛ ئۇ 293.15 K دىكى سپېكترلاردىن دىمېرلىشىش تۇراقلىق سانلىرىنى ھېسابلاپ چىقىدۇ.

ئىسپىرتلار ھەم ئورۇننى، ھەم كۆرۈنمە كۈچلۈكلۈكنى ئۆزگەرتىدۇ، ئەمما توپلىشىشنى پۈتۈنلەي يوقاتمايدۇ. مېتىلېن كۆكىنىڭ ئېرىتكۈچى تەتقىقاتىدا دوكلات قىلىنغان، 31.3 micromolar ۋە ئۆي تېمپېراتۇرىسىدا ئېلىپ بېرىلغان بىر دەسلەپكى سېلىشتۇرۇشتا، ئۇزۇن دولقۇن ئۇزۇنلۇقىدىكى ئەڭ يۇقىرى نۇقتا سۇدا 665 nm، مېتانولدا 655 nm بولغان؛ پۈتكۈل ئېرىتمىنىڭ كۆرۈنمە قىممىتى سۇدا تەخمىنەن 37,100، مېتانولدا 60,800 بولغان. سۇسىز ئېتانولدا 298 K دا ئېلىپ بېرىلغان ئايرىم دەلىللەش تەجرىبىسىدە، ئەڭ يۇقىرى نۇقتا 655 nm، ئېپسىلون تەخمىنەن 68,000 بولغان.

ئادەتتىكى pH ئۆزگىرىشلىرى سپېكترنى نۇرغۇن تەجرىبە تەرتىپلىرى پەرەز قىلغاندىن ئازراق يۆتكەيدۇ. يۇقىرىدا نەقىل قىلىنغان تەنقىدىي ئوبزوردا، تەخمىنەن pH 2 دىن pH 12 گىچە ئەڭ يۇقىرى نۇقتىنىڭ 665 nm ئەتراپىدا ساقلانغانلىقى، pH 11 گىچە كۈچلۈكلۈكنىڭ پەقەت ئازراق ئۆزگەرگەنلىكى دوكلات قىلىنغان. بۇففېرنىڭ تۈرى ۋە ئىيون كۈچى نەتىجىنى نامدىكى pH بىلەن ئوخشاش دەرىجىدە ئۆزگەرتەلەيدۇ؛ شۇڭا پەقەت pH ئۆلچەش ئەسۋابىنىڭ ئوقۇش قىممىتىنىلا ئەمەس، ئەمەلىي بۇففېر ۋە تۇزنىمۇ خاتىرىلەڭ. كۈچلۈك كىسلاتا ياكى كۈچلۈك ئىشقار ئايرىم ئەھۋال، چۈنكى بوياق قايتۇرغىلى بولىدىغان بىرلىشىشنىڭ ئورنىغا خىمىيەلىك ئۆزگىرىشكە ئۇچرىشى مۇمكىن. تېمپېراتۇرا ۋە تۇزمۇ تەڭپۇڭلۇقنى يۆتكەيدۇ؛ شۇڭا 2020 يىلدىكى سۇ تەتقىقاتىدا ھەر ئىككىسى مەقسەتلىك ئۆزگەرتىلگەن.

ساننىڭ كۈچكە ئىگە بولۇشىنى ساقلايدىغان ئۆلچەش

مىقدارلىق تەتقىقات بېر–لامبېرت مۇناسىۋىتىگە، يەنى يۇتۇلۇش دەرىجىسىنىڭ ئېپسىلون، قويۇقلۇق ۋە ئوپتىكىلىق يول ئۇزۇنلۇقىنىڭ كۆپەيتمىسىگە تەڭ بولۇشىغا، شۇنداقلا سىزنىڭ شارائىتىڭىزدا سىزىقلىق ئارىلىقنىڭ ھەقىقەتەن ساقلىنىدىغانلىقىنى ئىسپاتلاشقا تايىنىدۇ.

تۆۋەن micromolar دائىرىسىدىكى خىزمەت ئۈچۈن 1 cm كىيۇۋېت ئىشلىتىڭ. ئېپسىلون تەخمىنەن 82,000 بولغاندا، 5 micromolar يۇتۇلۇش دەرىجىسىنى تەخمىنەن 0.41، 10 micromolar بولسا تەخمىنەن 0.82 قىلىدۇ. ئاددىي سۇدا مونومېرنى ئاساس قىلغان ئۆلچەش ئۈچۈن، تەخمىنەن 5 تىن 7 micromolar غىچە ياكى ئۇنىڭدىن تۆۋەندە تۇرۇش، كالىبرلاشنى نەچچە ئون micromolar دائىرىسىگە چوڭقۇر كېڭەيتىشتىن تېخىمۇ ئىشەنچلىك. قويۇق زاپاس ئېرىتمىلەر ئۈچۈن، 1 دىن خېلى يۇقىرى يۇتۇلۇش دەرىجىسىنى قوبۇل قىلىشنىڭ ئورنىغا ئوپتىكىلىق يولنى قىسقارتىڭ.

قۇرۇق سېلىشتۇرما ئۈچۈن دەل ئوخشاش ماترىتسا ئىشلىتىڭ: سۇنىڭ دەرىجىسى، قوشۇمچە ئېرىتكۈچى نىسبىتى، بۇففېر ۋە تۇزلار ئوخشاش بولسۇن، پەقەت بوياق بولمىسۇن. كالىبرلاش ئۆلچەملىرىنى شۇ ماترىتسادا ۋە ئوخشاش تېمپېراتۇرىدا تەييارلاڭ. ئۇسۇل تۈزۈش جەريانىدا بىرلا دولقۇن ئۇزۇنلۇقىنى ئوقۇشنىڭ ئورنىغا، پۈتۈن كۆرۈنمە دائىرىنى، ئەڭ ياخشىسى تەخمىنەن 550 تىن 750 nm غىچە بولغان دائىرىنى سىكانىرلاڭ. پەقەت ئېگىزلىكنىلا ئەمەس، شەكىلنىمۇ ئىز قوغلاڭ. ئەگەر تەرتىپلىك سۇيۇلدۇرۇش نورماللاشتۇرۇلغان شەكىلنى ئۆزگەرتسە، سىستېما خىمىيەلىك جەھەتتىن قويۇقلۇققا باغلىق بولىدۇ. مۇقىم ئەڭ يۇقىرى نۇقتا ۋە مۇقىم 610 دىن 665 nm غىچە بولغان نىسبەت، قوبۇل قىلغىلى بولىدىغان دائىرىنى ئىسپاتلاشتا، يالغۇز يۇقىرى R كۋادرات قىممىتىدىن تېخىمۇ كۈچلۈك دەلىل بولىدۇ.

رېئاگېنتنىڭ شەكلىنى ھۆججەتلەشتۈرۈڭ. سودا مەھسۇلاتى سۇسىز مېتىلتىئونىنىي خىلورىد ياكى ئۈچ سۇ مولېكۇلالىق ھىدراتقا ئوخشاش بىر ھىدرات بولۇشى مۇمكىن؛ شۇڭا زاپاس ئېرىتمە ھېسابىدا ئىشلىتىلگەن موليار ماسسا ئەمەلىي بوتۇلكىدىكى ماددىغا ماس كېلىشى كېرەك. مۇشۇ قەدەمنىڭ ئۆزىلا تەجرىبىخانىلار ئوتتۇرىسىدىكى نامدىكى موليار قويۇقلۇق پەرقىنىڭ بىر قىسمىنى چۈشەندۈرەلەيدۇ. نەتىجىلەر مىقدارلىق تەھلىل ھېسابلىرىغا ئىشلىتىلگەندە، سپېكترلار تەركىب مۇقىملىقىنى تەكشۈرۈشكە ياردەم بەرگەندە ۋە ئارىلاشما ماددىلار تەركىبى ساپلىق ۋە ئۆلچەم تەلەپلىرىنى تەكشۈرۈشنى تەلەپ قىلغاندا، ئوخشاش ئىنچىكە تەرتىپ قوللىنىلىدۇ.

شارائىتى بەلگىلەنگەن خۇلاسە

بۇ جەدۋەلنى ئۆزئارا ئالماشتۇرۇپ ئىشلىتىشكە بولىدىغان تۇراقلىق سانلارنىڭ مەنبەسى دەپ ئەمەس، تەجرىبىخانا خاتىرىسىنىڭ دەسلەپكى قېلىپى دەپ ئىشلىتىڭ.

شۇڭا، مېتىلېن كۆكىنىڭ يۇتۇلۇش دولقۇن ئۇزۇنلۇقى قىسقا جاۋاب، ئەمما ئۇنىڭ ئىزاھى ئۇزۇن. ئۆلچىگەن چوققىڭىزنى، ئۆلچىگەن ئېرىتمىڭىزدە ۋە ئۆلچىگەن قويۇقلۇقىڭىزدا دوكلات قىلىڭ. بۇ ئادەت سۇدىكى بىر سۇيۇق ئېرىتمىنىڭ 664 nm ئەتراپىدىكى قىممىتىنىڭ خاتا ئومۇمىي تۇراقلىق سانغا ئايلىنىپ قېلىشىنىڭ ئالدىنى ئالىدۇ.