ናይ ሜቲሊን ብሉ ስፔክትረም ምምጣጥን ሞላራዊ ክእለት ምምጣጥን፦ ኩነታቱ ዝተገለጸ መወከሲ

ካብ ስፔክትረም ሜቲሊን ብሉ ዝተወስደ ቁጽሪ ደጊምካ ክትጥቀመሉ ክሳብ እትፍትን፣ እቲ ስፔክትረም ቀሊል ይመስል። ሓደ ላቦራቶሪ ሞላራዊ ስሉስ ምጥፋእ ብርሃን ኣብ ከባቢ 82,000 ምዃኑ ይሕብር። ካልእ 67,000 ይሕብር። ሳልሳይ ድማ ልዕሊ 100,000 ይሕብር። ሰለስቲኦም ንናይ ገዛእ ርእሶም መለክዒታት ብትኽክል ዝገልጹ ክኾኑ ይኽእሉ፣ ካብኣቶም ዋላ ሓደ ግን ነቲ መቐለሚ ኣብ ኩሉ ኩነታት ዝሰርሕ ቀዋሚ ኣይኮነን።

እቲ ድንግርግር ካብ ምሕዋስ ክልተ ዝተፈላለዩ ኣምራት ይመጽእ። መጠን ምምጣጥ፣ ኣብ ሓደ ፍሉይ ፍታሕን ኣብ ሓደ ፍሉይ መለክዒ ህዋስን ዝግበር መለክዒ እዩ። ሞላራዊ ክእለት ምምጣጥ፣ መብዛሕትኡ ግዜ epsilon ተባሂሉ ዝጽሓፍ፣ ኣብ ሞዴል ናይቲ ፍታሕ ዘሎ መለክዒ ባህሪ እዩ። ሜቲሊን ብሉ ኩነታት ምትእኽኻቡ ምስ ዝቕይር፣ እቲ ሞዴል ይቕየር፣ ስለዚ እቲ መለክዒ ባህሪ እውን ይቕየር። እቲ ጠቓሚ ልምዲ፣ ንነፍሲ ወከፍ ስሉስ ከም ኩነታቱ ዝተገለጸ ዋጋ ምርኣይ እዩ፦ ንውሓት ማዕበል፣ መሟሟዪ፣ pH ወይ ባፈር፣ ሙቐት፣ ክልል ጽዓትን ንውሓት መንገዲ ብርሃንን ምስቲ ቁጽሪ ክስነዱ ኣለዎም።

ናይ ሞኖመር ባንድ ኣብ ዝተረቐቐ ማያዊ ፍታሕ

ኣብ ዝተረቐቐ ማያዊ ፍታሕ፣ እቲ ዓብላሊ ባንድ ናይ ሜቲሊን ብሉ ካትዮን ኣብ ከባቢ 664 ክሳብ 665 nm ይርከብ። ብመሳርሒታትን ብምርጫታት ካሊብሬሽንን ዝፈላለ ውጽኢት ኣብ ውሽጢ 664 ክሳብ 668 nm ከም ዝርከብ ብተደጋጋሚ ይጥቀስ። መብዛሕትኡ መቐለሚ ብመልክዕ ሞኖመር ክህሉ እቲ ፍታሕ እኹል ዝተረቐቐ ምስ ዝኸውን፣ እዚ ባንድ ንመጠናዊ መለክዒ ትኽክለኛ ምርጫ እዩ።

ሰለስተ ካብ ጽሑፋት ምርምር ዝተወስዱ ዋጋታት፣ እቶም ኩነታት ካብቲ ብቐዳምነት ዝጥቀስ ቁጽሪ ንላዕሊ ስለምንታይ ኣገደስቲ ከም ዝኾኑ የርእዩ። ማያዊ ናሙናታቶም ኣብ 1 cm መለክዒ ህዋሳት፣ ትሕቲ ኣስታት 7 micromolar ዝሓዙ ተመራመርቲ ሸክላ፣ ኣብ 665 nm epsilon ኣስታት 82,000 M-1 cm-1 ምዃኑ ሓቢሮም። እዚ ዋጋ፣ ንኣዝዮም ዝተረቐቑ ማያዊ ናሙናታት ከም ፈተነኣዊ ቁልቁለት ካሊብሬሽን፣ ብፍሉይ ጽቡቕ መንገዲ ተሰኒዱ ኣሎ። ድሕሪኡ ዝተገብረ መባእታዊ ካሊብሬሽን ኣብ ኣዮናቱ ዝተወገዱሉ ማይ፣ 2.34 ክሳብ 37.52 micromolarን 1 cm መንገዲ ብርሃንን ብምጥቃም፣ ንጠቕላላ መቐለሚ ኣብ 665 nm ኣስታት 67,100 M-1 cm-1 ሂቡ። እቲ ታሕተዋይ ውጽኢት ዝጽበ እምበር ዝጋጮ ኣይኮነን፣ ምኽንያቱ እቲ ላዕለዋይ ፍርቂ ናይቲ ክልል ካሊብሬሽን ድሮ ርኡይ መጠን ዳይመር ይሕዝ እዩ። ሳልሳይ ዋጋ፣ ኣብ 664 nm ኣስታት 73,460 M-1 cm-1፣ ነቲ ዝተለክዐ ስፔክትረም ናብ ክፍልታት ሞኖመርን ዳይመርን ካብ ዝፈለየ፣ ኣብ pH 6.86ን 293 Kን ዝተገብረ ስራሕ ዝመጸ እዩ። እዚ ኣብ ሓድሽ ነቐፌታዊ ግምገማ ፎቶፊዚክስ ሜቲሊን ብሉ ተጠቓሊሉ ኣሎ። እቲ ቁጽሪ ካብቲ ዝተሓዋወሰ ስፔክትረም ዝተፈልየ ክፍሊ ሞኖመር እዩ፣ መጠን ምምጣጥ ኣንጻር ጠቕላላ መቐለሚ ዝህቦ ቀጥታዊ ቁልቁለት ኣይኮነን።

እቲ ግብራዊ ነጥቢ፦ ኩነታቱ ምስ ናሙናታትኩም ዝሰማማዕ ስሉስ ምረጹ፣ ወይ ናይ ገዛእ ርእስኹም ካሊብሬሽን ግበሩ። 82,000 ኣብ ናይ 30 micromolar ፎስፌት ባፈር መርመራ ኣእቲኹም፣ እቲ መስመራዊ ዝምድና ከም ዝቕጽል ኣይትውሰዱ።

እቲ ኣብ ሓጺር ንውሓት ማዕበል ዘሎ መንኵብ ሕዋስ እዩ

ጽዓት እናወሰኸ ምስ ዝኸይድ፣ ኣብ ከባቢ 600 ክሳብ 615 nm ዘሎ መንኵብ ብንጽጽር ምስቲ ኣብ 664 nm ዘሎ ጫፍ ይዓቢ። ዘመናዊ ምርምር ናይ H ዓይነት ዳይመር ኣበርክቶ መብዛሕትኡ ግዜ ኣብ ከባቢ 605 ክሳብ 610 nm የቐምጦ። እቲ ሓፈሻዊ ስፔክትራላዊ ትንተና ሜቲሊን ብሉ ኣብ ማይ፣ ናይ ዳይመር ዝለዓለ ነጥቢ ኣብ 607 nm፣ ናይ ዝዓበየ ጥርናፈ ዝለዓለ ነጥቢ ኣብ 600 nm፣ ናይ ሞኖመር ረዞናንስ ክፍልታት ድማ ኣብ 664ን 650 nmን ፈልዩ የርኢ። ምሉእ ጽሑፉ ብመንገዲ ናይ PMID 33251415 ክፉት መዳረሻ መዝገብ ይርከብ።

እቲ መንኵብ ከም ናይ ንጹህ ዳይመር መጠን ምምጣጥ ክግለጽ የብሉን። ናይ ሞኖመር ቫይብሮኒክ መዋቕር እውን ኣብቲ ተመሳሳሊ ክልል ኣበርክቶ ኣለዎ፣ ስለዚ እቲ ዝተለክዐ ቁመት ዝተደራረቡ ኣበርክቶታት ውጽኢት እዩ። ሓደ ሓፈሻዊ ምስምማዕ ሞዴል፣ ሞኖመርን ዳይመርን ጥራይ ዝሓዘ ሞዴል ኣብ ምሉእ ክልል 1.1 micromolar ክሳብ 3.4 millimolar ከም ዘይሰርሐ ረኺቡ። ቴትራመር ምውሳኽ ግን ዝበለጸ ምስምማዕ ሂቡ፣ ምልክት ቴትራመር ድማ ትሕቲ 34 micromolar እውን ድሮ ክልለ ይኽእል ነይሩ። እቶም ብምስምማዕ ሞዴል ዝተረኽቡ መጠናት ምምጣጥ ናይ ክፍልታት ዓበይቲ ነይሮም፦ ንቀንዲ ክፍሊ ሞኖመር ኣብ 664 nm ኣስታት 107,800 M-1 cm-1፣ ንዳይመር ኣብ 607 nm ኣስታት 101,400፣ ንቴትራመር ኣብ 600 nm ድማ ኣስታት 138,500። እዚ ኣብ ባፈር ዘይተወሰኾ፣ ኣዮናቱ ዝተወገዱሉ ማይ፣ ሶድየም ክሎራይድ ካብ 0 ክሳብ 0.15 Mን ሙቐት ካብ 282 ክሳብ 333 Kን ብምጥቃም እዩ ተረኺቡ። እዚኦም ብሞዴል ዝተፈልዩ ክፍልታት እዮም፣ ስለዚ ኣብ ክንዲ ፈተነኣዊ ቁልቁለት ቢር–ላምበርት ክትክኡ የብሎምን።

ሓይሊ ምፍጣር ዳይመር ብቐጥታ ተለኪዑ እዩ። ኣብ pH 6.86ን 293 Kን፣ ሓደ መጽናዕቲ ናይ ምፍጣር ዳይመር ቀዋሚ ኣብ ከባቢ 3,900 M-1 ረኺቡ። እዚ መጠን፣ ናይ 5 micromolar ናይ ስራሕ ፍታሕ ዳርጋ መስመራዊ ባህሪ ስለምንታይ ከም ዘርኢ፣ ናይ 50 micromolar መሰረታዊ ፍታሕ ግን ከምኡ ስለምንታይ ከም ዘይኮነ ይገልጽ። ኣብ ምምዕባል ኣገባብ ጠቓሚ መፈተሺ፣ ኣብ ከባቢ 610 nm ዘሎ መጠን ምምጣጥ ናብቲ ኣብ ከባቢ 665 nm ዘሎ መጠን ምምጣጥ ዘለዎ ሬሾ እዩ። እዚ ሬሾ ምስ ጽዓት እናዓበየ ምስ ዝኸይድ፣ ኣብ 664 nm ዘሎ epsilon ድሕሪ ደጊም ሓደ ዘይቅየር ኬሚካላዊ ዓይነት ኣይገልጽን።

ሓደ ንሓድሕዱ ዝቀያየር ጽምዲ ኣብ ዝዕብልሎ ክልል ጽዓት፣ ስፔክትረማት ሓባራዊ ኣይሶስበስቲክ ነጥቢ ክህልዎም ይኽእል። ኣብ ማያዊ ተኸታታሊ ናሙናታት እዚ ብፈተነ ኣብ ከባቢ 625 nm ተራእዩ እዩ። ንጹርን ዘይንቀሳቐስን ነጥቢ፣ ምስ ህላወ ክልተ ዓብለልቲ ኬሚካላዊ ዓይነታት ይሰማማዕ። ጽዓት እናወሰኸ እቲ ነጥቢ ምስ ዝንቀሳቐስ ወይ ዝጠፍእ፣ ከም ጌጋ መሳርሒ ዘይኮነስ፣ ዝዓበዩ ጥርናፈታት ወይ ዝቀያየሩ ሚዛናት ከም ዝኣተዉ ዘጠንቅቕ ምልክት ጌርኩም ርኣይዎ።

መሟሟዪ፣ pHን ሙቐትን ነቲ ስፔክትረም የንቀሳቕስዎ

ማይ ንምትእኽኻብ የመቻችእ። ብመሰረት እቲ ናይ ሜቲሊን ብሉ መሟሟዪ መጽናዕቲ ኣብ ማይን ሕዋሳት DMSOን፣ ከም PMID 30933781 ዝተመዝገበ፣ ዳይሜቲል ሳልፎክሳይድ ምውሳኽ ምፍጣር ዳይመር ይገትእ፣ ዝለዓሉ ነጥብታት ምምጣጥን ፍሎረሰንስን ናብ ዝነውሐ ንውሓት ማዕበል የሰጋግር፣ ኳንተም ምህርቲ ፍሎረሰንስ ድማ ኣስታት ኣርባዕተ ዕጽፊ የዕብዮ። እቲ ስራሕ ንማያዊ ስፔክትረማት ከም ሚዛን ሞኖመርን ዳይመርን ይርእዮም፣ መጠን ምምጣጥ ሞኖመር ኣብ ከባቢ 650 ክሳብ 670 nm፣ ናይ ዳይመር ድማ ኣብ ከባቢ 580 ክሳብ 615 nm ብምቕማጥ። ካብቶም ኣብ 293.15 K ዝተለክዑ ስፔክትረማት ድማ ቀዋሚታት ምፍጣር ዳይመር የውጽእ።

ኣልኮላት ንቦታን ንዝርአ መጠን ምምጣጥን ይቕይሩ፣ ምትእኽኻብ ግን ኣየጥፍእዎን። ኣብ ሓደ ኣብ 31.3 micromolarን ሙቐት ክፍልን ዝተገብረ መባእታዊ ንጽጽር፣ ኣብ መጽናዕቲ መሟሟዪ ሜቲሊን ብሉ ዝተሓበረ፣ እቲ ኣብ ነዊሕ ንውሓት ማዕበል ዘሎ ዝለዓለ ነጥቢ ኣብ ማይ 665 nm፣ ኣብ ሜታኖል ግን 655 nm ነይሩ። ናይ ጠቕላላ ፍታሕ ዝርኣዩ ዋጋታት ድማ ኣብ ማይ ኣብ ከባቢ 37,100፣ ኣብ ሜታኖል ኣብ ከባቢ 60,800 ነይሮም። ኣብ 298 K ኣብ ፍጹም ኤታኖል ዝተገብረ ካልእ ምርግጋጽ፣ ኣብ 655 nm ዝለዓለ ነጥቢ፣ epsilon ድማ ኣብ ከባቢ 68,000 ሂቡ።

ንቡር ለውጢ pH፣ ብዙሓት መምርሒታት ካብ ዝግምትዎ ንላዕሊ ነቲ ስፔክትረም ውሑድ እዩ ዘንቀሳቕሶ። እቲ ኣብ ላዕሊ ዝተጠቕሰ ነቐፌታዊ ግምገማ፣ ካብ ኣስታት pH 2 ክሳብ pH 12፣ እቲ ዝለዓለ ነጥቢ ኣብ ከባቢ 665 nm ከም ዝጸንሐ፣ ክሳብ pH 11 ድማ ንኣሽቱ ለውጥታት መጠን ምምጣጥ ጥራይ ከም ዝነበሩ ይሕብር። ዓይነት ባፈርን ኣዮናዊ ሓይልን፣ ከምቲ ዝተጠቕሰ pH ውጽኢታት ክቕይሩ ይኽእሉ። ስለዚ ንንባብ መለክዒ pH ጥራይ ዘይኮነስ፣ ነቲ ብሓቂ ዝተጠቐምኩምሉ ባፈርን ጨውን መዝግቡ። ሓያል ኣሲድ ወይ ሓያል ኣልካሊ ፍሉይ ኩነታት እዩ፣ ምኽንያቱ እቲ መቐለሚ ኣብ ክንዲ ክምለስ ዝኽእል ምትእኽኻብ፣ ኬሚካላዊ ለውጢ ክገብር ይኽእል። ሙቐትን ጨውን እውን ነቲ ሚዛን ይቕይርዎ፣ ስለዚ እዩ እቲ ናይ 2020 ናይ ማይ መጽናዕቲ ንኽልቲኦም ብዕላማ ዝቐየረ።

እቲ ቁጽሪ ቅኑዕ ኮይኑ ክጸንሕ ምልካዕ

መጠናዊ ስራሕ ኣብ ዝምድና ቢር–ላምበርት ይምርኮስ፦ መጠን ምምጣጥ ማዕረ epsilon ተባዚሑ ብጽዓት ተባዚሑ ብንውሓት መንገዲ ብርሃን እዩ። ብተወሳኺ፣ እቲ መስመራዊ ክልል ኣብ ኩነታትኩም ብሓቂ ከም ዝሰርሕ መርትዖ የድሊ።

ንትሑት micromolar ስራሕ 1 cm መለክዒ ህዋስ ተጠቐሙ። epsilon ኣብ ከባቢ 82,000 ምስ ዝኸውን፣ 5 micromolar መጠን ምምጣጥ ኣብ ከባቢ 0.41፣ 10 micromolar ድማ ኣስታት 0.82 ይህብ። ኣብ ቀሊል ማይ ኣብ ሞኖመር ዘተኮረ መለክዒ ንምግባር፣ ኣብ ከባቢ ወይ ትሕቲ ኣስታት 5 ክሳብ 7 micromolar ምጽናሕ፣ ካብ ናብ ዓሰርተታት micromolar ኣዕሚቕካ ካሊብሬሽን ምግባር ዝያዳ ውሑስ እዩ። ንጽዑቓት መሰረታዊ ፍታሓት፣ ካብ 1 ኣዝዩ ዝልዕል መጠን ምምጣጥ ኣብ ክንዲ ምቕባል፣ ነቲ መንገዲ ብርሃን ኣሕጽርዎ።

ንመቐለሚ ጥራይ ብምውጋድ፣ ፍጹም ተመሳሳሊ ማትሪክስ ከም ባዶ መወከሲ ተጠቐሙ፦ ተመሳሳሊ ደረጃ ማይ፣ ተመሳሳሊ ብጽሒት ሓባራዊ መሟሟዪ፣ ተመሳሳሊ ባፈርን ጨዋትን። ናይ ካሊብሬሽን ፍታሓት ኣብቲ ተመሳሳሊ ማትሪክስን ተመሳሳሊ ሙቐትን ኣዳልዉ። ኣብ እዋን ምምዕባል፣ ሓደ ንውሓት ማዕበል ጥራይ ኣብ ክንዲ ምንባብ፣ ነቲ ምሉእ ዝርአ ክልል ስካን ግበሩ፣ ብዝበለጸ ኣስታት 550 ክሳብ 750 nm። ቁመት ጥራይ ዘይኮነስ፣ ቅርጺ እውን ተኸታተሉ። ተኸታታሊ ምርቃቕ ነቲ ናብ ሓባራዊ መለክዒ ዝተስተኻኸለ ቅርጺ እንተቐይርዎ፣ እቲ ስርዓት ብኬሚካላዊ መንገዲ ኣብ ጽዓት ይምርኮስ። ዘይቅየር ዝለዓለ ነጥብን ዘይቅየር ናይ 610 ናብ 665 nm ሬሾን፣ ካብ ልዑል R ትርብዒት ጥራይ፣ ንቕቡል ክልል ዝያዳ ድልዱል መርትዖ እዮም።

መልክዕ ናይቲ ሪኤጀንት ሰንዱ። ንግዳዊ ንጥረ ነገር ማይ ዘይሓዘ ሜቲልታዮኒንየም ክሎራይድ፣ ወይ ከም ትራይሃይድሬት ዝኣመሰለ ሃይድሬት ክኸውን ይኽእል። ስለዚ ንስሌታት መሰረታዊ ፍታሕ ዝጥቀም ሞላራዊ ጅምላ፣ ምስቲ ኣብታ ጥርሙዝ ብሓቂ ዘሎ ንጥረ ነገር ክሰማማዕ ኣለዎ። እዚ ስጉምቲ በይኑ፣ ሓደ ክፍሊ ናይቲ ኣብ መንጎ ላቦራቶሪታት ኣብ ዝተጠቕሱ ሞላራዊ ጽዓታት ዘሎ ፍልልይ ይገልጽ። ውጽኢታት ኣብ ስሌታት መጠናዊ መርመራ ክጥቀሙ ከለዉ፣ ስፔክትረማት ንመፈተሺታት ርግኣት ቀመር ክድግፉ ከለዉ፣ ከምኡ እውን መግለጺታት ርስሓት ግምገማ ንጽህናን መለክዒታት ጽሬትን ክጠልቡ ከለዉ፣ ተመሳሳሊ ጥንቃቐ የድሊ።

ኩነታቱ ዝተገለጸ ጽማቝ

ነዚ ሰደቓ ከም መበገሲ ቅጥዒ ንመዝገብ ላቦራቶሪ ተጠቐሙሉ፣ ከም ምንጪ ንሓድሕዶም ክተኻኽኡ ዝኽእሉ ቀዋሚታት ኣይኮነን።

ስለዚ ንውሓት ማዕበል ምምጣጥ ሜቲሊን ብሉ፣ ነዊሕ ተወሳኺ መብርሂ ዘለዎ ሓጺር መልሲ እዩ። ነቲ ዝለካዕኩምዎ ጫፍ፣ ኣብቲ ዝለካዕኩምዎ ፍታሕ፣ ኣብቲ ዝለካዕኩምዎ ጽዓት ሓብሩ። እዚ ልምዲ፣ ኣብ ከባቢ 664 nm ዘሎ ሓደ ናይ ዝተረቐቐ ማያዊ ፍታሕ ዋጋ፣ ናብ ሓሶት ኣብ ኩሉ ኩነታት ዝሰርሕ ቀዋሚ ከይቅየር ይከላኸል።