Кабуди метилен ва Bartonella: натиҷаҳои озмоишгоҳӣ ва маҳдудиятҳои далелҳои клиникӣ

Зарфи кишт ва бемор як калимаи муштарак доранд — сироят, вале маънои он барои ҳар ду яксон нест. Дар зарф сироят бо шумораи колонияҳо дар агар ифода мешавад. Дар бемор бошад, он бактерияҳои дохили ҳуҷайраҳо ва рагҳо, доруҳои дар хун ва бофтаҳо ҳаракаткунанда ва низоми масуниятест, ки як қисми корро анҷом медиҳад. Агар ин дуро омехта кунем, рақами таъсирбахши озмоишгоҳӣ ба усули табобат монанд мешавад. Агар онҳоро ҷудо нигоҳ дорем, ҳамон рақам маънои аслии худро нигоҳ медорад: асосе барои анҷом додани озмоиши навбатӣ.

Ҳадафи асосии ин баррасии кабуди метилен ва Bartonella маҳз ҳамин ҷудокунист. Ду таҳқиқоти озмоишгоҳии як гурӯҳи таҳқиқотӣ кабуди метиленро бар зидди Bartonella henselae дар ҳолатҳои беафзоиш санҷиданд. Ҳар ду дар зарфҳои шишагӣ ва пластикӣ фаъолияти қавиро гузориш доданд. Ҳеҷ кадом онро дар инсон насанҷид.

Чаро муҳаққиқон марҳилаи статсионариро месанҷанд

Аксари санҷишҳои антибиотикҳо ҳуҷайраҳои дар ҳоли афзоишро истифода мебаранд. Ин модел ҳолати душвортарро фаро намегирад: ҳуҷайраҳое, ки аз тақсимшавӣ бозмондаанд ва доруҳоеро таҳаммул мекунанд, ки ҳуҷайраҳои ҳамтои афзояндаи онҳоро мекушанд.

Bartonella метавонад дар бадан, аз ҷумла дар дохили эритроситҳо ва ҳуҷайраҳои эндотелиалӣ, боқӣ монад. Аз ин рӯ, гурӯҳ пурсид, ки кадом доруҳои тасдиқшуда метавонанд B. henselae-ро баъди ворид шуданаш ба марҳилаи статсионарӣ бикушанд. MIC-и паст бар зидди ҳуҷайраҳои афзоянда кушта шудани ҳуҷайраҳоро дар марҳилаи статсионарӣ пешгӯӣ намекард. Рифампин MIC-и хеле паст дошт, вале ҳуҷайраҳои статсионариро суст мекушт; баръакс, пайвастагиҳои дорои MIC-и баландтар онҳоро хуб мекуштанд. Хонандагоне, ки усули умумии хондани чунин мақолаҳоро меҷӯянд, онро дар роҳнамои хондани таҳқиқоти кабуди метилен пайдо мекунанд.

Скрининги аввал: Li ва ҳамкорон, 2019

Скрининги марҳилаи статсионарӣ дар соли 2019 дар Antibiotics як штамм — B. henselae JK53-ро истифода бурд, ки дар муҳити Schneider бо 10 фоиз зардоби ҷанини гов дар ҳарорати 37 C ва бо 5 фоиз CO2 парвариш шуда буд. Киштҳои якрӯза асосан аз ҳуҷайраҳои парокандаи тақсимшаванда иборат буданд. Киштҳои панҷрӯза бо тақрибан 10 ба дараҷаи 8 воҳиди колонияҳосилкунанда дар як mL ҳамчун марҳилаи статсионарӣ қабул шуданд ва тӯдаҳои намоён доштанд.

Санҷиш бо SYBR Green I ва йодиди пропидий гузаронда шуд ва нисбат ба омехтаҳои ҳуҷайраҳои зинда ва бо изопропанол кушташуда калибр карда шуд. Азбаски кабуди метилен ранги пурқувват дорад, натиҷаҳои мусбат аввал бо микроскопия ва баъд бо шумориши колонияҳо дар агари хундор тасдиқ шуданд; охирин меъёри қатъитар буд.

Аз байни 1,581 доруи тасдиқшуда дар консентратсияи 50 микромолярӣ, кабуди метилен мувофиқи хонандаи микропланшет 16 фоиз ва мувофиқи микроскопия 25 фоиз қобилияти зиндамониро боқӣ гузошт. Барои даптомицин ин нишондиҳанда 21 фоиз, барои чанд азол 22 то 27 фоиз, барои гентамицин 32 фоиз, барои эритромицин 66 фоиз ва барои ципрофлоксацин 74 фоиз буд. Памоати пирвиний дар хонандаи микропланшет қавитар менамуд, вале аз сабаби флуорессенсияи худи он бо микроскопия арзёбӣ карда нашуд.

Бар зидди B. henselae-и афзоянда MIC-и кабуди метилен 0.08 то 0.16 микрограмм дар як mL буд. Бар зидди ҳуҷайраҳои панҷрӯзаи статсионарӣ дар консентратсияи 5 микрограмм дар як mL, пас аз як рӯзи таъсир колонияи ошкоршаванда боқӣ намонд; натиҷа ба даптомицин ва памоати пирвиний дар консентратсияҳои санҷидашудаи онҳо мувофиқ буд. Дар озмоиши алоҳидаи куштан вобаста ба вақт 10 микрограмм дар як mL истифода шуд. Инҳо сатҳҳои таъсири озмоишгоҳӣ ҳастанд, на вояҳо, ва мақола онҳоро ҳамин тавр баён мекунад. Арзиши зикршудаи консентратсияи авҷи плазмавӣ дар инсон, ки наздик ба 3.9 микрограмм дар як mL аст, дар мақола танҳо ҳамчун замина оварда шудааст. Баррасии фармакокинетикаи кабуди метилен мефаҳмонад, ки чаро нишондиҳандаи плазмаро наметавон нишондиҳандаи бофта донист.

Ду маҳдудият дар мақола ошкоро зикр шудаанд. Модели биопарда вуҷуд надошт ва таркибҳои кабуди метилен санҷида нашуданд. Тӯдаҳои панҷрӯза гурӯҳҳои ҳуҷайраҳо дар кишти моеъи статсионарӣ буданд, на озмоиши тасдиқшудаи биопарда. Муаллифон гузарондани таҳқиқот дар ҳайвонот, санҷиши таркибҳо, таҳқиқоти биопарда ва санҷиш дар дигар намудҳои Bartonella-ро пешниҳод карданд.

Таркибҳо ва ҳуҷайраҳои аз биопарда гирифташуда: Zheng ва ҳамкорон, 2020

Таҳқиқоти идомавии соли 2020 дар BMC Microbiology ҳамон штамм ва муҳитро нигоҳ дошт, вале ба киштҳои шашрӯзаи статсионарӣ гузашт ва ду чизеро илова кард, ки дар мақолаи аввал набуданд: таркибҳои дудоруӣ ва модели ҳуҷайраҳои аз биопарда гирифташуда.

Ҳангоми санҷиши доруҳои алоҳида дар консентратсияи якхелаи 5 микрограмм дар як mL барои 24 соат, кабуди метилен 3.2 зарби 10 ба дараҷаи 4 воҳиди колонияҳосилкунанда дар як mL боқӣ гузошт, дар ҳоле ки дар намунаи назоратӣ ин нишондиҳанда наздик ба 2.8 зарби 10 ба дараҷаи 10 буд. Ципрофлоксацин, гентамицин ва нитрофурантоин дар ҳамон нуқтаи вақт колонияҳои камтар боқӣ гузоштанд. Ин аз натиҷаи соли 2019 фарқ мекунад, ки дар он ҳамон консентратсияи номиналӣ пас аз як рӯз колонияи ошкоршаванда боқӣ нагузошта буд. Синну сол, зичӣ ва тарзи коркарди киштҳо фарқ мекарданд, бинобар ин таъсири кушанда аз рӯйи самт такроршаванда буд, вале аз рӯйи миқёс яксон набуд. Ин тағйирот байни озмоишҳо яке аз сабабҳоест, ки санҷишҳои стандартии бехатарӣ ва таъсири мутақобил қувваи таъсири озмоишгоҳиро аз таъсири клиникӣ ҷудо баррасӣ мекунанд.

Скрининги таркибҳо қисми аз ҳама бештар иқтибосшаванда аст. Консентратсияи ҳар ҷузъ дар сатҳи 5 микрограмм дар як mL собит нигоҳ дошта шуд. Ҳам азитромицин бо кабуди метилен ва ҳам рифампин бо кабуди метилен дар 24 соат колонияҳои ошкоршавандаи марҳилаи статсионариро боқӣ нагузоштанд; ҳар ду ҷуфти дорои ципрофлоксацин низ ҳамин натиҷаро доданд. Аз байни 25 ҷуфти санҷидашуда танҳо ҳамин чор ҷуфт чунин натиҷа доштанд. Таҳлили расмии синергия гузаронда нашуд, бинобар ин истилоҳи дуруст «таркиби фаъол дар ин шароит» аст, на «синергияи исботшуда».

Озмоиши биопарда ҳуҷайраҳои аз биопардаи ҷавони вайроншуда ҷудошударо санҷид, на воридшавии дору ба биопардаи баркамоли дастнахӯрда. Киштҳо панҷ рӯз парвариш шуда, баъд тунук карда шуданд ва барои панҷ рӯзи дигар ба планшетҳои чоҳакдор гузаронда шуданд. Онҳо бо рангкунии кристаллвиолет тасдиқ шуда, сипас пеш аз таъсири дору бо тарошидан ҷамъоварӣ шуданд. Дар консентратсияи 5 микрограмм дар як mL, шумораи колонияҳо бо кабуди метилен танҳо то рӯзи 6 ба 2.3 зарби 10 ба дараҷаи 2 расид; ин яке аз беҳтарин натиҷаҳои доруҳои алоҳида буд, вале ба сифр нарасид. Ҳар ду таркиби кабуди метилен то рӯзи 6 ба сифр расиданд; ҳар ду таркиби ципрофлоксацин низ ҳамин натиҷаро доданд.

Муаллифон ҳамон маҳдудиятҳоеро қайд карданд, ки хонандаи бодиққат низ мебинад: биопардаи ҷавони тарошидашуда ба ҷойи биопардаи кӯҳнаи дастнахӯрда, як консентратсияи қулай барои ҳамаи доруҳо ба ҷойи консентратсияи авҷи воқеии ҳар дору, танҳо ҷуфтҳои интихобшуда бо меҳвари азитромицин ё рифампин, як штамм, бе ҳайвонот ва бе беморон. Таҳқиқоти минбаъдаи седоруӣ пешниҳод шуд, вале натиҷаҳои он гузориш нашуданд.

Муқоисаи тарҳи таҳқиқотҳо

Ҷадвал мазмуни асосии ин мақоларо ба таври фишурда нишон медиҳад. Ҳар чизе, ки дар тарафи чапи сутуни охирин аст, кори киштӣ мебошад. Ҳеҷ натиҷаи ин ду мақола ба сутуни охирин дохил намешавад.

Bartonella — Borrelia нест

Ҳар ду мақола Borrelia burgdorferi, спирохетаи бемории Лаймро, зикр мекунанд, зеро санҷиши рангӣ аз корҳои пешинаи ҳамон озмоишгоҳ оид ба марҳилаи статсионарии Borrelia гирифта шудааст. Дар он корҳо кабуди метилен ва даптомицин низ натиҷаҳои мусбат нишон дода буданд. Ин таърих заминаи муфид ва ҳамзамон манбаи маъмули иштибоҳ аст.

Ҳеҷ озмоише дар ин ду мақолаи Bartonella, Borrelia-ро дар паҳлуи Bartonella намесанҷад. Организмҳо, муҳитҳо ва консентратсияҳо фарқ мекунанд; таъсири эҳтимолии кабуди метилен ба мембранаи Bartonella ҳамчун фарзияе баён шудааст, ки таҳқиқоти бештар мехоҳад. Натиҷаҳоро набояд аз як намуд ба намуди дигар гузаронд, ва ҳеҷ кадом мақола иддаоҳои васеъ дар бораи паразитҳоро дастгирӣ намекунад. Муқоисаи ҳуҷайраҳои персистери Borrelia ва Bartonella маҳз ба ҳамин сабаб адабиёти марбут ба ин дуро ҷудо нигоҳ медорад.

Чаро киштҳо ба протокол табдил намеёбанд

Таваҷҷуҳ ба ҷустуҷӯи протоколи кабуди метилен барои Bartonella фаҳмост. Ин мақолаҳо нишон медиҳанд, ки чаро ин ибора бояд ҳамчун аломати огоҳӣ қабул шавад, на рӯйхати харид.

Аввалан, 5 микрограмм дар як mL дар чоҳак дорухат нест. Он дар бораи ҷаббиш, тақсимшавӣ, пайвастшавӣ ба сафедаҳо, воридшавӣ ба дохили ҳуҷайраҳо ё таҳаммулпазирӣ маълумот намедиҳад. Муаллифон онро ҳамчун миёнаи тахминии консентратсияҳои авҷи антибиотикҳо интихоб карданд ва гуфтанд, ки таҳқиқоти оянда бояд ҳар доруро дар сатҳи воқеии худаш истифода баранд.

Дуюм, сифр колония маънои набудани колонияҳоро дар ҳамон шароити кишт дорад, на бофтаи безарар аз микроб. Ҳуҷайраҳои персистер, бактерияҳои дохилиҳуҷайравӣ ва маҳдудиятҳои намунагирӣ ҳама аз доираи табақи агар берунанд.

Сеюм, таркибҳое, ки чоҳакро аз бактерияҳо пок мекунанд, метавонанд дар бадан натиҷа надиҳанд ё зарар расонанд. Азитромицин бо кабуди метилен ва рифампин бо кабуди метилен ҷуфтҳои озмоишгоҳӣ дар сатҳҳои таъсири озмоишгоҳӣ мебошанд. Бе фармакокинетика дар ҳайвонот ва маълумоти назоратшаванда дар инсон на воя, на давомнокӣ ва на таносуби фоида ба хатар муайян аст. Ҳар касе, ки имконотро баррасӣ мекунад, бояд онҳоро бо табиб муҳокима кунад ва пеш аз баровардани ягон хулоса аз маълумоти зарфи кишт, баррасӣ намояд, ки кай истифодаи кабуди метилен назорати тиббиро талаб мекунад.

Хулосаи маҳдуде, ки ин мақолаҳо воқеан дастгирӣ мекунанд, чунин аст: кабуди метилен бар зидди B. henselae JK53-и беафзоиш дар in vitro фаъолияти такроршаванда дорад, аз ҷумла дар таркибҳои дудоруии озмоишгоҳӣ; қавитарин натиҷаҳои таркибҳо ва ҳуҷайраҳои аз биопарда гирифташуда аз таҳқиқоти соли 2020 ба даст омадаанд. Ҳамаи ҷанбаҳои дигар, аз ҷумла аҳамияти ин фаъолият барои бартонеллёзи инсон, ҳанӯз санҷида нашудаанд.