Агари EMB дар муқоиса бо агари MacConkey: интихоб ва тафсири муҳит

Донишҷӯ як намунаи обро дар ду лавҳа кишт мекунад. Дар яке колонияҳои тира бо ҷилои металлии сабз пайдо мешаванд. Дар дигаре колонияҳои гулобии дурахшон бо ҳалқаи хира дида мешаванд. Ҳар ду лавҳа аз ҳамон як найча кишт шуда, паҳлуи ҳам инкубатсия шудаанд ва дар ҳамон соат хонда шудаанд. Донишҷӯ мепурсад, ки кадом лавҳа дуруст аст.

Ҳар ду лавҳа дурустанд. Онҳо ба саволҳои гуногун ҷавоб медиҳанд. Нофаҳмӣ вақте ба вуҷуд меояд, ки ин ду муҳит ҳамчун воситаҳои якдигарро ивазкунанда барои скрининги бактерияҳои рӯда ҳисобида мешаванд. Ҳадафи умумии онҳо интихоби организмҳои рӯдаии грамманфӣ ва ҷудо кардани ферментаторҳои лактоза аз ғайриферментаторҳо мебошад, аммо онҳо ин ҳадафро бо химияи гуногун ва мантиқи визуалии гуногун амалӣ мекунанд. Вақте ки ду мафҳуми асосиро мефаҳмед, интихоби лавҳа ва хондани колонияҳо ба кори муқаррарӣ табдил меёбад.

Ҷавоби кӯтоҳ

Агари EMB ду рангкунанда, eosin Y ва methylene blue, истифода мебарад, ки ҳамзамон ду вазифаро иҷро мекунанд: онҳо афзоиши организмҳои граммусбатро бозмедоранд ва дар атрофи истеҳсолкунандагони қавии кислота таҳшин шуда, колонияҳои тира ба вуҷуд меоранд; барои Escherichia coli ҳолати классикӣ ҷилои металлии сабз аст. Агари MacConkey вазифаҳоро ҷудо мекунад: намакҳои талха ҳамроҳ бо crystal violet организмҳои граммусбатро бозмедоранд, лактоза барои ферментатсия субстрат медиҳад ва neutral red ҳосилшавии кислотаро ҳамчун колонияҳои гулобӣ ё сурх нишон медиҳад. Агар вазифа намоиши равшани тахминии E. coli бошад, EMB мувофиқ аст. Агар вазифа ҷудокунии равшани гулобӣ аз беранг барои ферментаторҳои лактоза ва ғайриферментаторҳо бошад, махсусан дар равандҳои кор бо наҷосат ё пешоб, MacConkey одатан хонданаш осонтар аст. Ҳеҷ яке аз ин лавҳаҳо организмро танҳо аз рӯи ранг муайян намекунад.

EMB: рангкунандаҳое, ки ҳам интихоб мекунанд ва ҳам нишон медиҳанд

Мафҳуми EMB интихоб ва нишондиҳиро дар ҳамон молекулаҳо муттаҳид мекунад. Протоколи ASM барои агари eosin methylene blue EMB-ро ҳам интихобӣ ва ҳам дифференсиалӣ тавсиф мекунад: ҷуфти рангкунандаҳо бисёр организмҳои граммусбатро бозмедорад, дар ҳоле ки ферментатсияи лактоза ҷаббиш ва таҳшини рангкунандаҳоро ба вуҷуд меорад. Формулаи стандартии Levine дорои peptone, lactose, phosphate, eosin Y, methylene blue ва agar мебошад, тавре ки дар усули FDA BAM барои агари Levine EMB оварда шудааст. Ба назар гиред, ки ба баъзе формулаҳои кӯҳнаи EMB дар баробари лактоза sucrose низ илова мешуд, дар ҳоле ки Levine EMB лактоза дорад, аммо sucrose надорад; бинобар ин сабт кунед, ки лабораторияи шумо кадом формуларо истифода мебарад.

Хондани EMB маънои хондани рафтори рангкунандаҳоро дорад. Ферментатсияи пуршиддати лактоза ба қадри кофӣ кислота ҳосил мекунад, то таҳшини зиёди рангкунанда ба вуҷуд ояд ва ба E. coli марказҳои тираи кабуд-сиёҳ ва, дар ҳолати классикӣ, ҳангоми нури инъикосшуда ҷилои металлии сабз диҳад. Ферментаторҳои заифтар, аз ҷумла Enterobacter ва Klebsiella, одатан ҳамчун колонияҳои луобии гулобӣ то бунафш бе чунин ҷило мерӯянд. Ғайриферментаторҳо, ба монанди Salmonella, Shigella ва Proteus, одатан ҳамчун колонияҳои беранг ё шаффоф мерӯянд, зеро онҳо афзоиши тези кислотаро, ки рангкунандаҳоро таҳшин мекунад, ба вуҷуд намеоранд. Организмҳои граммусбат одатан боздошта мешаванд, гарчанде дараҷаи боздорӣ вобаста ба штамм ва маҳсулот фарқ мекунад. Химияи пурраи тайёр кардани рангкунандаҳо, аз ҷумла сабаби он ки methylene blue дар навбати аввал ҳамчун рангкунандаи катионӣ рафтор мекунад, мавзӯи алоҳидаи формулаҳои рангкунандаҳост; заминаи умумии микроскопия бошад дар атласи усулҳои рангкунӣ оварда шудааст. Ин мақола ба интихоб ва хондани лавҳаҳо равона шудааст.

Расми боло тасвирӣ аст. Он мантиқи визуалии интизоршавандаро нишон медиҳад: дар EMB колонияҳои тира бо ҷило, навъҳои луобии гулобӣ ва навъҳои рангпарида, дар муқоиса бо навъҳои гулобӣ ва рангпарида дар MacConkey. Аз он барои омӯхтани намуна истифода баред, сипас ҳар як хулосаро бо назоратҳои аксбардоришуда ва дастурамали маҳсулоти дақиқи муҳите, ки дар мизи кории шумост, тасдиқ кунед.

MacConkey: вазифаҳои ҷудошуда, қоидаи визуалии содатар

Мафҳуми MacConkey ҳар вазифаро ба ҷузъи алоҳида месупорад. Протоколи ASM барои агари MacConkey ҳамин сохтори интихобӣ ва дифференсиалиро пешниҳод мекунад ва усули FDA BAM барои агари MacConkey ҷузъҳои амалкунандаро номбар мекунад: peptones, lactose, bile salts, salt, neutral red, crystal violet ва agar. Намакҳои талха ҳамроҳ бо crystal violet бар зидди организмҳои граммусбат интихоб мекунанд. Лактоза субстрати ферментатсияро таъмин мекунад. Neutral red ҳамчун нишондиҳандаи pH амал карда, дар ҷойҳои ҳосилшавии кислота ранги гулобӣ то сурх мегирад ва баъзан дар атрофи ферментаторҳои қавӣ таҳшини талха низ пайдо мешавад.

Қоидаи хондан қасдан сода аст: гулобӣ маънои ферментатори лактозаро дорад, беранг ё рангпарида бошад ғайриферментаторро. E. coli гулобӣ то сурх менамояд ва аксар вақт ҳалқаи таҳшини талха дорад. Klebsiella ва Enterobacter гулобӣ буда, аз сабаби капсулаҳояшон аксар вақт луобӣ менамоянд. Salmonella, Shigella, Proteus ва бисёр чӯбчашаклҳои дигари грамманфӣ беранг менамоянд. Як бартарии иловагӣ дар лабораторияҳои таълимӣ муҳим аст: намакҳои талха одатан паҳншавии Proteus-ро кам мекунанд, бинобар ин гирифтани колонияҳои ҷудогона дар MacConkey нисбат ба муҳитҳои ғайриинтихобӣ осонтар аст, ҳарчанд боздорӣ мутлақ нест ва дар ҳолатҳое, ки назорати паҳншавӣ афзалият дорад, вариантҳои бе намак низ мавҷуданд.

Сабаби молекулавии чунин рафтори рангкунандаҳо ба заряд ва сохтор вобаста аст. Methylene blue рангкунандаи катионии phenothiazine мебошад, ки сохтор ва хусусиятҳои он майли онро ба сатҳҳои кислотаии бактерияҳо шарҳ медиҳанд; ҳамин майл ҳангоми таҳшиншавии он дар минтақаҳои кислотаии EMB низ амал мекунад.

Муқоиса дар як нигоҳ

Ҷадвалро ҳамчун тартиби қабули қарор хонед. Вақте ки машқ бояд ба донишҷӯён градиенти қувваи ферментатсияро бо як натиҷаи ниҳоии барҷаста нишон диҳад, EMB онро нишон медиҳад. Вақте ки машқ пеш аз тасдиқи биохимиявӣ ҷудокунии зуд ва дуҳолатаро талаб мекунад, MacConkey онро нишон медиҳад.

Кадом муҳит барои кадом намуна

Барои машқҳои об, ки ба шинохти тахминии колиформҳои наҷосатӣ ё E. coli равона шудаанд, EMB ҷолиб аст, зеро ҷило аз ҷиҳати визуалӣ фарқкунанда мебошад. MacConkey низ барои организмҳои рӯдаии грамманфӣ мувофиқ аст ва таърихан дар таҳлили об истифода шудааст, аммо ҳеҷ яке аз ин лавҳаҳо ҷойгузини усули танзимшавандаи таҳлили об нестанд; вобаста ба санҷиш чунин усул метавонад муҳитҳое мисли modified mTEC ё MI-ро талаб кунад. Усулеро, ки лабораторияи шумо вазифадор аст риоя кунад, санҷед.

Барои ҷудокунии ферментаторҳо аз ғайриферментаторҳо дар намунаҳои монанд ба наҷосат, MacConkey одатан аз ин ду муфидтар аст. Дар кори амалии наҷосат барои Salmonella ё Shigella одатан муҳитҳои интихобии қавитар барои организмҳои рӯда, ба монанди XLD ё Hektoen enteric, илова карда мешаванд, на ин ки танҳо ба MacConkey такя шавад.

Барои омӯзиш бо намунаи пешоб, ки ба ҷараёни кори клиникӣ монанд аст, MacConkey-ро бо blood agar ҷуфт кунед. MacConkey ҷудокунии ибтидоии организмҳои грамманфиро таъмин мекунад, дар ҳоле ки blood agar организмҳоеро барқарор мекунад, ки MacConkey бозмедорад. Ин ҷуфткунӣ дар тавсифҳои клиникии ташкили фарҳанги пешоб стандартӣ аст.

Барои омӯзиши худи мафҳум, ҳар дуро истифода баред. EMB нишон медиҳад, ки қувваи ферментатсия аҳамият дорад ва як молекула метавонад ду вазифаро иҷро кунад. MacConkey тарҳи модулӣ меомӯзонад: интихобкунанда, субстрат ва нишондиҳанда ҷудо нигоҳ дошта мешаванд. Донишҷӯёне, ки E. coli-и маълум, Klebsiella aerogenes-и маълум ва Salmonella-и маълумро паҳлуи ҳам дар ҳар ду муҳит кишт мекунанд, одатан дигар ин ду мантиқро омехта намекунанд.

Хатоҳои хондан, ки ҳар давра такрор мешаванд

Хатои маъмултарин муайян кардани организм танҳо аз рӯи ранг аст. Ранги гулобӣ дар MacConkey метавонад E. coli, Klebsiella, Enterobacter ё ферментатори дигар бошад. Беранг метавонад Salmonella, Shigella, Proteus, Pseudomonas ё ғайриферментатори дигар бошад. Ранг фенотипи скринингӣ аст, ки кори тасдиқиро, аз ҷумла Gram stain, oxidase, biochemical panels ё identification by instrument, роҳнамоӣ мекунад; он номи намуд нест.

Хатои дуюм аз ҳад зиёд аҳамият додан ба набудани ҷило аст. Баъзе колонияҳои воқеии E. coli, махсусан колонияҳои ҷудогона, дар EMB ҷилои металлии кам ё тамоман надоранд. Набудани ҷило E. coli-ро истисно намекунад ва мавҷудияти ҷило онро исбот намекунад. Ҷилоро ҳамчун нишонаи тахминӣ қабул кунед.

Хатои сеюм муқоисаи лавҳаҳои синну соли гуногун аст. Ферментаторҳои дерии лактоза метавонанд баъд аз инкубатсияи тӯлонӣ дар MacConkey гулобӣ шаванд, ки ҷудокунии равшани ферментатор аз ғайриферментаторро норавшан мекунад. Дар соате, ки лаборатория муайян кардааст, хонед ва вақти инкубатсияро ҳамроҳ бо натиҷа сабт кунед.

Хатои чорум ҳамчун як организм хондани афзоиши омехта аст. Колонияи гулобӣ дар паҳлуи колонияи беранг ду фенотипро нишон медиҳад, на ҳолати миёна. Колонияҳои хуб ҷудошударо интихоб кунед ва ҳар морфотипро алоҳида коркард кунед. Текстураи луобӣ низ метавонад иштибоҳ барангезад: ҳам Klebsiella ва ҳам Enterobacter метавонанд луобӣ намоянд, бинобар ин танҳо капсула номро муайян намекунад. Организме, ки пештар ҳамчун Enterobacter aerogenes омӯзонда мешуд, ҳоло ҳамчун Klebsiella aerogenes тасниф мешавад; ҳамин чиз мефаҳмонад, ки чаро ҷадвалҳои кӯҳна ва тамғаҳои нав бо ҳам номувофиқ менамоянд.

Назоратҳо ва қоидаи ҷамъбастӣ

Дар ҳар ҷаласа назоратҳои аксбардоришуда ё тозаро истифода баред: E. coli барои реаксияи ферментатори қавӣ, Klebsiella aerogenes барои ферментатсияи луобӣ бе ҷилои классикӣ, як штамми Salmonella барои реаксияи ғайриферментатори беранг ва Staphylococcus aureus барои тасдиқи боздории организмҳои граммусбат дар маҳсулоти дақиқи шумо. Рақамҳои штамм ва меъёрҳои қабулро бо дастурамали истеҳсолкунанда мувофиқ кунед, зеро интихобият бо миқдори bile, crystal violet ва рангкунандаҳо тағйир меёбад.

Дар назди мизи корӣ як ҷумла дар хотир дошта бошед. EMB рангкунандаҳоеро истифода мебарад, ки ҳам интихоб мекунанд ва ҳам нишон медиҳанд; ин барои E. coli аломати барҷаста медиҳад, аммо хонданаш нозуктар аст. MacConkey вазифаи интихобро аз нишондиҳӣ ҷудо мекунад; ин ҷудокунии равшани гулобӣ аз рангпарида медиҳад, аммо тафсилоти ферментатсия камтар аст. Муҳитеро интихоб кунед, ки мафҳуми он ба саволи шумо мувофиқат мекунад, рангро бо санҷишҳои дуруст тасдиқ кунед ва он гоҳ ин ду лавҳа дигар рақобат намекунанд, балки якдигарро пурра мекунанд.