மெத்திலீன் ப்ளூ மற்றும் Bartonella: ஆய்வக முடிவுகளும் மருத்துவ ஆதாரங்களின் வரம்புகளும்

ஒரு வளர்ப்பு ஆய்வுத் தட்டுக்கும் ஒரு நோயாளிக்கும் பொதுவாக இருப்பது ‘தொற்று’ என்ற சொல்தான்; அதன் பொருள் ஒன்றல்ல. தட்டில், தொற்று என்பது அகாரில் உள்ள நுண்ணுயிர்க் கூட்டங்களின் எண்ணிக்கை. நோயாளியில், அது செல்களுக்கும் இரத்த நாளங்களுக்கும் உள்ளே இருக்கும் பாக்டீரியாக்கள், இரத்தம் மற்றும் திசுக்கள் வழியாகச் செல்லும் மருந்துகள், பணியின் ஒரு பகுதியைச் செய்யும் நோய் எதிர்ப்பு அமைப்பு ஆகியவற்றை உள்ளடக்கியது. இவ்விரண்டையும் குழப்பினால், வியப்பூட்டும் ஓர் ஆய்வக எண் சிகிச்சையைப் போலத் தோன்றத் தொடங்கும். இவற்றைத் தனித்தனியாகப் பார்த்தால், அதே எண் உண்மையில் என்னவோ அதுவாகவே இருக்கும்: அடுத்த பரிசோதனையை மேற்கொள்வதற்கான ஒரு காரணம்.

இந்த வேறுபாட்டைத் தெளிவாக வைத்திருப்பதே மெத்திலீன் ப்ளூ மற்றும் Bartonella பற்றிய இந்த மதிப்பாய்வின் முழு நோக்கம். ஒரே ஆராய்ச்சிக் குழுவின் இரண்டு ஆய்வக ஆய்வுகள், வளராத நிலையில் உள்ள Bartonella henselae-க்கு எதிராக மெத்திலீன் ப்ளூவைச் சோதித்தன. கண்ணாடி மற்றும் பிளாஸ்டிக் ஆய்வகக் கலன்களில் வலுவான செயல்பாடு இருப்பதாக இரண்டும் தெரிவித்தன. எந்த ஆய்வும் மனிதரில் சோதிக்கவில்லை.

ஆராய்ச்சியாளர்கள் நிலைநிறுத்தக் கட்டத்தை ஏன் சோதிக்கிறார்கள்

பெரும்பாலான நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பு மருந்துச் சோதனைகள் வளரும் செல்களைப் பயன்படுத்துகின்றன. இந்த மாதிரி இன்னும் கடினமான ஒரு நிலையைப் பிரதிபலிப்பதில்லை: பிரிவதை நிறுத்திவிட்டு, தம்மைப் போன்ற வளரும் செல்களைக் கொல்லும் மருந்துகளைத் தாங்கிக்கொள்ளும் செல்கள்.

சிவப்பணுக்கள் மற்றும் இரத்த நாளங்களின் உள்புறச் செல்கள் உட்பட, உடலுக்குள் Bartonella தொடர்ந்து நிலைத்திருக்க முடியும். எனவே, நிலைநிறுத்தக் கட்டத்தை அடைந்த B. henselae-வை அங்கீகரிக்கப்பட்ட எந்த மருந்துகள் கொல்ல முடியும் என்று அந்தக் குழு ஆராய்ந்தது. வளரும் செல்களுக்கு எதிரான குறைந்த MIC, நிலைநிறுத்தக் கட்டச் செல்கள் கொல்லப்படுவதை முன்னறிவிக்கவில்லை. ரிஃபாம்பினின் MIC மிகக் குறைவாக இருந்தாலும், அது நிலைநிறுத்தக் கட்டச் செல்களைச் சரியாகக் கொல்லவில்லை; அதிக MIC மதிப்புகளைக் கொண்ட சேர்மங்கள் அவற்றை நன்றாகக் கொன்றன. இத்தகைய ஆய்வுக் கட்டுரைகளை வாசிப்பதற்கான பொதுவான முறையை அறிய விரும்புவோர், மெத்திலீன் ப்ளூ ஆராய்ச்சியை வாசிப்பதற்கான வழிகாட்டியில் அதைக் காணலாம்.

முதல்筛னிங் சோதனை: லி மற்றும் சக ஆராய்ச்சியாளர்கள், 2019

Antibiotics இதழில் வெளியான 2019 நிலைநிறுத்தக் கட்ட筛னிங் சோதனை, B. henselae JK53 என்ற ஒரே நுண்ணுயிர் வகைப்பிரிவைப் பயன்படுத்தியது. அது 10 percent கன்றுக் கருவின் இரத்தச்சீரம் கொண்ட Schneider ஊடகத்தில், 37 C வெப்பநிலையிலும் 5 percent CO2 சூழலிலும் வளர்க்கப்பட்டது. ஒரு நாள் வளர்ப்புகளில் பெரும்பாலும் தனித்தனியாகப் பரவிய, பிரிந்துகொண்டிருந்த செல்கள் இருந்தன. ஐந்து நாள் வளர்ப்புகள், ஒரு mL-க்கு சுமார் 10-இன் 8-ஆம் அடுக்கு நுண்ணுயிர்க் கூட்டம் உருவாக்கும் அலகுகளுடன், நிலைநிறுத்தக் கட்டமாகக் கருதப்பட்டன; அவற்றில் கண்ணுக்குத் தெரியும் திரள்களும் இருந்தன.

சோதனையில் SYBR Green I மற்றும் புரோப்பிடியம் அயோடைடு பயன்படுத்தப்பட்டன. உயிருள்ள செல்களையும் ஐசோபுரோப்பனால் கொல்லப்பட்ட செல்களையும் கலந்த மாதிரிகளின் அடிப்படையில் அது அளவுத்திருத்தம் செய்யப்பட்டது. மெத்திலீன் ப்ளூ அடர்த்தியான நிறமுடையது என்பதால், செயல்பாடு காட்டிய முடிவுகள் முதலில் நுண்ணோக்கி மூலமும், பின்னர் இன்னும் கடுமையான இறுதி அளவுகோலான இரத்த அகாரில் நுண்ணுயிர்க் கூட்டங்களை எண்ணுவதன் மூலமும் உறுதிப்படுத்தப்பட்டன.

1,581 அங்கீகரிக்கப்பட்ட மருந்துகளை 50 micromolar செறிவில் சோதித்தபோது, மெத்திலீன் ப்ளூவுக்குப் பிறகு உயிருடன் எஞ்சியவை தட்டு அளவீட்டுக் கருவியின்படி 16 percent, நுண்ணோக்கி அளவீட்டின்படி 25 percent. டாப்டோமைசினுக்கு 21 percent, பல அசோல் மருந்துகளுக்கு 22 முதல் 27 percent, ஜென்டாமைசினுக்கு 32 percent, எரித்ரோமைசினுக்கு 66 percent, சிப்ரோஃப்ளோக்சாசினுக்கு 74 percent பதிவானது. தட்டு அளவீட்டுக் கருவியில் பைர்வினியம் பாமோயேட் இன்னும் வலுவானதாகத் தோன்றியது; ஆனால் அதன் சொந்த ஒளிர்வு காரணமாக நுண்ணோக்கி மூலம் அதை மதிப்பிட முடியவில்லை.

வளரும் B. henselae-க்கு எதிரான மெத்திலீன் ப்ளூவின் MIC, 0.08 முதல் 0.16 micrograms per mL ஆக இருந்தது. ஐந்து நாள் நிலைநிறுத்தக் கட்டச் செல்களை 5 micrograms per mL செறிவுக்கு உட்படுத்தியபோது, ஒரு நாளுக்குப் பிறகு கண்டறியக்கூடிய நுண்ணுயிர்க் கூட்டங்கள் எதுவும் இல்லாத அளவுக்கு எண்ணிக்கை குறைந்தது. இது, சோதிக்கப்பட்ட செறிவுகளில் டாப்டோமைசின் மற்றும் பைர்வினியம் பாமோயேட் காட்டிய முடிவுகளுடன் ஒத்திருந்தது. காலத்தைப் பொறுத்து செல்கள் கொல்லப்படுவதை அளவிட்ட தனிப் பரிசோதனையில் 10 micrograms per mL பயன்படுத்தப்பட்டது. இவை ஆய்வகத்தில் செல்கள் வெளிப்படுத்தப்பட்ட செறிவுகளே அன்றி, மருந்தளவுகள் அல்ல; ஆய்வுக் கட்டுரையும் அவ்வாறே குறிப்பிடுகிறது. மனிதர்களில் பிளாஸ்மாவின் உச்சச் செறிவு சுமார் 3.9 micrograms per mL என்ற மேற்கோள் மதிப்பு, பின்னணித் தகவலாக மட்டுமே கட்டுரையில் இடம்பெறுகிறது. பிளாஸ்மா மதிப்பை ஏன் திசு மதிப்பாகக் கருதக்கூடாது என்பதை மெத்திலீன் ப்ளூவின் மருந்தியக்கவியல் பற்றிய கண்ணோட்டம் விளக்குகிறது.

இரண்டு வரம்புகள் கட்டுரையில் வெளிப்படையாகக் குறிப்பிடப்பட்டுள்ளன. உயிர்ப்படல மாதிரி பயன்படுத்தப்படவில்லை; மெத்திலீன் ப்ளூவுடன் மருந்துச் சேர்க்கைகளும் சோதிக்கப்படவில்லை. ஐந்து நாள் வளர்ப்புகளில் காணப்பட்ட திரள்கள், நிலைநிறுத்தக் கட்டத் திரவ வளர்ப்பில் இருந்த செல்க் கொத்துகளே தவிர, சரிபார்க்கப்பட்ட உயிர்ப்படலப் பரிசோதனை அல்ல. விலங்கு ஆய்வுகள், மருந்துச் சேர்க்கை ஆய்வுகள், உயிர்ப்படல ஆய்வுகள், பிற Bartonella இனங்களில் சோதனைகள் ஆகியவற்றை மேற்கொள்ள வேண்டும் என்று ஆசிரியர்கள் தெரிவித்தனர்.

மருந்துச் சேர்க்கைகளும் உயிர்ப்படலத்திலிருந்து பெறப்பட்ட செல்களும்: ஷெங் மற்றும் சக ஆராய்ச்சியாளர்கள், 2020

BMC Microbiology இதழில் வெளியான 2020 தொடராய்வு, அதே நுண்ணுயிர் வகைப்பிரிவையும் ஊடகத்தையும் பயன்படுத்தியது. ஆனால் ஆறு நாள் நிலைநிறுத்தக் கட்ட வளர்ப்புகளுக்கு மாறியதுடன், முதல் கட்டுரையில் இல்லாத இரண்டு அம்சங்களையும் சேர்த்தது: இரண்டு மருந்துச் சேர்க்கைகள் மற்றும் உயிர்ப்படலத்திலிருந்து பெறப்பட்ட செல்களின் மாதிரி.

தனித்தனி மருந்துகளை ஒரே சீரான 5 micrograms per mL செறிவில் 24 hours பயன்படுத்தியபோது, மெத்திலீன் ப்ளூவுக்குப் பிறகு ஒரு mL-க்கு 3.2 பெருக்கல் 10-இன் 4-ஆம் அடுக்கு நுண்ணுயிர்க் கூட்டம் உருவாக்கும் அலகுகள் எஞ்சின. கட்டுப்பாட்டு மாதிரியில் இது சுமார் 2.8 பெருக்கல் 10-இன் 10-ஆம் அடுக்காக இருந்தது. அதே நேரப் புள்ளியில் சிப்ரோஃப்ளோக்சாசின், ஜென்டாமைசின் மற்றும் நைட்ரோஃப்யூரான்டாயின் ஆகியவற்றுக்குப் பிறகு இன்னும் குறைவான கூட்டங்கள் எஞ்சின. இது 2019 முடிவிலிருந்து வேறுபடுகிறது; அப்போது அதே குறிப்பிடப்பட்ட செறிவில் ஒரு நாளுக்குப் பிறகு கண்டறியக்கூடிய கூட்டங்கள் எதுவும் இல்லை. வளர்ப்பின் வயது, அடர்த்தி, கையாளும் முறை ஆகியவை வேறுபட்டன. எனவே செல்களைக் கொல்லும் விளைவு ஒரே திசையில் மீண்டும் கிடைத்தாலும், அதன் அளவு ஒரே மாதிரியாக இல்லை. பரிசோதனைகளுக்கு இடையிலான இந்த மாற்றம், வழக்கமான பாதுகாப்பு மற்றும் மருந்து இடைவினைச் சரிபார்ப்புகள் ஆய்வகச் செயல்திறனையும் மருத்துவ விளைவையும் தனித்தனியாகக் கருதுவதற்கான ஒரு காரணம்.

மருந்துச் சேர்க்கைகளைச் சோதித்த பகுதியே அதிகம் மேற்கோள் காட்டப்படுகிறது. ஒவ்வொரு மருந்தும் 5 micrograms per mL செறிவில் நிலைநிறுத்தப்பட்டது. அசித்ரோமைசின் மற்றும் மெத்திலீன் ப்ளூ சேர்க்கையும், ரிஃபாம்பின் மற்றும் மெத்திலீன் ப்ளூ சேர்க்கையும் 24 hours-க்குப் பிறகு கண்டறியக்கூடிய நிலைநிறுத்தக் கட்டக் கூட்டங்கள் எதையும் விட்டுவைக்கவில்லை. சிப்ரோஃப்ளோக்சாசின் கொண்ட இரு சேர்க்கைகளும் இதே முடிவைக் காட்டின. சோதிக்கப்பட்ட 25 சேர்க்கைகளில் இந்த நான்கு மட்டுமே அத்தகைய முடிவைக் காட்டின. முறையான கூட்டுவிளைவு பகுப்பாய்வு செய்யப்படவில்லை. எனவே சரியான சொல், இந்தச் சூழ்நிலைகளில் செயல்படும் சேர்க்கை என்பதே; நிரூபிக்கப்பட்ட கூட்டுவிளைவு என்பதல்ல.

உயிர்ப்படலப் பரிசோதனை, சிதைக்கப்பட்ட இளம் உயிர்ப்படலத்திலிருந்து மீட்டெடுக்கப்பட்ட செல்களைச் சோதித்தது; சேதமடையாத முதிர்ந்த உயிர்ப்படலத்திற்குள் மருந்து ஊடுருவுவதைச் சோதிக்கவில்லை. வளர்ப்புகள் ஐந்து நாட்கள் வளர்க்கப்பட்டு, நீர்த்தாக்கப்பட்டு கிணறுகளைக் கொண்ட தட்டுகளில் மேலும் ஐந்து நாட்கள் வைக்கப்பட்டன. கிரிஸ்டல் வயலெட் சாயமிடுதல் மூலம் உறுதிப்படுத்தப்பட்ட பின்னர், மருந்துகளுக்கு உட்படுத்துவதற்கு முன் அவை சுரண்டி எடுக்கப்பட்டன. 5 micrograms per mL செறிவில் மெத்திலீன் ப்ளூ மட்டும் பயன்படுத்தியபோது, 6-ஆம் நாளில் எண்ணிக்கை 2.3 பெருக்கல் 10-இன் 2-ஆம் அடுக்காகக் குறைந்தது. தனித்தனி மருந்துகளில் சிறந்தவற்றுள் ஒன்றாக இருந்தாலும், அது பூஜ்ஜியமாகவில்லை. மெத்திலீன் ப்ளூ கொண்ட இரு சேர்க்கைகளும் 6-ஆம் நாளில் பூஜ்ஜியத்தை அடைந்தன; சிப்ரோஃப்ளோக்சாசின் கொண்ட இரு சேர்க்கைகளும் அவ்வாறே இருந்தன.

கவனமாக வாசிப்பவர் சுட்டிக்காட்டக்கூடிய அதே வரம்புகளை ஆசிரியர்களும் குறிப்பிட்டனர்: பழைய, சேதமடையாத உயிர்ப்படலத்திற்குப் பதிலாகச் சுரண்டி எடுக்கப்பட்ட இளம் உயிர்ப்படலம்; ஒவ்வொரு மருந்தின் நடைமுறைக்கு ஏற்ற உச்சச் செறிவுக்குப் பதிலாக எல்லா மருந்துகளுக்கும் வசதியான ஒரே செறிவு; அசித்ரோமைசின் அல்லது ரிஃபாம்பினை மையமாகக் கொண்ட தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட சேர்க்கைகள் மட்டுமே; ஒரே நுண்ணுயிர் வகைப்பிரிவு; விலங்கு ஆய்வுகள் இல்லை; நோயாளிகள் இல்லை. பின்னர் மூன்று மருந்துச் சேர்க்கைகளை ஆய்வு செய்வது முன்மொழியப்பட்டதே தவிர, அதன் முடிவுகள் தெரிவிக்கப்படவில்லை.

ஆய்வு வடிவமைப்புகளின் ஒப்பீடு

இந்தக் கட்டுரையின் மையக் கருத்தை அட்டவணை சுருக்கமாகக் காட்டுகிறது. கடைசி நெடுவரிசைக்கு இடப்புறம் உள்ள அனைத்தும் வளர்ப்பு ஆய்வுகளே. இரு கட்டுரைகளிலும் உள்ள எதுவும் கடைசி நெடுவரிசையில் இடம்பெறவில்லை.

Bartonella என்பது Borrelia அல்ல

இரு கட்டுரைகளும் Lyme நோயை ஏற்படுத்தும் சுருள் வடிவ பாக்டீரியமான Borrelia burgdorferi-யைக் குறிப்பிடுகின்றன. ஏனெனில், சாயத்தைப் பயன்படுத்திய சோதனை முறை, அதே ஆய்வகத்தில் முன்பு மேற்கொள்ளப்பட்ட Borrelia நிலைநிறுத்தக் கட்ட ஆய்விலிருந்து வந்தது. அந்த ஆய்விலும் மெத்திலீன் ப்ளூ மற்றும் டாப்டோமைசின் செயல்பாடு காட்டியிருந்தன. இந்த வரலாறு பயனுள்ள பின்னணியாக இருப்பதுடன், பொதுவாக ஏற்படும் தவறுகளுக்கும் காரணமாகிறது.

Bartonella பற்றிய இரு கட்டுரைகளிலும் எந்தப் பரிசோதனையும் Borrelia-வை Bartonella-வுடன் அருகருகே சோதிக்கவில்லை. நுண்ணுயிரிகள் வேறுபடுகின்றன; ஊடகங்கள் வேறுபடுகின்றன; செறிவுகள் வேறுபடுகின்றன. Bartonella-வில் மெத்திலீன் ப்ளூவுக்கு இருக்கலாம் எனக் கருதப்பட்ட சவ்வு மீதான விளைவு, மேலும் ஆய்வு தேவைப்படும் ஊகமாகவே குறிப்பிடப்பட்டது. முடிவுகளை ஓர் இனத்திலிருந்து மற்றோர் இனத்திற்குப் பொருத்தக்கூடாது; ஒட்டுண்ணிகள் பற்றிய பரந்த கூற்றுகளையும் எந்தக் கட்டுரையும் ஆதரிக்கவில்லை. இந்தக் காரணத்தால்தான், தொடர்ந்து நிலைத்திருக்கும் Borrelia மற்றும் Bartonella செல்களின் ஒப்பீடு, இவ்விரு ஆராய்ச்சி இலக்கியங்களையும் தனித்தனியாக வைத்திருக்கிறது.

வளர்ப்பு முடிவுகள் ஏன் சிகிச்சை நெறிமுறையாக மாறுவதில்லை

மெத்திலீன் ப்ளூ Bartonella சிகிச்சை நெறிமுறையைத் தேடுவதில் உள்ள ஆர்வம் புரிந்துகொள்ளக்கூடியதே. ஆனால் அந்தச் சொற்றொடரை வாங்க வேண்டியவற்றின் பட்டியலாக அல்லாமல், எச்சரிக்கைக் குறியாகக் கருத வேண்டும் என்பதற்கான காரணங்களையே இந்தக் கட்டுரைகள் காட்டுகின்றன.

முதலாவதாக, ஒரு ஆய்வகக் கிணற்றில் உள்ள 5 micrograms per mL என்பது மருந்துப் பரிந்துரை அல்ல. உறிஞ்சுதல், உடலில் பரவுதல், புரதத்துடன் பிணைதல், செல்களுக்குள் ஊடுருவுதல், உடல் தாங்கிக்கொள்ளும் தன்மை ஆகியவற்றின் தகவல்கள் அதனுடன் இல்லை. நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பு மருந்துகளின் உச்சச் செறிவுகளின் தோராயமான சராசரியாக ஆசிரியர்கள் அதைத் தேர்ந்தெடுத்தனர். எதிர்கால ஆய்வுகள் ஒவ்வொரு மருந்தையும் அதன் நடைமுறைக்கு ஏற்ற செறிவில் பயன்படுத்த வேண்டும் என்றும் தெரிவித்தனர்.

இரண்டாவதாக, பூஜ்ஜியக் கூட்டங்கள் என்பது அந்தத் தட்டு வளர்ப்பு நிபந்தனைகளில் கூட்டங்கள் இல்லை என்பதையே குறிக்கும்; திசுவில் நுண்ணுயிர்கள் முற்றிலும் இல்லை என்பதைக் குறிக்காது. தொடர்ந்து நிலைத்திருக்கும் செல்கள், செல்களுக்குள் இருக்கும் பாக்டீரியாக்கள், மாதிரி எடுப்பதன் வரம்புகள் ஆகிய அனைத்தும் அகார் தட்டின் எல்லைக்கு வெளியே உள்ளன.

மூன்றாவதாக, ஒரு ஆய்வகக் கிணற்றில் நுண்ணுயிர்களை முற்றிலும் அகற்றும் சேர்க்கைகள் உடலில் தோல்வியடையலாம் அல்லது தீங்கு விளைவிக்கலாம். அசித்ரோமைசின் மற்றும் மெத்திலீன் ப்ளூ, ரிஃபாம்பின் மற்றும் மெத்திலீன் ப்ளூ ஆகியவை ஆய்வகச் செறிவுகளில் சோதிக்கப்பட்ட ஆய்வகச் சேர்க்கைகள். விலங்குகளில் மருந்தியக்கவியல் ஆய்வுகளும் கட்டுப்படுத்தப்பட்ட மனிதத் தரவுகளும் இல்லாமல், மருந்தளவோ, பயன்பாட்டுக் காலமோ, நன்மை–ஆபத்து விகிதமோ நிறுவப்படவில்லை. விருப்பங்களைப் பரிசீலிக்கும் எவரும், தட்டு ஆய்வுத் தரவுகளிலிருந்து எந்த முடிவையும் எடுப்பதற்கு முன், அவற்றை மருத்துவருடன் விவாதிக்க வேண்டும்; மெத்திலீன் ப்ளூ பயன்பாட்டிற்கு எப்போது மருத்துவ மேற்பார்வை தேவை என்பதையும் ஆராய வேண்டும்.

இந்தக் கட்டுரைகள் ஆதரிக்கும் வரையறுக்கப்பட்ட முடிவு இதுதான்: வளராத B. henselae JK53-க்கு எதிராக, உயிருடலுக்கு வெளியே மேற்கொள்ளப்படும் சோதனைகளில் மெத்திலீன் ப்ளூ மீண்டும் கிடைக்கக்கூடிய செயல்பாட்டைக் கொண்டுள்ளது. இரண்டு மருந்துகள் சேர்ந்த ஆய்வகச் சேர்க்கைகளிலும் இது காணப்படுகிறது. சேர்க்கைகள் மற்றும் உயிர்ப்படலத்திலிருந்து பெறப்பட்ட செல்கள் குறித்த மிக வலுவான முடிவுகள் 2020 ஆய்விலிருந்து வருகின்றன. இந்தச் செயல்பாடு மனிதர்களின் பார்டோனெல்லோசிஸில் பொருட்படுத்தத்தக்கதா என்பது உட்பட, மற்ற அனைத்தும் இன்னும் சோதிக்கப்படவில்லை.