கட்டுரை
EMB agar மற்றும் MacConkey agar: ஊடகத் தேர்வு மற்றும் விளக்கம்
ஒரு மாணவர் அதே நீர் மாதிரியை இரண்டு தட்டுகளில் streak செய்கிறார். ஒன்றில், பச்சை உலோக ஒளிர்வுடன் கருமையான காலனிகள் தோன்றுகின்றன. மற்றொன்றில், மங்கலான halo-வுடன் தெளிவான இளஞ்சிவப்பு காலனிகள் தோன்றுகின்றன. இரண்டு தட்டுகளுக்கும் அதே குழாயிலிருந்து inoculate செய்யப்பட்டு, பக்கப்பக்கமாக incubate செய்யப்பட்டு, அதே நேரத்தில் வாசிக்கப்பட்டது. எந்தத் தட்டு சரி என்று மாணவர் கேட்கிறார்.
இரண்டு தட்டுகளும் சரியானவை. அவை வெவ்வேறு கேள்விகளுக்குப் பதிலளிக்கின்றன. குடல் பாக்டீரியாக்களைத் திரையிடும் பரஸ்பரம் மாற்றிக்கொள்ளக்கூடிய இரண்டு ஊடகங்களாக இவற்றைக் கருதுவதிலிருந்தே குழப்பம் வருகிறது. Gram negative enteric உயிரிகளைத் தேர்ந்தெடுத்து, lactose-ஐ புளிக்கவைக்கும் உயிரிகளை புளிக்கவைக்காத உயிரிகளிலிருந்து பிரிப்பது என்ற பொதுவான நோக்கம் இரண்டிற்கும் உள்ளது; ஆனால் அந்த நோக்கத்தை அவை வெவ்வேறு வேதியியல் மற்றும் வெவ்வேறு காட்சிசார் தர்க்கத்தின் மூலம் செயல்படுத்துகின்றன. அடிப்படையான இந்த இரண்டு கருத்துகளையும் புரிந்துகொண்டவுடன், தட்டு தேர்வும் காலனி வாசிப்பும் வழக்கமான செயலாகிவிடும்.
சுருக்கமான பதில்
EMB agar இரண்டு சாயங்களைப் பயன்படுத்துகிறது: eosin Y மற்றும் methylene blue. இவை இரண்டு பணிகளை ஒரே நேரத்தில் செய்கின்றன: Gram positive வளர்ச்சியைத் தடுக்கின்றன; மேலும் அதிக அமிலம் உற்பத்தி செய்யும் உயிரிகளைச் சுற்றி precipitate ஆகி கருமையான காலனிகளை உருவாக்குகின்றன. பாரம்பரியமாக Escherichia coli-க்கு உலோகப் பச்சை ஒளிர்வு காணப்படும். MacConkey agar இந்தப் பணிகளைப் பிரிக்கிறது: bile salts மற்றும் crystal violet Gram positive உயிரிகளைத் தடுக்கின்றன, lactose புளிப்பாக்கத்திற்கு ஊட்டமாகிறது, neutral red அமிலத்தை இளஞ்சிவப்பு அல்லது சிவப்பு காலனிகளாகக் காட்டுகிறது. E. coli-யை கண்கவர் presumptive முறையில் காட்டுவதே பணியாக இருந்தால், EMB பொருத்தமானது. குறிப்பாக stool அல்லது urine workflow-களில் lactose-ஐ புளிக்கவைக்கும் உயிரிகளை புளிக்கவைக்காத உயிரிகளிலிருந்து தெளிவாக இளஞ்சிவப்பு மற்றும் நிறமற்றதாகப் பிரிக்க வேண்டுமெனில், MacConkey பொதுவாக எளிதாக வாசிக்கப்படுகிறது. நிறத்தை மட்டும் கொண்டு எந்தத் தட்டும் ஒரு உயிரியை அடையாளம் காணாது.
EMB: ஒரே நேரத்தில் தேர்ந்தெடுத்து அறிக்கையிடும் சாயங்கள்
EMB கருத்தமைப்பில் தேர்ந்தெடுக்கும் பணியும் குறியீட்டு பணியும் அதே மூலக்கூறுகளில் அடங்குகின்றன. ASM eosin methylene blue agar நெறிமுறை EMB-ஐ தேர்ந்தெடுக்கும் மற்றும் வேறுபடுத்தும் ஊடகமாக விவரிக்கிறது; இதில் சாய ஜோடி பல Gram positive உயிரிகளைத் தடுக்கிறது, அதே நேரத்தில் lactose புளிப்பாக்கம் சாய உறிஞ்சலையும் precipitation-ஐயும் தூண்டுகிறது. ஒரு நிலையான Levine formulation-ல் peptone, lactose, phosphate, eosin Y, methylene blue மற்றும் agar உள்ளன; அவை Levine EMB agar-க்கான FDA BAM முறையில் பட்டியலிடப்பட்டுள்ளன. பழைய EMB செய்முறைகளில் சில நேரங்களில் lactose உடன் sucrose-மும் சேர்க்கப்பட்டிருந்தது; Levine EMB-ல் lactose உள்ளது, ஆனால் sucrose இல்லை. எனவே உங்கள் ஆய்வகத்தில் இருப்பில் உள்ள formulation எது என்பதைப் பதிவு செய்யுங்கள்.
EMB-ஐ வாசிப்பது என்பது சாயத்தின் நடத்தையை வாசிப்பதாகும். தீவிரமான lactose புளிப்பாக்கம் அதிக அளவு அமிலத்தை உருவாக்கி, அதிகமான சாய precipitation-ஐத் தூண்டுகிறது. இதனால் E. coli-க்கு கருநீலம்-கருப்பு மையங்கள் உருவாகின்றன; பாரம்பரிய நிலையில், பிரதிபலிப்பு ஒளியில் உலோகப் பச்சை ஒளிர்வும் தோன்றும். Enterobacter மற்றும் Klebsiella போன்ற பலவீனமான புளிப்பாக்கிகள் பொதுவாக அந்த ஒளிர்வு இல்லாமல் இளஞ்சிவப்பு முதல் ஊதா நிறம் வரையிலான mucoid காலனிகளாக வளர்கின்றன. Salmonella, Shigella மற்றும் Proteus போன்ற புளிக்கவைக்காத உயிரிகள், சாயங்களை precipitate செய்யத் தேவையான திடீர் அமில உற்பத்தி இல்லாததால், பொதுவாக நிறமற்ற அல்லது ஒளி ஊடுருவும் காலனிகளாக வளர்கின்றன. Gram positive உயிரிகள் பொதுவாகத் தடுக்கப்படுகின்றன; இருப்பினும் தடுப்பின் அளவு strain மற்றும் தயாரிப்புக்கு ஏற்ப மாறும். முதலில் methylene blue ஏன் cationic stain ஆக நடக்கிறது என்பதையும் உள்ளடக்கிய முழுமையான சாயத் தயாரிப்பு வேதியியல், சாய formulation-களைப் பற்றிய தனி விவாதத்துக்குரியது; பொதுவான microscopy சூழலை staining முறைகள் atlas-ல் காணலாம். இந்தக் கட்டுரை தட்டு தேர்வு மற்றும் வாசிப்பில் மட்டும் கவனம் செலுத்துகிறது.
மேலுள்ள படம் விளக்க நோக்கத்திற்கானது. எதிர்பார்க்க வேண்டிய காட்சிசார் தர்க்கத்தை அது காட்டுகிறது: EMB-ல் கருமையான ஒளிரும் காலனிகள், இளஞ்சிவப்பு mucoid வகைகள் மற்றும் வெளிர் வகைகள்; MacConkey-ல் இளஞ்சிவப்பு மற்றும் வெளிர் வகைகள். வடிவத்தை கற்றுக்கொள்ள இதைப் பயன்படுத்துங்கள்; பின்னர் ஒவ்வொரு முடிவையும் photographed controls மற்றும் உங்கள் bench-ல் உள்ள துல்லியமான ஊடகத்திற்கான product insert-உடன் ஒப்பிட்டு உறுதிப்படுத்துங்கள்.
MacConkey: பிரிக்கப்பட்ட பணிகள், எளிய காட்சிசார் விதி
MacConkey கருத்தமைப்பு ஒவ்வொரு பணியையும் தனித்தனி மூலப்பொருளுக்கு ஒதுக்குகிறது. ASM MacConkey agar நெறிமுறை இதையே தேர்ந்தெடுக்கும் மற்றும் வேறுபடுத்தும் அமைப்பாக விளக்குகிறது; MacConkey agar-க்கான FDA BAM முறை செயல்படும் கூறுகளாக peptones, lactose, bile salts, salt, neutral red, crystal violet மற்றும் agar ஆகியவற்றைப் பட்டியலிடுகிறது. Bile salts மற்றும் crystal violet இணைந்து Gram positive உயிரிகளுக்கு எதிராகத் தேர்வு செய்கின்றன. Lactose புளிப்பாக்க substrate-ஐ வழங்குகிறது. Neutral red pH reporter ஆகச் செயல்பட்டு, அமிலம் உருவாகும் இடங்களில் இளஞ்சிவப்பு முதல் சிவப்பு நிறம் வரை மாற்றுகிறது; அதிகமாகப் புளிக்கவைக்கும் உயிரிகளைச் சுற்றி சில நேரங்களில் precipitated bile காணப்படலாம்.
வாசிப்பு விதி திட்டமிட்டே எளிமையானது: இளஞ்சிவப்பு என்றால் lactose புளிப்பாக்கி; நிறமற்றது அல்லது வெளிர் என்றால் புளிக்கவைக்காத உயிரி. E. coli இளஞ்சிவப்பு முதல் சிவப்பு வரை தோன்றுகிறது; பல நேரங்களில் bile precipitate halo-வும் இருக்கும். Klebsiella மற்றும் Enterobacter அவற்றின் capsules காரணமாக இளஞ்சிவப்பாகவும் அடிக்கடி mucoid தன்மையுடனும் தோன்றுகின்றன. Salmonella, Shigella, Proteus மற்றும் பல பிற Gram negative rods நிறமற்றதாகத் தோன்றுகின்றன. கற்பித்தல் ஆய்வகங்களில் ஒரு கூடுதல் நன்மையும் உள்ளது: bile salts பொதுவாக Proteus swarming-ஐக் குறைக்கின்றன. எனவே nonselective media-வுடன் ஒப்பிடும்போது MacConkey-ல் தனித்தனி காலனிகளைப் பெறுவது எளிது. இருப்பினும் இந்தத் தடுப்பு முழுமையானது அல்ல; swarming கட்டுப்பாடே முதன்மை என்றால் salt free மாற்றுகளும் உள்ளன.
சாயங்கள் இவ்வாறு நடப்பதற்கான மூலக்கூறு காரணம் charge மற்றும் structure-இல் உள்ளது. Methylene blue என்பது cationic phenothiazine dye; அதன் அமைப்பும் பண்புகளும் அமிலத் தன்மை கொண்ட பாக்டீரியா மேற்பரப்புகளுக்கான அதன் affinity-ஐ விளக்குகின்றன. EMB-ல் அமில மண்டலங்களில் அது precipitate ஆகும்போதும் இதே affinity செயல்படுகிறது.
ஒரே பார்வையில் ஒப்பீடு
| அம்சம் | EMB agar | MacConkey agar |
|---|---|---|
| தேர்ந்தெடுக்கும் அமைப்பு | Eosin Y மற்றும் methylene blue | Bile salts மற்றும் crystal violet |
| வேறுபடுத்தும் substrate | Lactose (Levine-ல் sucrose இல்லை) | Lactose |
| Indicator | சாய precipitation தானே (கருமையான காலனிகள், பச்சை ஒளிர்வு) | Neutral red (இளஞ்சிவப்பு முதல் சிவப்பு வரை அமில காலனிகள்) |
| வலுவான E. coli signal | கருநீலம்-கருப்பு காலனி, பெரும்பாலும் உலோகப் பச்சை ஒளிர்வு | இளஞ்சிவப்பு முதல் சிவப்பு காலனி, பெரும்பாலும் bile precipitate |
| Klebsiella மற்றும் Enterobacter | இளஞ்சிவப்பு முதல் ஊதா வரை, mucoid, பொதுவாக ஒளிர்வு இல்லை | இளஞ்சிவப்பு முதல் சிவப்பு வரை, பெரும்பாலும் mucoid |
| Salmonella, Shigella, Proteus | பொதுவாக நிறமற்றது அல்லது ஒளி ஊடுருவுவது | பொதுவாக நிறமற்றது அல்லது வெளிர் |
| Gram positives | பொதுவாகத் தடுக்கப்படுகின்றன | crystal violet formulation-களில் பொதுவாகத் தடுக்கப்படுகின்றன |
| கற்பித்தலுக்கான சிறந்த பயன் | வலுவான மற்றும் பலவீனமான புளிப்பாக்கத்தை காட்சிப்படுத்துகிறது | புளிப்பாக்கி மற்றும் புளிக்கவைக்காத உயிரி என்ற மிக எளிய பிரிப்பு |
இந்த அட்டவணையை ஒரு முடிவு எடுக்கும் செயல்முறையாக வாசியுங்கள். ஒரே கண்கவர் endpoint-உடன் புளிப்பாக்கத்தின் வலிமை படிநிலையாக மாறுவதை மாணவர்கள் பார்க்க வேண்டிய பயிற்சிக்கு EMB அதைத் தெளிவாகக் காட்டுகிறது. உயிர்வேதியியல் உறுதிப்படுத்தலுக்கு முன் வேகமான இரு-வகைப் பிரிப்பு தேவைப்படும் பயிற்சிக்கு MacConkey அதைத் தெளிவாகக் காட்டுகிறது.
எந்த மாதிரிக்கு எந்த ஊடகம்
Presumptive fecal coliform அல்லது E. coli அடையாளத்தை நோக்கமாகக் கொண்ட நீர் பயிற்சிகளுக்கு EMB கவர்ச்சிகரமானது; அதன் ஒளிர்வு காட்சிசார் வகையில் தனித்துவமானது. MacConkey-யும் enteric Gram negative உயிரிகளை கையாளக்கூடியது மற்றும் நீர் பரிசோதனையில் வரலாற்றுப் பயன்பாடும் உள்ளது. ஆனால் எந்தத் தட்டும் regulatory water method-க்கு மாற்றாகாது; பரிசோதனைக்கு ஏற்ப modified mTEC அல்லது MI போன்ற குறிப்பிட்ட ஊடகங்கள் கட்டாயமாக இருக்கலாம். உங்கள் ஆய்வகம் பின்பற்ற வேண்டிய முறையைச் சரிபாருங்கள்.
புளிப்பாக்கிகளை புளிக்கவைக்காத உயிரிகளிலிருந்து பிரிக்கும் stool-style பணிகளுக்கு, இந்த இரண்டில் MacConkey பொதுவாக அதிகப் பயனுள்ளது. Salmonella அல்லது Shigella-க்கான நடைமுறை stool பணிகளில் MacConkey மட்டும் சார்ந்து இருக்காமல், XLD அல்லது Hektoen enteric போன்ற அதிகத் தேர்ந்தெடுக்கும் enteric media பொதுவாக கூடுதலாகப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன.
Clinical workflow-ஐப் பின்பற்றும் urine-style கற்பித்தலுக்கு MacConkey-ஐ blood agar-உடன் இணைக்கவும். MacConkey ஆரம்ப கட்ட Gram negative பிரிப்பை வழங்குகிறது; MacConkey தடுக்கக்கூடிய உயிரிகளை blood agar மீட்டெடுக்கிறது. Urine culture setup-இன் clinical விளக்கங்களில் இந்த இணைப்பு வழக்கமானது.
கருத்தை மட்டும் கற்பிக்க வேண்டுமெனில், இரண்டையும் பயன்படுத்துங்கள். புளிப்பாக்கத்தின் வலிமை முக்கியமானது என்றும் ஒரே மூலக்கூறு இரண்டு பணிகளைச் செய்ய முடியும் என்றும் EMB கற்பிக்கிறது. Selector, substrate மற்றும் reporter ஆகியவற்றை தனித்தனியாக வைத்திருக்கும் modular design-ஐ MacConkey கற்பிக்கிறது. தெரிந்த E. coli, தெரிந்த Klebsiella aerogenes மற்றும் தெரிந்த Salmonella ஆகியவற்றை இரண்டு ஊடகங்களிலும் பக்கப்பக்கமாக streak செய்யும் மாணவர்கள் இந்த இரண்டு தர்க்கங்களையும் மீண்டும் குழப்புவது அரிது.
ஒவ்வொரு term-இலும் மீண்டும் தோன்றும் வாசிப்பு பிழைகள்
மிகவும் பொதுவான பிழை நிறத்தை மட்டும் கொண்டு அடையாளம் காண்பதாகும். MacConkey-ல் இளஞ்சிவப்பு என்பது E. coli, Klebsiella, Enterobacter அல்லது வேறு புளிப்பாக்கியாக இருக்கலாம். நிறமற்றது என்பது Salmonella, Shigella, Proteus, Pseudomonas அல்லது வேறு புளிக்கவைக்காத உயிரியாக இருக்கலாம். நிறம் என்பது Gram stain, oxidase, biochemical panels அல்லது instrument identification போன்ற உறுதிப்படுத்தும் பணிகளுக்கு வழிகாட்டும் screening phenotype மட்டுமே; அது species பெயர் அல்ல.
இரண்டாவது பிழை, ஒளிர்வு இல்லாததை அளவுக்கு மீறி பொருள் கொள்ளுவதாகும். உண்மையான சில E. coli காலனிகள், குறிப்பாக தனியாகப் பிரிக்கப்பட்டவை, EMB-ல் மிகக் குறைந்த அல்லது எந்த உலோக ஒளிர்வும் இல்லாமல் இருக்கலாம். ஒளிர்வு இல்லாதது E. coli-யை நிராகரிக்காது; ஒளிர்வு இருப்பதும் அதை நிரூபிக்காது. ஒளிர்வை presumptive clue ஆக மட்டும் கருதுங்கள்.
மூன்றாவது பிழை வெவ்வேறு வயதுடைய தட்டுகளை ஒப்பிடுவதாகும். தாமதமாக lactose-ஐ புளிக்கவைக்கும் உயிரிகள் நீண்ட incubation-க்கு பிறகு MacConkey-ல் இளஞ்சிவப்பாக மாறக்கூடும்; இதனால் புளிப்பாக்கி மற்றும் புளிக்கவைக்காத உயிரி இடையிலான தெளிவான பிரிப்பு மங்கிவிடும். ஆய்வகம் குறிப்பிட்ட நேரத்தில் வாசித்து, incubation நேரத்தை முடிவுடன் பதிவு செய்யுங்கள்.
நான்காவது பிழை கலந்த வளர்ச்சியை ஒரே உயிரியாக வாசிப்பதாகும். நிறமற்ற காலனியின் அருகில் உள்ள ஒரு இளஞ்சிவப்பு காலனி இரண்டு phenotype-களைப் பதிவு செய்கிறது; இடைநிலை ஒன்றை அல்ல. நன்றாகத் தனித்துள்ள காலனிகளைத் தேர்ந்தெடுத்து, ஒவ்வொரு morphotype-ஐயும் தனித்தனியாகப் பரிசோதியுங்கள். Mucoid texture இதேபோன்ற சிக்கலை உருவாக்குகிறது: Klebsiella மற்றும் Enterobacter இரண்டும் mucoid போலத் தோன்றலாம்; எனவே capsule மட்டும் பெயரைத் தீர்மானிக்காது. முன்பு Enterobacter aerogenes என கற்பிக்கப்பட்ட உயிரி இப்போது Klebsiella aerogenes என வகைப்படுத்தப்படுகிறது; இதுவே பழைய charts மற்றும் புதிய labels ஒன்றுக்கொன்று முரண்படுவது போலத் தோன்றுவதற்குக் காரணம்.
Controls மற்றும் இறுதி விதி
ஒவ்வொரு session-இலும் photographed அல்லது fresh controls-ஐ இயக்குங்கள்: வலுவான புளிப்பாக்க எதிர்வினைக்கு E. coli, பாரம்பரிய ஒளிர்வு இல்லாத mucoid புளிப்பாக்கத்திற்கு Klebsiella aerogenes, நிறமற்ற புளிக்கவைக்காத எதிர்வினைக்கு ஒரு Salmonella strain, மற்றும் உங்கள் துல்லியமான தயாரிப்பில் Gram positive suppression-ஐ உறுதிப்படுத்த Staphylococcus aureus. Strain numbers மற்றும் acceptance criteria-ஐ manufacturer insert-உடன் பொருத்துங்கள்; bile, crystal violet மற்றும் dye content மாறும்போது selectivity-யும் மாறும்.
Bench-ல் ஒரு வாக்கியத்தை நினைவில் கொள்ளுங்கள். EMB-ல் சாயங்கள் தேர்ந்தெடுப்பதையும் அறிக்கையிடுவதையும் ஒரே நேரத்தில் செய்கின்றன; இதனால் கண்கவர் E. coli signal கிடைக்கிறது, ஆனால் வாசிப்பு சற்றே நுணுக்கமாகிறது. MacConkey தேர்ந்தெடுக்கும் பணியையும் அறிக்கையிடும் பணியையும் பிரிக்கிறது; இதனால் தெளிவான இளஞ்சிவப்பு மற்றும் வெளிர் பிரிப்பு கிடைக்கிறது, ஆனால் புளிப்பாக்கத்தைப் பற்றிய விவரம் குறைகிறது. கேள்வியின் கருத்துடன் பொருந்தும் ஊடகத்தைத் தேர்ந்தெடுத்து, நிற முடிவை முறையான பரிசோதனைகளால் உறுதிப்படுத்துங்கள்; அப்போது இந்த இரண்டு தட்டுகளும் போட்டியிடாமல் ஒன்றுக்கொன்று துணையாகச் செயல்படும்.