مقاله
د میتیلین آبي د جذب طیف او مولري جذب وړتیا: د شرایطو په نښه شوی ماخذ
د میتیلین آبي طیف تر هغه ساده ښکاري چې له هغه څخه د یوې شمېرې د بیا کارولو هڅه وکړئ. یو لابراتوار د مولري نوري کمېدو ضریب نږدې 82,000 راپوروي. بل یې 67,000 راپوروي. درېیم یې له 100,000 څخه لوړ راپوروي. درې واړه د خپلو اندازهګیرو سم بیانونه کېدای شي، خو هېڅ یو د دې رنګ لپاره یو نړیوال ثابت نه دی.
ګډوډي د دوو جلا مفاهیمو له ګډولو رامنځته کېږي. جذبیت هغه اندازه ده چې په یوه ټاکلي محلول او یوه ټاکلي حجره کې اخیستل کېږي. مولري جذب وړتیا، چې ډېری وخت د اپسیلون په نوم لیکل کېږي، د هماغه محلول په ماډل کې یو پارامتر دی. کله چې د میتیلین آبي د مالیکولونو د یوځای کېدو حالت بدلېږي، ماډل هم بدلېږي، نو پارامتر هم ورسره بدلېږي. ګټور عادت دا دی چې هر ضریب د شرایطو په نښه شوی ارزښت وګڼئ: د څپې اوږدوالی، محلل، pH یا بفر، تودوخه، د غلظت لړۍ او د نوري لارې اوږدوالی باید له شمېرې سره یوځای ثبت شي.
په رقیقو اوبو کې د مونومر بانډ
په رقیق اوبیز محلول کې د میتیلین آبي د کتیون غالب بانډ نږدې په 664 تر 665 nm کې وي؛ د بېلابېلو وسایلو او کالیبراسیون د ټاکنو له مخې عموماً د 664 تر 668 nm په حدودو کې ښودل کېږي. کله چې محلول دومره رقیق وي چې د رنګ ډېره برخه مونومري وي، دا بانډ د کمیتي ټاکنې لپاره سم انتخاب دی.
په علمي ادبیاتو کې درې ارزښتونه ښيي چې ولې شرایط تر اصلي شمېرې مهم دي. د خټې څېړونکو چې اوبیزې نمونې یې په 1 cm حجرو کې تر شاوخوا 7 micromolar لاندې ساتلې، په 665 nm کې د اپسیلون ارزښت شاوخوا 82,000 M-1 cm-1 راپور کړ. دا ارزښت د ډېرو رقیقو اوبیزو نمونو لپاره د تجربوي کالیبراسیون د میلان په توګه په ځانګړي ډول ښه مستند شوی دی. وروسته یوه په بېیونه اوبو کې لومړنۍ کالیبراسیون څېړنه، چې له 2.34 تر 37.52 micromolar غلظت او 1 cm نوري لارې څخه یې کار اخیستی و، په 665 nm کې د ټول رنګ لپاره شاوخوا 67,100 M-1 cm-1 ورکړ. ټیټه پایله د تمې وړ ده، نه متناقضه، ځکه د دې کالیبراسیون د لړۍ پورتنۍ نیمایي لا له وړاندې د ډایمر د پام وړ برخه لري. درېیم ارزښت، په 664 nm کې شاوخوا 73,460 M-1 cm-1، له هغې څېړنې څخه راځي چې په pH 6.86 او 293 K کې یې لیدل شوی طیف په مونومر او ډایمر برخو وېشلی و؛ دا په د میتیلین آبي د نوري فزیک یوه تازه انتقادي بیاکتنه کې لنډیز شوی دی. دا شمېره په محاسبوي بېلولو ترلاسه شوې مونومري برخه ده، نه د ټول رنګ د غلظت پر وړاندې د جذبیت مستقیم میلان.
عملي ټکی دا دی: هغه ضریب غوره کړئ چې شرایط یې ستاسو له نمونو سره سمون لري، یا خپل کالیبراسیون ترسره کړئ. 82,000 د 30 micromolar فاسفېټ بفر ازموینې ته مه لېږدوئ او دا مه انګېرئ چې خطي اړیکه لا هم پر ځای ده.
د لنډې څپې اوږدوالی لرونکې اوږه یو مخلوط دی
د غلظت په لوړېدو سره، د 600 تر 615 nm شاوخوا اوږه د 664 nm څوکې په پرتله غټېږي. اوسنۍ څېړنې معمولاً د H ډوله ډایمر ونډه د 605 تر 610 nm شاوخوا ځای پر ځای کوي. په اوبو کې د میتیلین آبي د طیف سراسري تحلیل د ډایمر اعظمي څوکه په 607 nm او د لوړ درجې تجمع اعظمي څوکه په 600 nm کې بېلوي، او د مونومر د ریزونانس برخې په 664 او 650 nm کې ښيي. بشپړ متن یې د PMID 33251415 د پرانیستي لاسرسي ثبت له لارې شته.
دا اوږه باید د خالص ډایمر د جذبیت په نوم ونه نومول شي. د مونومر ارتعاشي-الکتروني جوړښت هم په همدې سیمه کې ونډه لري، نو اندازه شوی لوړوالی د څو ونډو یوځای کېدل دي. د ټولې لړۍ له معلوماتو سره د ماډل د برابرولو یوې هڅې وموندله چې د مونومر او ډایمر ګډ ماډل د 1.1 micromolar تر 3.4 millimolar په ټوله لړۍ کې ناکام و، خو د ټېټرامر په زیاتولو سره تر ټولو ښه سمون ترلاسه شو، او د ټېټرامر سیګنال لا تر 34 micromolar لاندې هم د موندلو وړ و. له معلوماتو سره د برابرولو په پایله کې د برخو د شدت ارزښتونه لوی وو: په 664 nm کې د مونومر د اصلي برخې لپاره شاوخوا 107,800 M-1 cm-1، په 607 nm کې د ډایمر لپاره شاوخوا 101,400، او په 600 nm کې د ټېټرامر لپاره شاوخوا 138,500؛ دا په بېبفره بېیونه اوبو کې، د سوډیم کلورایډ له 0 تر 0.15 M او د تودوخې له 282 تر 333 K شرایطو لاندې وو. دا د ماډل په مرسته بېلې شوې برخې دي، نو باید د تجربوي بیر–لامبرټ د میلان پر ځای ونه کارول شي.
د ډایمر جوړېدو تمایل په مستقیم ډول کمیتي شوی دی. په pH 6.86 او 293 K کې، یوې څېړنې د ډایمر جوړېدو ثابت نږدې 3,900 M-1 ترلاسه کړ. د دې ارزښت کچه څرګندوي چې ولې د 5 micromolar کاري محلول چلند نږدې خطي وي، خو د 50 micromolar زېرمه محلول داسې نه وي. د میتود د جوړولو پر مهال یوه ګټوره کتنه دا ده چې د 610 nm شاوخوا جذبیت د 665 nm شاوخوا جذبیت سره په نسبت کې پرتله شي. کله چې دا نسبت له غلظت سره لوړېږي، په 664 nm کې اپسیلون نور د یوه نه بدلېدونکي کیمیاوي ډول استازیتوب نه کوي.
د غلظت په هغه واټن کې چې یو پر یو بدلېدونکې جوړه پکې غالبه وي، طیفونه یوه ګډه ایزوسبېسټیک نقطه لرلای شي؛ په اوبیزو لړیو کې دا په تجربوي ډول نږدې په 625 nm کې لیدل شوې ده. یوه څرګنده ثابته نقطه د دوو غالبو کیمیاوي ډولونو له شتون سره سمون لري. کله چې د غلظت په لوړېدو سره دا نقطه خوځېږي یا ورکېږي، دا د لوړو تجمعاتو یا د تعادلونو د بدلېدو د ورګډېدو خبرداری وګڼئ، نه د وسیلې تېروتنه.
محلل، pH او تودوخه طیف بدلوي
اوبه د مالیکولونو یوځای کېدو ته زمینه برابروي. د په اوبو او DMSO مخلوطونو کې د میتیلین آبي د محلل څېړنې له مخې، چې د PMID 30933781 په نوم ثبت شوې، د ډایمیتیل سلفوکسایډ زیاتول د ډایمر جوړېدل کموي، د جذب او فلورېسنس اعظمي څوکې د اوږدې څپې اوږدوالي خوا ته وړي او د فلورېسنس کوانټمي حاصل شاوخوا څلور برابره زیاتوي. دا څېړنه اوبیز طیفونه د مونومر او ډایمر د تعادل په توګه څېړي، چې د مونومر جذبیت یې نږدې په 650 تر 670 nm او د ډایمر جذبیت یې نږدې په 580 تر 615 nm کې دی، او په 293.15 K کې له طیفونو څخه د ډایمر جوړېدو ثابتونه محاسبه کوي.
الکولونه هم موقعیت او هم ظاهري شدت بدلوي، خو تجمع له منځه نه وړي. په یوه لومړنۍ پرتله کې چې په 31.3 micromolar او د خونې په تودوخه کې ترسره شوې او د میتیلین آبي د محلل په یوه څېړنه کې راپور شوې، د اوږدې څپې اوږدوالي اعظمي څوکه په اوبو کې 665 nm، خو په میتانول کې 655 nm وه؛ د ټول محلول ظاهري ارزښتونه په اوبو کې نږدې 37,100 او په میتانول کې 60,800 وو. په 298 K کې په مطلق ایتانول کې یوې جلا اعتبارسنجونې په 655 nm کې اعظمي څوکه او د اپسیلون نږدې 68,000 ارزښت ورکړ.
د pH عادي بدلونونه طیف تر هغه لږ بدلوي چې ډېری کړنلارې یې انګېري. پورته یاده شوې انتقادي بیاکتنه راپوروي چې له شاوخوا pH 2 تر pH 12 پورې اعظمي څوکه نږدې په 665 nm کې پاتې وه، او تر pH 11 پورې یوازې د شدت واړه بدلونونه لیدل کېدل. د بفر ډول او ایوني ځواک پایلې د نومول شوي pH په اندازه بدلولای شي، نو اصلي بفر او مالګه ثبت کړئ، نه یوازې د pH مېټر لوستل شوی ارزښت. قوي اسید یا قوي القلي جلا حالت دی، ځکه رنګ ښايي د بېرته ګرځېدونکي مالیکولي یوځای کېدو پر ځای کیمیاوي بدلون وکړي. تودوخه او مالګه هم تعادل بدلوي؛ له همدې امله د 2020 د اوبو څېړنې دواړه په قصدي ډول بدل کړي وو.
داسې اندازهګیري چې شمېره باوري پاتې شي
کمیتي کار د بیر–لامبرټ پر اړیکه ولاړ دی: جذبیت د اپسیلون، غلظت او د نوري لارې د اوږدوالي له حاصلضرب سره برابر دی. ورسره دا ثبوت هم اړین دی چې خطي واټن واقعاً ستاسو په شرایطو کې پر ځای پاتې کېږي.
په ټیټو micromolar غلظتونو کې د کار لپاره 1 cm حجره وکاروئ. که اپسیلون نږدې 82,000 وي، د 5 micromolar غلظت جذبیت نږدې 0.41 او د 10 micromolar غلظت جذبیت شاوخوا 0.82 کېږي. په ساده اوبو کې د مونومر پر اندازهګیرۍ د تمرکز لپاره، نږدې د 5 تر 7 micromolar په کچه یا تر هغې لاندې پاتې کېدل د لسګونو micromolar تر لوړو کچو د کالیبراسیون غځولو په پرتله خوندي دي. د غلیظو زېرمه محلولونو لپاره، د دې پر ځای چې له 1 څخه ډېر لوړ جذبیت ومنئ، نوري لاره لنډه کړئ.
د بلانک لپاره عین ماتریکس وکاروئ: د اوبو هماغه درجه، د ګډ محلل هماغه کسر، هماغه بفر او مالګې، خو له رنګ پرته. د کالیبراسیون محلولونه په همدې ماتریکس او همدې تودوخه کې چمتو کړئ. د میتود د جوړولو پر مهال د یوې څپې اوږدوالي د لوستلو پر ځای، د لید وړ رڼا ټوله لړۍ، په غوره توګه شاوخوا 550 تر 750 nm، سکن کړئ. یوازې لوړوالی نه، بلکې بڼه هم وڅارئ. که پرلهپسې رقیق کول نرماله شوې بڼه بدلوي، سیستم له کیمیاوي پلوه په غلظت پورې تړلی دی. ثابته اعظمي څوکه او د 610 تر 665 nm ثابت نسبت، یوازې د R مربع د لوړ ارزښت په پرتله د منلو وړ لړۍ لپاره پیاوړي شواهد دي.
د ریجنټ بڼه ثبت کړئ. سوداګریز مواد ښايي بېاوبه میتیلتیونینیم کلورایډ یا یو هایډرېټ، لکه ټرایهایدرېټ، وي؛ نو د زېرمه محلول په محاسبو کې کارول شوی مولري کتله باید د اصلي بوتل له موادو سره برابره وي. همدا ګام په یوازې ځان د لابراتوارونو ترمنځ د نومول شوو مولري غلظتونو د اختلاف یوه برخه تشریح کوي. ورته دقت هغه مهال هم اړین دی چې پایلې د کمیتي ازموینو په محاسبو کې کارېږي، طیفونه د فورمولېشن د ثبات د کتنو ملاتړ کوي، او د ناخالصیو بڼې د خالصوالي او مشخصاتو بیاکتنې ته اړتیا لري.
د شرایطو په نښه شوی لنډیز
دا جدول د لابراتواري ثبت لپاره د پیل د قالب په توګه وکاروئ، نه د یو د بل پر ځای کارېدونکو ثابتونو د سرچینې په توګه.
| کیمیاوي ډول او د څپې اوږدوالی | شرایط | راپور شوی اپسیلون یا چلند |
|---|---|---|
| مونومر، 665 nm | اوبه، تر شاوخوا 7 micromolar لاندې، 1 cm، pH نه دی راپور شوی | شاوخوا 82,000 M-1 cm-1، د ټول رنګ تجربوي میلان |
| د مونومر برخه، 664 nm | اوبه، pH 6.86، 293 K، له ډایمر څخه په محاسبوي ډول بېله شوې | شاوخوا 73,460 M-1 cm-1، یوازې د مونومر برخه |
| ټول رنګ، 665 nm | بېیونه اوبه، 2.34 تر 37.52 micromolar، 1 cm | شاوخوا 67,100 M-1 cm-1، د یوې لړۍ د کالیبراسیون میلان چې په یوه برخه کې یې تجمع رامنځته کېږي |
| د مونومر ریزونانس، 664 nm | بېبفره بېیونه اوبه، د 1.1 micromolar تر 3.4 millimolar لړۍ، NaCl له 0 تر 0.15 M، له 282 تر 333 K | شاوخوا 107,800 M-1 cm-1، د ماډل په مرسته بېله شوې برخه |
| ډایمر، 607 nm | د پورته لړۍ عین شرایط | شاوخوا 101,400 M-1 cm-1، د ماډل په مرسته بېله شوې برخه |
| ټېټرامر، 600 nm | د پورته لړۍ عین شرایط | شاوخوا 138,500 M-1 cm-1، د ماډل په مرسته بېله شوې برخه |
| ټول رنګ، په اوبو کې 665 nm د میتانول له 655 nm سره په پرتله کې | 31.3 micromolar، د خونې تودوخه | په اوبو کې شاوخوا 37,100، په میتانول کې شاوخوا 60,800، په هماغه غلظت کې ظاهري ارزښتونه |
| د مونومر او ډایمر ترمنځ تعادل | د اوبو او DMSO مخلوطونه، 293.15 K | DMSO ډایمر کموي، اعظمي څوکې د اوږدې څپې اوږدوالي خوا ته ځي، د نوري خپرېدو حاصل لوړېږي |
نو د میتیلین آبي د جذب د څپې اوږدوالی یو لنډ ځواب دی چې اوږده توضیحي یادونه ورسره مل ده. هغه څوکه راپور کړئ چې تاسو اندازه کړې، په هغه محلول کې چې تاسو اندازه کړی، او په هغه غلظت کې چې تاسو اندازه کړی. دا عادت د رقیقو اوبو یو ارزښت چې نږدې په 664 nm کې دی، په یوه ناسم نړیوال ثابت د بدلېدو مخه نیسي.