EMB agar विरुद्ध MacConkey agar: माध्यमांची निवड आणि अर्थ लावणे

एक विद्यार्थी त्याच पाण्याच्या नमुन्याचे दोन प्लेट्सवर स्ट्रिकिंग करतो. एका प्लेटवर हिरव्या धातूसदृश चमक असलेल्या गडद वसाहती दिसतात. दुसऱ्यावर धूसर वलयासह चमकदार गुलाबी वसाहती दिसतात. दोन्ही प्लेट्सना त्याच नळीतील नमुन्याने इनोक्युलेट केले गेले, शेजारीशेजारी इनक्युबेट केले गेले आणि त्याच वेळी वाचले गेले. विद्यार्थी विचारतो की योग्य प्लेट कोणती आहे.

दोन्ही प्लेट्स योग्य आहेत. त्या वेगवेगळ्या प्रश्नांची उत्तरे देतात. गोंधळ तेव्हा निर्माण होतो जेव्हा या दोन माध्यमांकडे आतड्यातील जीवाणू तपासण्यासाठी परस्परविनिमययोग्य स्क्रीन म्हणून पाहिले जाते. त्यांचा उद्देश समान आहे—Gram negative enteric जीवांची निवड करणे आणि lactose fermenters ना nonfermenters पासून वेगळे करणे—पण हा उद्देश साधण्यासाठी त्यांची रासायनिक रचना आणि दृश्य संकेतांची पद्धत वेगळी आहे. या दोन मूलभूत संकल्पना समजल्यानंतर प्लेटची निवड आणि वसाहतींचे वाचन नियमित प्रक्रिया बनते.

थोडक्यात उत्तर

EMB agar मध्ये eosin Y आणि methylene blue ही दोन रंगद्रव्ये असतात आणि ती दोन भूमिका बजावतात: ती Gram positive वाढ दाबतात आणि तीव्र आम्लनिर्मिती करणाऱ्या जीवांभोवती अवक्षेपित होऊन गडद वसाहती तयार करतात; Escherichia coli मध्ये पारंपरिकरीत्या धातूसदृश हिरवी चमक दिसते. MacConkey agar मध्ये या भूमिका स्वतंत्र आहेत: bile salts आणि crystal violet Gram positives दाबतात, lactose किण्वनासाठी सब्स्ट्रेट पुरवते आणि neutral red आम्लनिर्मिती गुलाबी किंवा लाल वसाहतींच्या रूपात दर्शवते. काम E. coli चे ठळक अनुमानाधारित प्रात्यक्षिक करणे असेल, तर EMB उपयुक्त ठरते. काम lactose fermenters आणि nonfermenters यांना स्पष्टपणे गुलाबी विरुद्ध रंगहीन अशा गटांत विभागणे असेल, विशेषतः stool किंवा urine कार्यप्रवाहांमध्ये, तर MacConkey साधारणतः वाचायला सोपे असते. फक्त रंगाच्या आधारावर कोणतीही प्लेट एखाद्या जीवाची ओळख निश्चित करत नाही.

EMB: एकाच वेळी निवड आणि संकेत देणारी रंगद्रव्ये

EMB ची संकल्पना निवड आणि संकेत या दोन्ही भूमिका त्याच रेणूंमध्ये एकत्र करते. ASM eosin methylene blue agar प्रोटोकॉल EMB ला निवडक आणि विभेदक असे दोन्ही माध्यम म्हणून वर्णन करतो; रंगद्रव्यांची ही जोडी अनेक Gram positive जीवांना दाबते, तर lactose fermentation मुळे रंगद्रव्यांचे ग्रहण आणि अवक्षेपण वाढते. मानक Levine formulation मध्ये peptone, lactose, phosphate, eosin Y, methylene blue आणि agar असतात, जसे Levine EMB agar साठी FDA BAM पद्धतीत नमूद केले आहे. जुन्या EMB सूत्रांमध्ये कधीकधी lactose बरोबर sucrose देखील घातले जात असे, तर Levine EMB मध्ये lactose असते पण sucrose नसते; त्यामुळे तुमच्या प्रयोगशाळेत कोणते formulation वापरले जाते ते नोंदवा.

EMB वाचणे म्हणजे रंगद्रव्यांच्या वर्तनाचे निरीक्षण करणे. जोरदार lactose fermentation मुळे इतके आम्ल तयार होते की मोठ्या प्रमाणात रंगद्रव्य अवक्षेपित होते; त्यामुळे E. coli मध्ये गडद निळसर-काळे केंद्र दिसते आणि पारंपरिक परिस्थितीत परावर्तित प्रकाशात धातूसदृश हिरवी चमक दिसते. Enterobacter आणि Klebsiella सारखे तुलनेने कमकुवत fermenters साधारणतः चमक नसलेल्या गुलाबी ते जांभळ्या, mucoid वसाहती तयार करतात. Salmonella, Shigella आणि Proteus सारखे nonfermenters साधारणतः रंगहीन किंवा अर्धपारदर्शक वसाहती तयार करतात, कारण रंगद्रव्य अवक्षेपित करण्याइतका आम्लाचा तीव्र झटका ते निर्माण करत नाहीत. Gram positives साधारणतः दाबले जातात, परंतु दमनाची तीव्रता strain आणि उत्पादनानुसार बदलते. methylene blue सुरुवातीपासूनच cationic stain म्हणून का वागते यासह रंगद्रव्यांच्या तयारीचे सविस्तर रसायनशास्त्र हे dye formulations वरील स्वतंत्र चर्चेचा विषय आहे, आणि सूक्ष्मदर्शकाच्या व्यापक संदर्भासाठी staining methods atlas पहा. हा लेख प्लेटची निवड आणि वाचन यापुरताच मर्यादित आहे.

वरील आकृती उदाहरणात्मक आहे. ती अपेक्षित दृश्य तर्क दाखवते: EMB वर गडद चमकदार वसाहती, गुलाबी mucoid प्रकार आणि फिकट प्रकार; त्याच्या तुलनेत MacConkey वर गुलाबी विरुद्ध फिकट प्रकार. नमुना शिकण्यासाठी ती वापरा, नंतर प्रत्येक निष्कर्षाची खात्री छायाचित्रित controls आणि तुमच्या कार्यपटलावरील अचूक माध्यमाच्या product insert शी तुलना करून करा.

MacConkey: स्वतंत्र भूमिका, अधिक सोपा दृश्य नियम

MacConkey ची संकल्पना प्रत्येक काम स्वतंत्र घटकाला देते. ASM MacConkey agar प्रोटोकॉल हेच निवडक आणि विभेदक स्वरूप मांडतो, आणि MacConkey agar साठी FDA BAM पद्धत कार्यरत घटकांची यादी देते: peptones, lactose, bile salts, salt, neutral red, crystal violet आणि agar. Bile salts आणि crystal violet मिळून Gram positives विरुद्ध निवड करतात. Lactose किण्वनासाठी सब्स्ट्रेट पुरवते. Neutral red pH निर्देशक म्हणून काम करते आणि जिथे आम्ल तयार होते तिथे गुलाबी ते लाल रंग दाखवते; तीव्र fermenters भोवती कधीकधी bile चा अवक्षेपही दिसतो.

वाचनाचा नियम मुद्दाम साधा ठेवलेला आहे: गुलाबी म्हणजे lactose fermenter, तर रंगहीन किंवा फिकट म्हणजे nonfermenter. E. coli गुलाबी ते लाल दिसते आणि अनेकदा bile precipitate चे वलय दिसते. Klebsiella आणि Enterobacter गुलाबी दिसतात आणि त्यांच्या capsules मुळे अनेकदा mucoid असतात. Salmonella, Shigella, Proteus आणि इतर अनेक Gram negative rods रंगहीन दिसतात. अध्यापन प्रयोगशाळांसाठी एक अतिरिक्त फायदा आहे: bile salts साधारणतः Proteus चे swarming कमी करतात, त्यामुळे nonselective media च्या तुलनेत MacConkey वर स्वतंत्र वसाहती मिळवणे सोपे होते; मात्र हे दमन पूर्णपणे निश्चित नसते आणि swarming नियंत्रण हे मुख्य उद्दिष्ट असेल तर salt free पर्याय उपलब्ध असतात.

ही रंगद्रव्ये अशा प्रकारे का वागतात यामागील आण्विक कारण charge आणि structure शी संबंधित आहे. Methylene blue हे cationic phenothiazine dye आहे आणि त्याची रचना आणि गुणधर्म आम्लीय bacterial surfaces बद्दलची त्याची affinity स्पष्ट करतात; हीच affinity EMB वरील आम्लीय भागांमध्ये ते अवक्षेपित होताना कार्यरत असते.

एका नजरेत तुलना

ही तक्ता निर्णय प्रक्रियेसारखी वाचा. विद्यार्थ्यांना किण्वनाच्या तीव्रतेतील क्रमिक फरक आणि त्याचा एक ठळक अंतिम परिणाम पाहायचा असेल, तर EMB ते स्पष्ट दाखवते. जैवरासायनिक पुष्टीकरणापूर्वी जलद द्विभागीय वर्गीकरण हवे असेल, तर MacConkey ते दाखवते.

कोणत्या नमुन्यासाठी कोणते माध्यम

पाण्याच्या अशा प्रयोगांसाठी ज्यांचा उद्देश fecal coliform किंवा E. coli ची अनुमानाधारित ओळख करणे आहे, EMB आकर्षक पर्याय आहे कारण त्याची चमक दृश्यदृष्ट्या वेगळी दिसते. MacConkey देखील enteric Gram negatives हाताळते आणि पाणी परीक्षणात त्याचा ऐतिहासिक वापर आहे, परंतु कोणतीही प्लेट नियामक water method ची जागा घेत नाही; चाचणीनुसार अशा पद्धती modified mTEC किंवा MI सारखी माध्यमे निर्दिष्ट करू शकतात. तुमच्या प्रयोगशाळेला जी पद्धत अनुसरणे आवश्यक आहे ती तपासा.

fermenters ना nonfermenters पासून वेगळे करण्याच्या stool प्रकारच्या कामासाठी, या दोघांपैकी MacConkey साधारणतः अधिक उपयुक्त असते. Salmonella किंवा Shigella साठी प्रत्यक्ष stool कार्यात फक्त MacConkey वर अवलंबून न राहता XLD किंवा Hektoen enteric सारखी अधिक निवडक enteric media सहसा जोडली जातात.

clinical workflow चे अनुकरण करणाऱ्या urine प्रकारच्या अध्यापनासाठी MacConkey सोबत blood agar वापरा. MacConkey सुरुवातीचे Gram negative वर्गीकरण देते, तर blood agar हे MacConkey ज्यांना दाबते असे जीवही वाढवते. urine culture setup च्या clinical वर्णनांमध्ये ही जोडी मानक स्वरूपात आढळते.

शुद्ध संकल्पनात्मक अध्यापनासाठी दोन्ही वापरा. EMB हे शिकवते की किण्वनाची तीव्रता महत्त्वाची आहे आणि एकच molecule दोन भूमिका बजावू शकतो. MacConkey modular design शिकवते: selector, substrate आणि reporter वेगळे ठेवलेले असतात. दोन्ही माध्यमांवर ज्ञात E. coli, ज्ञात Klebsiella aerogenes आणि ज्ञात Salmonella शेजारीशेजारी streak करणारे विद्यार्थी या दोन तर्कांमध्ये पुन्हा गोंधळ करण्याची शक्यता कमी असते.

प्रत्येक सत्रात पुन्हा दिसणाऱ्या वाचनातील चुका

सर्वात सामान्य चूक म्हणजे फक्त रंगावरून ओळख निश्चित करणे. MacConkey वरील गुलाबी वसाहत E. coli, Klebsiella, Enterobacter किंवा दुसरा fermenter असू शकतो. रंगहीन वसाहत Salmonella, Shigella, Proteus, Pseudomonas किंवा दुसरा nonfermenter असू शकतो. रंग हा screening phenotype आहे जो Gram stain, oxidase, biochemical panels किंवा instrument identification सारख्या पुष्टीकरणाच्या पुढील प्रक्रियेला दिशा देतो; तो species चे नाव नाही.

दुसरी चूक म्हणजे चमक नसल्याचा अति अर्थ लावणे. काही वास्तविक E. coli वसाहती, विशेषतः स्वतंत्र वसाहती, EMB वर फार कमी किंवा अजिबात धातूसदृश चमक दाखवत नाहीत. चमक नसणे E. coli नाकारत नाही आणि चमक असणेही त्याची निश्चित ओळख सिद्ध करत नाही. चमकेकडे अनुमानाधारित संकेत म्हणून पाहा.

तिसरी चूक म्हणजे वेगवेगळ्या वयाच्या प्लेट्सची तुलना करणे. उशिरा lactose fermentation करणारे जीव दीर्घ incubation नंतर MacConkey वर गुलाबी होऊ शकतात, त्यामुळे fermenter विरुद्ध nonfermenter हे स्पष्ट विभाजन धूसर होते. प्रयोगशाळेने निर्दिष्ट केलेल्या वेळी वाचा आणि निकालासह incubation time नोंदवा.

चौथी चूक म्हणजे मिश्र वाढीला एकच जीव समजणे. रंगहीन वसाहतीच्या शेजारी असलेली गुलाबी वसाहत दोन phenotypes दर्शवते, मधला प्रकार नाही. चांगल्या प्रकारे वेगळ्या झालेल्या वसाहती निवडा आणि प्रत्येक morphotype वर स्वतंत्रपणे काम करा. Mucoid texture मुळेही अशीच चूक होऊ शकते: Klebsiella आणि Enterobacter दोन्ही mucoid दिसू शकतात, त्यामुळे फक्त capsule वरून नाव निश्चित करता येत नाही. पूर्वी Enterobacter aerogenes म्हणून शिकवला जाणारा जीव आता Klebsiella aerogenes म्हणून वर्गीकृत केला जातो; त्यामुळे जुन्या charts आणि नवीन labels मध्ये विसंगती का दिसते हे स्पष्ट होते.

Controls आणि शेवटचा नियम

प्रत्येक सत्रात छायाचित्रित किंवा ताजे controls वापरा: तीव्र fermenter reaction साठी E. coli, पारंपरिक चमक नसलेल्या mucoid fermentation साठी Klebsiella aerogenes, रंगहीन nonfermenter reaction साठी Salmonella strain आणि तुमच्या अचूक उत्पादनावर Gram positive suppression ची खात्री करण्यासाठी Staphylococcus aureus. strain numbers आणि acceptance criteria हे manufacturer insert शी जुळवा, कारण bile, crystal violet आणि dye content नुसार selectivity बदलते.

कार्यपटलावर एक वाक्य लक्षात ठेवा. EMB अशी रंगद्रव्ये वापरते जी निवडही करतात आणि संकेतही देतात; त्यामुळे E. coli साठी नाट्यमय संकेत मिळतो, पण वाचन अधिक सूक्ष्म होते. MacConkey निवड आणि संकेत या भूमिका वेगळ्या ठेवते; त्यामुळे गुलाबी विरुद्ध फिकट असे स्पष्ट वर्गीकरण मिळते, पण किण्वनाच्या तीव्रतेबद्दल कमी तपशील मिळतो. ज्या प्रश्नासाठी माध्यम वापरायचे आहे त्या प्रश्नाशी त्याची संकल्पना जुळेल असे माध्यम निवडा, योग्य चाचण्यांनी रंगावर आधारित निष्कर्षाची पुष्टी करा आणि मग या दोन प्लेट्स परस्पर स्पर्धक न राहता एकमेकांना पूरक ठरतात.