Metylenblátt og Bartonella: starvsstovufunn og avmarkingar í klinisku próvunum

Ein dyrkingarskál og ein sjúklingur hava eitt orð í felag, smitta, men orðið merkir ikki tað sama í báðum førum. Í skálini er smitta eitt tal av kolonium á agar. Hjá sjúklinginum snýr tað seg um bakteriur inni í kyknum og æðrum, heilivág, sum flytur seg gjøgnum blóð og vevnað, og eina immunskipan, sum ger ein part av arbeiðinum. Verða hesi bæði blandað saman, fer eitt sláandi starvsstovutal at líkjast einari viðgerð. Verða tey hildin sundur, verður sama tal tað, sum tað er: ein grund til at gera næstu royndina.

At halda hesi bæði sundur er alt endamálið við hesi gjøgnumgongd av metylenbláum og Bartonella. Tvær starvsstovukanningar frá sama granskingarbólki royndu metylenblátt móti Bartonella henselae í støðum, har bakteriurnar ikki vuksu. Báðar fráboðaðu sterkan virknað í glasi og plasti. Hvørgin royndi tað á einum menniskja.

Hví granskarar kanna støðufasuna

Flestu kanningar av antibiotika nýta kyknur, sum vaksa. Tann myndilin fangar ikki eitt torførari føri: kyknur, sum eru givnar at býta seg og tola evni, sum drepa vaksandi kyknur av sama slag.

Bartonella kann vera verandi í kroppinum, eisini inni í reyðum blóðkyknum og endotelkyknum. Tí kannaði bólkurin, hvørjir góðkendir heilivágir kunnu drepa B. henselae, eftir at hon er komin í støðufasu. Eitt lágt MIC móti vaksandi kyknum segði ikki frammanundan, um evnið drap kyknur í støðufasu. Rifampin hevði eitt sera lágt MIC, men drap kyknur í støðufasu illa, meðan evni við hægri MIC-virðum drópu tær væl. Lesarar, sum vilja hava ein almennan framferðarhátt til slíkar greinar, finna hann í vegleiðingini til at lesa gransking um metylenblátt.

Fyrsta sáldingin: Li og starvsfelagar, 2019

Sáldingin av støðufasukyknum frá 2019 í Antibiotics nýtti ein einstakan stovn, B. henselae JK53, sum varð dyrkaður í Schneider-æti við 10 prosent fosturserumi frá neytum við 37 C og 5 prosent CO2. Ein dag gamlar dyrkingar vóru fyri tað mesta spjaddar kyknur, sum býttu seg. Fimm dagar gamlar dyrkingar, við umleið 10 í 8. potens koloniumyndandi eindum per mL, vórðu roknaðar sum støðufasa og innihildu sjónligar samanrenningar.

Mátingin nýtti SYBR Green I saman við propidiumiodidi og varð kalibrerað við blandingum av livandi kyknum og kyknum, sum vóru dripnar við isopropanoli. Av tí at metylenblátt er sterkt litað, vórðu evni, sum góvu útslag, váttað við mikroskopi og síðan við at telja koloniur á blóðagar, sum var tað strangara endamátið.

Av 1,581 góðkendum heilivágum við 50 mikromolar gav metylenblátt eina eftirverandi lívføri á 16 prosent sambært plátulesara og 25 prosent sambært mikroskopi. Daptomycin gav 21 prosent, fleiri azol 22 til 27 prosent, gentamicin 32 prosent, erythromycin 66 prosent og ciprofloxacin 74 prosent. Pyrviniumpamoat sá út til at virka sterkari í plátulesaranum, men kundi ikki metast við mikroskopi vegna sína egnu fluorescens.

Móti vaksandi B. henselae var MIC fyri metylenblátt 0.08 til 0.16 mikrogramm per mL. Móti fimm dagar gomlum kyknum í støðufasu við 5 mikrogramm per mL fall kolonitalið til ongar ávísiligar koloniur eftir ein dag við ávirkan. Hetta samsvaraði við daptomycin og pyrviniumpamoat við teimum styrkjum, sum vórðu royndar. Ein serstøk roynd av drápi yvir tíð nýtti 10 mikrogramm per mL. Hetta eru styrkir, sum kyknur vórðu útsettar fyri á starvsstovu, ikki skamtar, og greinin lýsir teir soleiðis. Eitt tilvíst virði fyri hægstu plasmastyrk hjá menniskjum, nær 3.9 mikrogramm per mL, kemur bara fram í greinini sum bakgrundarupplýsing. Yvirlitið yvir farmakokinetikkin hjá metylenbláum greiðir frá, hví eitt plasmavirði ikki kann lesast sum eitt virði í vevnaði.

Tvær avmarkingar eru beinleiðis nevndar í greinini. Har var hvørki ein biofilmmyndil ella royndir við metylenbláum saman við øðrum evnum. Tær fimm dagar gomlu samanrenningarnar vóru kyknubólkar í flótandi dyrking í støðufasu, ikki ein staðfest biofilmroynd. Høvundarnir mæltu til kanningar í djórum, kanningar av samansetingum, biofilmkanningar og royndir við øðrum Bartonella-sløgum.

Samansetingar og kyknur úr biofilmi: Zheng og starvsfelagar, 2020

Framhaldskanningin frá 2020 í BMC Microbiology varðveitti sama stovn og æti, men fór yvir til seks dagar gamlar dyrkingar í støðufasu og legði tvey viðurskifti afturat, sum manglaðu í fyrstu greinini: samansetingar av tveimum evnum og ein myndil við kyknum úr biofilmi.

Tá einstøk evni vórðu roynd við somu styrk, 5 mikrogramm per mL, í 24 tímar, lótu royndirnar við metylenbláum 3.2 ferðir 10 í 4. potens koloniumyndandi eindir per mL vera eftir, samanborið við eina kontrollroynd við nær 2.8 ferðir 10 í 10. potens. Ciprofloxacin, gentamicin og nitrofurantoin lótu færri koloniur vera eftir á sama tíðspunkti. Hetta er øðrvísi enn úrslitið frá 2019, har sama tilskilaða styrk gav ongar ávísiligar koloniur eftir ein dag. Aldur, tættleiki og handfaring av dyrkingunum vóru ymisk, so drápið kundi endurtakast við sama ráki, men ikki við sama umfangi. Hesin munurin millum royndir er ein orsøk til, at vanligar kanningar av trygd og sínámillum ávirkan halda virknaðarstyrki á starvsstovu sundur frá kliniskum virknaði.

Sáldingin av samansetingum er tann parturin, sum oftast verður endurgivin. Hvørt evni varð hildið við 5 mikrogramm per mL. Bæði azithromycin saman við metylenbláum og rifampin saman við metylenbláum góvu ongar ávísiligar koloniur úr støðufasu eftir 24 tímar. Tað sama gjørdu báðar samansetingarnar við ciprofloxacin, og bara hesi fýra pørini av 25 royndum pørum góvu hetta úrslitið. Eingin formlig synergigreining varð gjørd, so rætta heitið er ein virkin samanseting undir hesum umstøðum, ikki prógvað synergi.

Biofilmroyndin kannaði kyknur, sum vóru tiknar úr einum ungum biofilmi, ið var brotin sundur, ikki inntrongd í ein heilan, búgvin biofilm. Dyrkingarnar vórðu aldar í fimm dagar, tyntar og fluttar í brunnplátur í fimm dagar afturat, váttaðar við krystalviolettliting og síðan skavaðar av, áðrenn tær vórðu útsettar fyri evnunum. Við 5 mikrogramm per mL fall talið við metylenbláum einsamøllum til 2.3 ferðir 10 í 2. potens á degi 6. Tað var millum bestu úrslitini fyri einstøk evni, men talið var ikki null. Báðar samansetingarnar við metylenbláum komu niður á null á degi 6, eins og báðar samansetingarnar við ciprofloxacin.

Høvundarnir vístu á somu avmarkingar, sum ein nágreiniligur lesari hevði lagt til merkis: ungur, avskavaður biofilm heldur enn gamal, heilur biofilm; ein felags styrk, sum var hent at nýta fyri øll evnini, í staðin fyri hægstu realistisku styrk hjá hvørjum einstøkum evni; bara útvald pør við azithromycin ella rifampin sum grundarlag; ein stovnur; eingi djór; eingir sjúklingar. Seinni kanningar við trimum evnum vórðu skotnar upp, men eingi úrslit frá slíkum kanningum vórðu fráboðað.

Samanbering av kanningarsniðum

Talvan lýsir kjarnuna í hesi grein í stuttum. Alt vinstrumegin seinasta teig er dyrkingararbeiði. Einki í nakrari av greinunum hoyrir heima í seinasta teigi.

Bartonella er ikki Borrelia

Báðar greinarnar nevna Borrelia burgdorferi, spiroketuna, sum elvir til Lyme-sjúku, tí litingarmátingin kom frá eldri kanningum av Borrelia í støðufasu á somu starvsstovu. Har høvdu metylenblátt og daptomycin eisini givið útslag sum virkin evni. Henda søgan er gagnlig bakgrund, men eisini ein vanlig kelda til mistøk.

Eingin roynd í nakrari av Bartonella-greinunum kannar Borrelia og Bartonella lið um lið. Organismurnar eru ymiskar, ætini eru ymisk, styrkirnar eru ymiskar, og tann hugsanin, at metylenblátt ávirkar himnuna hjá Bartonella, varð lýst sum ein gitnaður, ið kravdi fleiri kanningar. Úrslit eiga ikki at verða flutt millum sløg, og hvørgin grein stuðlar víðfevndum pástandum um snúltarar. Av hesi orsøk heldur samanberingin av áhaldandi Borrelia- og Bartonella-kyknum tær báðar granskingarbókmentirnar sundur.

Hví dyrkingar ikki kunnu gerast til eina viðgerðarætlan

Áhugin fyri at leita eftir einari viðgerðarætlan við metylenbláum móti Bartonella er skiljandi. Hesar greinar eru orsøkin til, at orðingin eigur at verða tikin sum eitt ávaringartekin heldur enn ein innkeypslisti.

Fyri tað fyrsta eru 5 mikrogramm per mL í einum brunni ikki ein ávísing av heilivági. Tað talið sigur einki um upptøku, býti í kroppinum, proteinbinding, inntrongd í kyknur ella, hvussu væl evnið verður tolt. Høvundarnir valdu tað sum eitt leyst miðaltal av hægstu styrkjum hjá antibiotikum og søgdu, at framtíðarkanningar áttu at nýta realistisku styrkina hjá hvørjum einstøkum evni.

Fyri tað næsta merkir null koloniur, at ongar koloniur vóru undir teimum givnu dyrkingartreytunum á plátunum, ikki at vevnaður er sterilur. Áhaldandi kyknur, bakteriur inni í kyknum og avmarkingar í sýnistøkuni liggja øll uttan fyri tað, sum agarplátan vísir.

Fyri tað triðja kunnu samansetingar, sum sterilisera ein brunn, svíkja ella elva til skaða í einum kroppi. Azithromycin saman við metylenbláum og rifampin saman við metylenbláum eru starvsstovupør við styrkjum, sum eru royndar á starvsstovu. Uttan farmakokinetiskar kanningar í djórum og kontrolleraðar dátur frá menniskjum er eingin skamtur, eingin tíðarlongd og einki lutfall millum gagn og váða ásett. Tey, sum meta um møguleikar, eiga at tosa við ein lækna og lesa um, nær nýtsla av metylenbláum krevur læknaligt eftirlit, áðrenn tey draga nakra niðurstøðu úr dátum frá dyrkingarskálum.

Avmarkaða niðurstøðan, sum hesar greinar veruliga stuðla, er henda: metylenblátt hevur endurtakiligan virknað móti B. henselae JK53, sum ikki veksur, in vitro, eisini í starvsstovusamansetingum við tveimum evnum. Sterkastu úrslitini fyri samansetingar og kyknur úr biofilmi komu frá kanningini frá 2020. Alt annað, eisini um hesin virknaður hevur týdning fyri bartonellosu hjá menniskjum, er framvegis ikki kannað.